黃銳升，林麗敏，金 泰，李虹霓，黃奕霞，蘇 丹

(1.廣東省汕頭市中心醫(yī)院，中山大學(xué)附屬汕頭醫(yī)院眼科，廣東 汕頭 515031；2.廣東省汕頭市中心醫(yī)院，中山大學(xué)附屬汕頭醫(yī)院西藥庫，廣東 汕頭 515031)

干眼癥系因淚液分泌不足、蒸發(fā)過多或淚液中成分異常導(dǎo)致的眼部不適及視功能障礙[1]，主要表現(xiàn)為眼疲勞感、異物感以及干澀感。研究表明，炎性因子在干眼癥發(fā)生、進展過程中扮演關(guān)鍵角色，但具體機制尚未探明[2]。白細(xì)胞介素(interleukin，IL)1β參與免疫、炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)過程[3]。腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)能通過誘導(dǎo)致炎酶分子、活性氧自由基以及IL-1分泌來發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞趨化、黏附及炎性反應(yīng)時細(xì)胞遷移功能[4]。胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)主要參與機體細(xì)胞免疫過程[5]。目前，關(guān)于干眼癥患者淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平的報道較多，但其與淚膜破裂時間(break-up time,BUT)值、角膜熒光素染色(corneal fluorescein staining,FL)評分的關(guān)系鮮有報道。為此，本研究旨在探討干眼癥患者淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平與BUT值、FL評分的關(guān)系，報告如下。

1 資 料 與 方 法

1.1一般資料 選擇2017年1月—2020年1月廣東省汕頭市中心醫(yī)院收治的干眼癥患者120例為研究組，男性48例，女性72例，年齡35～75歲，平均(52.6±13.62)歲，病程2個月～2年，平均(1.18±0.31)年，體重指數(shù)(body mass index,BMI)為23.19±2.29。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合干眼癥診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡≤75歲；③患者家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心肝、肺、腎等臟器嚴(yán)重功能障礙患者；②近3個月眼部手術(shù)史及眼部活動性炎癥史患者；③合并系統(tǒng)干燥綜合征、角結(jié)膜化學(xué)傷、先天性無淚癥、眼瞼異常、先天性無淚腺等；④合并惡性腫瘤；⑤近3個月使用影響淚液分泌藥物；⑥合并精神疾病而無法配合完成研究者；⑦妊娠、哺乳期。另選取同期健康志愿者100例為對照組，男性42例，女性58例，年齡36～75歲，平均(52.62±13.62)歲，BMI 23.24±2.39，均行眼科檢查未見異常。2組性別、年齡、BMI差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2方法 2組受檢者均于首次檢查時采集檢測淚液樣本。輕拉受檢者下瞼結(jié)膜，于結(jié)膜囊中滴入60 μL無菌生理鹽水，囑受檢者輕微轉(zhuǎn)動眼球，使生理鹽水與淚液充分混合，于球結(jié)膜與穹隆結(jié)膜交界處輕微后壓，采用毛細(xì)玻璃管收集淚液，并立即置入凍存管內(nèi)，2 000 r/min，離心10 min，取上清液，-20 ℃冷存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平，試劑盒均購自上海信裕生物科技有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，并采用全波長酶標(biāo)儀(美國ThermoFisher公司產(chǎn)，型號為Multiskan Sky)于450 nm波長下測定吸光度(optical density,OD)值，并以標(biāo)準(zhǔn)曲線計算淚液樣本中的IL-1β、TNF-α、TSLP水平。

BUT測定：將20 g/L熒光素鈉涂抹于下瞼結(jié)膜囊中，閉眼以便熒光素均勻分布于角膜表面，然后暴露角膜，并以鈷藍(lán)光照射，于裂隙燈下觀察最后1次瞬目睜眼至淚膜上呈現(xiàn)的第1個破裂點時間，BUT值<10 s即為陽性，取3次檢測平均值作為最終結(jié)果納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計。FL評分測定：以1%熒光素鈉滴于下瞼結(jié)膜囊中，觀察熒光染色情況，眨眼幾次，于鈷藍(lán)光下觀察角膜4個不同象限染色情況，無染色記0分，散點狀染色記1分，密集點狀染色記2分，片狀染色記3分，總分為0～12分。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料比較采用獨立樣本t檢驗；相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析；診斷價值采用受試者工作特征(receiver operator characteristic curve,ROC)曲線分析，曲線下面積(area under curve,AUC)0.7～0.9表示具有一定準(zhǔn)確性，AUC>0.9表示準(zhǔn)確性較高。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12組淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平比較 研究組淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平比較Table 1 Comparison of IL-1β,TNF-α and TSLP between two groups

2.22組BUT值、FL評分比較 研究組BUT值明顯低于對照組，而FL評分明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平與BUT值、FL評分相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析顯示，淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平與BUT值呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.01)，與FL評分呈顯著正相關(guān)(P<0.01)，見表3。

2.4淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平對干眼癥的診斷價值 ROC曲線分析顯示，淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平診斷干眼癥的AUC為0.830、0.885、0.838。以ROC曲線靠左上方約登指數(shù)的最大切點作為最佳臨界值(IL-1β為90.485 ng/L，TNF-α為25.215 ng/L，TSLP為13.165 ng/L)。IL-1β診斷敏感度為67.5%,特異度為93.0%;TNF-α診斷敏感度為75.0%,特異度為88.0%;TSLP診斷敏感度為61.7%,特異度為91.0%。將淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平納入Logistic回歸模型，通過回歸系數(shù)得出三項聯(lián)合的數(shù)值計算公式為：三項聯(lián)合=IL-1β+(0.319/0.095)×TNF-α+(0.525/0.095)×TSLP，統(tǒng)計分析得出聯(lián)合數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，三項聯(lián)合診斷AUC為0.920，敏感度為90.0%,特異度為 94.0%，均高于IL-1β、TNF-α、TSLP單項檢測，提示聯(lián)合診斷價值較高，見表4,圖1。

表2 2組BUT值、FL評分比較Table 2 Comparison of BUT value and FL score between two groups

表3 淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平與BUT值、FL評分相關(guān)性Table 3 Correlation of IL-1β,TNF-α,TSLP levels in tear fluid with BUT value and FL score

圖1 淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平診斷干眼癥給的ROC曲線

表4 淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平對干眼癥的診斷價值Table 4 The diagnostic value of IL-1β, TNF-α and TSLP levels in tear fluid for dry eye

3 討 論

近年來，干眼癥發(fā)病率呈明顯升高趨勢[6]。研究表明，結(jié)膜上皮增生及炎癥反應(yīng)與淚膜穩(wěn)定性有關(guān)，而此類細(xì)胞因子受體介導(dǎo)炎癥反應(yīng)可能是各類干眼癥的共同發(fā)病基礎(chǔ)[7-8]。

IL-1β是具有活性的巨噬細(xì)胞分泌的具備免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子，是IL-1的主要表達形式，同時也是IL-6、IL-8、TNF-α等其他細(xì)胞因子的誘導(dǎo)物[9]。 趙亞東等[10]研究顯示，干眼癥患者結(jié)膜、角膜上皮、淚液中的IL-1β水平高于正常對照組。IL-1β水平升高會抑制神經(jīng)遞質(zhì)分泌，從而對神經(jīng)調(diào)控淚液分泌過程造成影響，減少淚液分泌，最終導(dǎo)致干眼癥的發(fā)生。腫瘤壞死因子主要由活化的巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，根據(jù)分泌來源不同分為TNF-α、TNF-β[11]。TNF-α在多種機體自身免疫病發(fā)生、進展中起到關(guān)鍵作用，且其廣泛參與了肝細(xì)胞急性期蛋白合成誘導(dǎo)、髓樣白血病細(xì)胞分化成巨噬細(xì)胞、細(xì)胞增殖分化、中性粒細(xì)胞吞噬、抗感染、殺傷抑制腫瘤細(xì)胞等過程[12]。TLSP是一類上皮細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，主要和樹突狀細(xì)胞表面其特異性受體結(jié)合，并通過信號通路將樹突狀細(xì)胞激活，誘導(dǎo)輔助T細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)及過敏反應(yīng)[13]。

本研究結(jié)果顯示，研究組淚液IL-1β、TNF-α、TLSP水平均顯著高于對照組，提示淚液IL-1β、TNF-α、TLSP等炎性介質(zhì)可能參與了干眼癥的發(fā)生、進展過程。研究組BUT值明顯低于對照組，F(xiàn)L評分顯著高于對照組。BUT值常用作角膜前淚膜穩(wěn)定性的評估指標(biāo)，F(xiàn)L評分為角膜結(jié)膜上皮細(xì)胞缺損程度的評估指標(biāo)，以上結(jié)果表明，干眼癥患者的淚膜穩(wěn)定性更低，角膜結(jié)膜上皮細(xì)胞缺損[14-15]。Pearson相關(guān)分析顯示，淚液IL-1β、TNF-α、TSLP水平均與BUT值呈顯著負(fù)相關(guān)，與FL評分呈顯著正相關(guān)，提示淚液IL-1β、TNF-α、TLSP水平升高導(dǎo)致了干眼癥患者淚膜穩(wěn)定性降低及眼表損傷。ROC曲線分析顯示，淚液IL-1β、TNF-α、TLSP水平均對干眼癥具有良好的診斷價值(AUC=0.830、0.885、0.838)，且三項聯(lián)合(AUC=0.920)診斷價值較高。

綜上所述，干眼癥患者淚液IL-1β、TNF-α、TLSP水平與BUT值、FL評分均顯著相關(guān)，IL-1β、TNF-α、TLSP水平升高導(dǎo)致淚膜穩(wěn)定性降低及眼表損傷，聯(lián)合檢測淚液IL-1β、TNF-α、TLSP水平可用于干眼癥的輔助診斷。