李先強(qiáng)，閆志，張玲，李寶國(guó)，馬艷妮

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南 250014； 2.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，濟(jì)南 250355）

全球共有10 種澤瀉屬植物，其中中國(guó)有澤瀉A、窄葉澤瀉和草澤瀉A三種。中藥澤瀉為澤瀉A［1］植物的干燥塊莖。中藥澤瀉是經(jīng)典名方澤瀉湯中的君藥［2–5］，具有利水滲濕、泄熱、化濁降脂的功效［6］，主要用于治療水腫脹滿、小便不利、濕熱澀痛痰飲眩暈等病。澤瀉的化學(xué)成分以原萜烷型四環(huán)三萜類為主［7–8］，其代表有23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇G、澤瀉醇B 及23-乙酰澤瀉醇B［9］等成分。近代藥理學(xué)研究表明［10–11］，澤瀉中三萜類化合物具有利尿、降血脂、降血壓、抗脂肪肝、抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。

目前研究澤瀉化學(xué)成分的方法主要有比色法［12］、高效液相色譜法［13］、超高效液相色譜法［14］及薄層掃描色譜法［15］。比色法分析結(jié)果準(zhǔn)確度不高，其余方法不夠簡(jiǎn)便快捷。

近年來(lái)，常溫常壓離子化技術(shù)已逐漸成為質(zhì)譜研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。典型代表有實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜(DART MS)［16］和電噴霧解吸電離（DESI）［17］。DART 具有以下優(yōu)點(diǎn)：可幾秒鐘分析固體粉末或液體樣品，直接、原位，無(wú)須任何預(yù)處理［16，18］；僅需要不足1 μL 液體或少許顆粒，就可以產(chǎn)生單電荷離子，譜圖解析更簡(jiǎn)單，無(wú)加合鹽離子產(chǎn)生，離子信號(hào)僅包括所有能離子化的待測(cè)組分，產(chǎn)生［M+H］+或［M–H］–離子；離子抑制效應(yīng)小，即使有高濃度鹽和基質(zhì)存在也可顯示強(qiáng)的離子信號(hào)；無(wú)溶劑效應(yīng)，使用任何溶劑溶解樣品，均可直接分析，操作非常簡(jiǎn)便。因此DART 自2005 年出現(xiàn)以來(lái)，在食品安全［19］、環(huán)境監(jiān)測(cè)、爆炸物檢測(cè)以及生物醫(yī)藥［20］等諸多研究領(lǐng)域均有廣泛應(yīng)用。筆者首次建立了DART MS 方法檢測(cè)澤瀉中三萜類化學(xué)成分，為澤瀉的快速分析和DART 在中藥材化學(xué)成分鑒定中的應(yīng)用提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與材料

DART 實(shí)時(shí)直接分析離子源：美國(guó)Ion Sense 公司。

飛行時(shí)間質(zhì)譜儀：6244 型，美國(guó)安捷倫科技有限公司。

澤瀉藥材：批號(hào)為120906，產(chǎn)地為福建，山東菏澤泰山中藥飲片有限公司。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 DART 參數(shù)

DART 正離子；氦氣體積流量：4 L／min；氣流溫度：350 ℃；軌道架移動(dòng)速率：0.3 mm／s 或手動(dòng)進(jìn)樣。

1.2.2 TOF 質(zhì)譜儀參數(shù)

碰撞誘導(dǎo)解離電壓：200 V；氣體流量：6 L／min；掃描方式：正離子全掃描。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1 樣品預(yù)處理

澤瀉粉末：澤瀉飲片粉碎，過(guò)0.15 mm（100 目）篩，取約0.2 g，精密稱定，作為試驗(yàn)固體樣品。

澤瀉提取液：取澤瀉0.5 g，精密稱定，加入70%甲醇超聲20 min，過(guò)濾，作為試驗(yàn)液體樣品。

1.3.2 DART–MS 法

質(zhì)譜儀的ESI 源用DART 離子源代替，分析時(shí)將澤瀉藥材粉末或提取液置于DART MS 離子源氣體流出口與質(zhì)譜進(jìn)樣口之間，在正離子模式下，樣品分子通過(guò)Penning 離子化產(chǎn)生分子離子，離子源通過(guò)電暈針高壓放電使氦氣流成為激發(fā)態(tài)等離子體，激發(fā)態(tài)氦原子與空氣中的水分子作用快速產(chǎn)生水分子離子，并進(jìn)一步生成水分子離子簇，然后水分子離子簇與樣品分子離子之間發(fā)生質(zhì)子轉(zhuǎn)移，得到質(zhì)子化的分子離子。最后待測(cè)樣品分子離子經(jīng)傳送管進(jìn)入質(zhì)譜儀進(jìn)一步分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的選擇

中藥澤瀉中的有效成分多為澤瀉醇及萜類化合物［21–22］，根據(jù)DART MS 技術(shù)的特點(diǎn)，選擇正離子模式進(jìn)樣，離子化溫度選擇350 ℃［23–24］。

2.2 澤瀉樣品總離子流質(zhì)譜圖

圖1、圖2分別為澤瀉固體樣品、液體樣品的總離子流質(zhì)譜圖。圖1 中m／z515、487 碎片離子峰與文獻(xiàn)中澤瀉樣品產(chǎn)生的［M+H］+峰一致［25］，該峰對(duì)應(yīng)的化學(xué)成分為23-乙酰澤瀉醇B 和澤瀉醇C。此外尚有m／z435、453 和495 等碎片離子。圖2 中m／z為491、475、473 的成分經(jīng)與報(bào)道的化學(xué)成分比對(duì)，確認(rèn)為澤瀉醇A、11-去氧澤瀉醇A 以及澤瀉醇B。

圖1 澤瀉固體樣品的總離子流圖

圖2 澤瀉液體樣品的總離子流圖

2.3 澤瀉樣品鑒定結(jié)果

將質(zhì)譜圖與文獻(xiàn)［26–28］中的化學(xué)成分相比較，結(jié)合化學(xué)式與相對(duì)分子質(zhì)量，澤瀉中的化學(xué)成分定性結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 澤瀉已鑒別出的組分

2.4 比對(duì)試驗(yàn)

參考文獻(xiàn)［27］，釆用高效液相色譜與飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC–TOF–MS)技術(shù)，在正離子檢測(cè)模式下用全掃描方式獲得高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)，所得質(zhì)譜數(shù)據(jù)與本實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)一致。說(shuō)明本方法切實(shí)可行。

3 結(jié)語(yǔ)

采用DART MS 法分別對(duì)中藥澤瀉粉末和澤瀉提取液進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)對(duì)質(zhì)譜圖分析，共鑒別出12種不同的化合物，可以據(jù)此對(duì)中藥澤瀉質(zhì)量進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。本方法不需要復(fù)雜的樣品前處理操作以及色譜分離過(guò)程，相比于傳統(tǒng)的色譜方法減少了試劑的消耗，具有檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)。全掃描模式下的實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜的特征圖譜蘊(yùn)含了豐富的信息，通過(guò)解析質(zhì)譜圖并與文獻(xiàn)信息相比對(duì)，可對(duì)樣品進(jìn)行全面表征，從而給樣品定性。DART MS 分析方法能夠給出中草藥成分的整體化學(xué)輪廓，可用于評(píng)價(jià)中草藥質(zhì)量的穩(wěn)定性，追溯基源，鑒別真?zhèn)危?0］，在快速評(píng)價(jià)中草藥質(zhì)量方面有著重要意義。該方法未采用對(duì)照品，其研究結(jié)果對(duì)不使用對(duì)照品進(jìn)行澤瀉的質(zhì)譜鑒別提供了參考依據(jù)。因其具有原位、簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，在快速真?zhèn)味ㄐ澡b別、高通量篩查或快速定量分析中具有優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用前景，可以在中藥材成分預(yù)期檢測(cè)中發(fā)揮重要的作用。