陳科帆 熊域皎 焦家歡 袁術(shù)生

結(jié)核病具體的致病分子機(jī)制目前并不是十分清楚，研究發(fā)現(xiàn)人體免疫功能，特別是細(xì)胞免疫在其中發(fā)揮了關(guān)鍵作用[1]。疾病的不同階段細(xì)胞免疫分泌的細(xì)胞效應(yīng)因子可能發(fā)生改變，這些變化的細(xì)胞因子與疾病進(jìn)展相關(guān)聯(lián)，檢測(cè)這些免疫細(xì)胞因子有助于闡明宿主對(duì)抗結(jié)核分枝桿菌(MTB)的反應(yīng)機(jī)制，以及評(píng)估結(jié)核病的預(yù)后轉(zhuǎn)歸[2-3]。白細(xì)胞黏附分子(leukocyte adhesion molecules，LAM)CD44分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，主要參與異質(zhì)性粘附，例如與淋巴細(xì)胞結(jié)合后參與細(xì)胞偽足形成，促進(jìn)細(xì)胞穿過(guò)血管壁，同時(shí)對(duì)巨噬細(xì)胞活化及T、B淋巴細(xì)胞分化具有刺激作用。研究顯示，CD44參與了MTB與宿主免疫系統(tǒng)的相互作用，并參與到抗結(jié)核的機(jī)體免疫反應(yīng)中[4]。因此，本研究通過(guò)觀察活動(dòng)性肺結(jié)核患者外周血CD44表達(dá)及上下游相關(guān)細(xì)胞因子水平變化，探討CD44與活動(dòng)性肺結(jié)核病變發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

資料和方法

1.研究對(duì)象：采用回顧性研究方法，搜集2018年1月至2019年7月于樂(lè)山市人民醫(yī)院感染科治療的86例活動(dòng)性肺結(jié)核患者作為觀察組，其中，男52例(60.5%)，女34例(39.5%)；年齡范圍19～67歲，平均年齡(40.26±9.54)歲。另選取本院同期健康體檢者40名作為對(duì)照組，其中，男23名(57.5%)，女17名(42.5%)；年齡范圍20～66歲，平均年齡(40.22±9.46)歲。觀察組與對(duì)照組在性別分布(χ2=0.116，P=0.924)和年齡組成(t=0.107，P=0.932)方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

2.納入標(biāo)準(zhǔn)：活動(dòng)性肺結(jié)核診斷參照文獻(xiàn)[5]，初診初治患者。排除存在先天性肺臟發(fā)育異常者，并發(fā)惡性腫瘤者，并發(fā)糖尿病者，并發(fā)其他急、慢性感染性疾病或者自身免疫性疾病者。

3.外周血細(xì)胞因子表達(dá)水平檢測(cè)：抽取觀察組治療前和對(duì)照組外周血2 ml，1000×g離心10 min，取上層血清，-80 ℃保存待檢。觀察組均給予異煙肼、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酰胺強(qiáng)化治療 2 個(gè)月，異煙肼、利福平、乙胺丁醇鞏固治療4個(gè)月，并于治療6個(gè)月后抽取外周血2 ml，1000×g離心10 min，取上層血清，-80 ℃保存待檢。所有血液標(biāo)本送檢驗(yàn)科，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)CD44、γ-干擾素(IFN-γ)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)表達(dá)水平。CD44-ELISA試劑盒(批號(hào)：20181211)、IFN-γ-ELISA試劑盒(批號(hào)：20180914)和TNF-α-ELISA試劑盒(批號(hào)：20181203)購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作完成檢測(cè)，簡(jiǎn)述如下：每個(gè)樣品取待檢血清200 μl加入至96孔板，按照試劑盒要求將稀釋的酶標(biāo)記檢測(cè)抗體加入每個(gè)孔中，37 ℃孵育1 h，去除抗體檢測(cè)溶液，用試劑盒提供洗滌緩沖液洗滌平板3次，加入酶反應(yīng)底物，30 min后加入終止液，酶標(biāo)儀讀取405 nm波長(zhǎng)處吸光度值，對(duì)照試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算各樣品的表達(dá)水平。

結(jié) 果

1.檢測(cè)情況：觀察組治療前和治療6個(gè)月后CD44、TNF-α和IFN-γ表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組，觀察組治療6個(gè)月后CD44、TNF-α和IFN-γ表達(dá)水平均明顯低于治療前(表1)。觀察組CD44表達(dá)水平與TNF-α和IFN-γ表達(dá)水平呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r值分別為0.704和0.613，P值均<0.05)。

表1 觀察組和治療組CD44、TNF-α和IFN-γ表達(dá)水平的比較

2.預(yù)測(cè)價(jià)值：應(yīng)用ROC曲線(xiàn)分析CD44表達(dá)水平預(yù)測(cè)活動(dòng)性肺結(jié)核的價(jià)值，曲線(xiàn)下面積(AUC)為0.84(95%CI：0.77～0.91)，截?cái)嘀禐?6.74 μmol/L，診斷敏感度為90.3%，特異度為86.4%，見(jiàn)圖1。

圖1 CD44表達(dá)水平預(yù)測(cè)活動(dòng)性肺結(jié)核的ROC曲線(xiàn)

將觀察組患者按治療前CD44表達(dá)水平≥26.74 μmol/L和<26.74 μmol/L分為高濃度組(64例)和低濃度組(22例)。高濃度組治療2個(gè)月和6個(gè)月后痰菌陰轉(zhuǎn)率分別為76.6%(49/64)和95.3%(61/64)，均明顯高于低濃度組[分別為63.6%(14/22)和81.8%(18/22)]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為2.972和3.016，P值分別為0.045和0.038)。

討 論

本研究顯示，活動(dòng)性肺結(jié)核患者CD44表達(dá)水平明顯高于健康人群，而且經(jīng)積極抗結(jié)核治療后CD44表達(dá)會(huì)明顯降低。TNF-α和IFN-γ是巨噬細(xì)胞發(fā)揮抗菌活性的主要效應(yīng)分子[6]。本研究相關(guān)性分析顯示，活動(dòng)性肺結(jié)核患者CD44表達(dá)水平與TNF-α和IFN-γ水平呈正相關(guān)。張憲波等[4]研究顯示，TNF-α可以誘導(dǎo)CD44高表達(dá)，高表達(dá)的CD44又可以進(jìn)一步促進(jìn)IFN-γ釋放，形成正反饋。上述結(jié)果提示，CD44與其下游分子一起參與到機(jī)體免疫應(yīng)答抗結(jié)核的過(guò)程。由此可見(jiàn)，活動(dòng)性結(jié)核病階段機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)性增強(qiáng)，CD44也會(huì)相應(yīng)的表達(dá)增高。ROC曲線(xiàn)分析顯示，CD44取截?cái)嘀?6.74 μmol/L時(shí)，對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的診斷敏感度為90.3%，特異度為86.4%，提示了檢測(cè)CD44表達(dá)對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核診斷具有臨床價(jià)值。

研究發(fā)現(xiàn)，MTB感染時(shí)CD44 表達(dá)明顯增高，可增強(qiáng)機(jī)體免疫反應(yīng)[7]。Palaniappan等[8]研究發(fā)現(xiàn)，CD44的反應(yīng)性表達(dá)增加可以預(yù)示機(jī)體免疫對(duì)抗MTB的效果。筆者以CD44表達(dá)水平26.74 μmol/L為臨界值，將活動(dòng)性肺結(jié)核患者分為高濃度組和低濃度組，結(jié)果顯示，CD44高濃度組患者治療2個(gè)月后和6個(gè)月后痰菌陰轉(zhuǎn)率均明顯高于低濃度組，說(shuō)明了CD44高水平表達(dá)可預(yù)示患者好的預(yù)后。本研究顯示，經(jīng)過(guò)強(qiáng)化和鞏固抗結(jié)核治療后，活動(dòng)性肺結(jié)核患者CD44表達(dá)水平會(huì)相應(yīng)降低，可能是由于抗結(jié)核治療后機(jī)體細(xì)菌載量減少和炎癥反應(yīng)減輕，對(duì)CD44的刺激表達(dá)也就相應(yīng)減弱。CD44表達(dá)的詳細(xì)調(diào)控機(jī)制及其在機(jī)體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律還有待進(jìn)一步研究。