劉磊

（遼寧省阜新市第二人民醫(yī)院（阜新市婦產(chǎn)醫(yī)院）檢驗(yàn)科，遼寧 阜新123000）

肺炎鏈球菌是引起小兒肺炎的主要病原體，若未得到及時(shí)診治會(huì)引發(fā)腦膜炎、菌血癥等，嚴(yán)重者將出現(xiàn)多器官功能衰竭及死亡，故早期診斷肺炎鏈球菌并予以抗生素治療具有重要意義[1]。以往實(shí)驗(yàn)室檢查肺炎鏈球菌主要采用血培養(yǎng)和痰培養(yǎng)分離肺炎鏈球菌作為診斷依據(jù)，但肺炎鏈球菌生長(zhǎng)緩慢，鑒定時(shí)間較長(zhǎng)，且陽(yáng)性率較低，往往導(dǎo)致患兒錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)間，故尋找更為快捷有效的診斷方式已成為臨床研究的熱點(diǎn)[2]。痰革蘭染色檢驗(yàn)是一種簡(jiǎn)單快捷的檢驗(yàn)方法，但結(jié)果受檢驗(yàn)醫(yī)師的主觀影響。由于肺炎鏈球菌抗原是一種可溶性抗原，對(duì)尿液中的肺炎鏈球菌抗原進(jìn)行檢測(cè)可作為有力的輔助診斷依據(jù)。鑒于此，本研究旨在探討尿抗原聯(lián)合痰革蘭染色檢驗(yàn)在小兒肺炎鏈球菌肺炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2018年8月至2019年8月于本院就診的364例下呼吸道感染患兒，其中男206例，女158例；年齡0～6歲，平均（2.86±0.64）歲；病程7～16 d，平均病程（10.17±2.34）d。所有患兒近7 d未服用糖皮質(zhì)激素及免疫調(diào)節(jié)劑，排除先天免疫系統(tǒng)疾病、肺結(jié)核、支氣管哮喘者。

1.2 儀器與試劑Vitek2-Compact自動(dòng)化微生物鑒定儀、光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS）、二氧化碳孵育箱、溫箱、快速革蘭染色液（Oxioid）、瓊脂平板、麥康凱平板、巧克力平板（上海科瑪嘉微生物有限公司）、尿肺炎鏈球菌抗原試劑（BINAX）。

1.3 方法對(duì)所有患兒行痰培養(yǎng)、尿抗原檢測(cè)、痰革蘭染色鏡檢。痰培養(yǎng)：①痰標(biāo)本采集：醫(yī)囑患兒反復(fù)用清水漱口，對(duì)于痰液較少者可將高滲鹽水霧化吸入后拍背誘導(dǎo)排痰，將無(wú)菌棉簽伸入咽喉采集痰液。②分離培養(yǎng)：在痰標(biāo)本內(nèi)滴入少量0.9%氯化鈉溶液，攪拌混勻后制成均勻薄片，在光學(xué)顯微鏡下觀察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)目，對(duì)樣本進(jìn)行分類(lèi)：白細(xì)胞≥25個(gè)，鱗狀上皮細(xì)胞＜10個(gè)為A類(lèi)（完全合格樣本）；白細(xì)胞11～24個(gè)，鱗狀上皮細(xì)胞≥10個(gè)為B類(lèi)（可疑合格樣本）；白細(xì)胞≤10個(gè)，鱗狀上皮細(xì)胞≥10個(gè)為C類(lèi)（不合格樣本），其中A類(lèi)和B類(lèi)樣本可用于痰培養(yǎng)。對(duì)痰標(biāo)本采用無(wú)菌鹽水洗滌，促使痰液均質(zhì)化。將其接種于瓊脂平板、麥康凱平板和巧克力平板，放于二氧化碳孵育箱中35℃培養(yǎng)24 h，并用自動(dòng)化微生物鑒定儀鑒定。痰革蘭染色鏡檢：待其自然干燥后進(jìn)行革蘭染色鏡檢。尿抗原檢測(cè)：使用無(wú)菌尿杯采集患兒入院次日晨尿，靜置到室溫后，將尿肺炎鏈球菌抗原試劑提供的棉枝浸入尿液，并將其插入試劑條的兩孔間固定，在遠(yuǎn)離棉枝的空洞中滴入試劑，合并試劑條，讓棉枝上的尿液與硝酸纖維塑膜充分接觸，靜置15 min，若出現(xiàn)2條線則為陽(yáng)性，若只有1條線則為陰性，若未出現(xiàn)線條表明檢測(cè)失敗。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料組間率（%）比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)結(jié)果以痰培養(yǎng)為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，364例下呼吸道感染患兒中共檢出128例小兒肺炎鏈球菌肺炎，經(jīng)痰革蘭染色鏡檢感染者181例，未感染者183例，經(jīng)尿抗原檢測(cè)感染者139例，未感染者225例，兩種方法聯(lián)合檢測(cè)感染者146例，未感染者218例，見(jiàn)表1。

表1 檢測(cè)結(jié)果

2.2 診斷效能以痰培養(yǎng)為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，痰革蘭染色鏡檢聯(lián)合尿抗原檢測(cè)的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度高于痰革蘭染色鏡檢、尿抗原檢測(cè)單獨(dú)檢查，漏診率、誤診率低于痰革蘭染色鏡檢、尿 抗原檢測(cè)單獨(dú)檢查，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 診斷效能分析（%）

3 討論

目前，臨床主要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查、臨床癥狀、肺部X線片等綜合檢查診斷小兒肺炎鏈球菌肺炎，確診依據(jù)為呼吸道標(biāo)本分離的肺炎鏈球菌，但肺炎鏈球菌肺炎的早期病原學(xué)診斷較困難，導(dǎo)致患兒病死率較高，故尋找更有效的檢測(cè)方法具有重要意義[3]。臨床檢測(cè)肺炎鏈球菌的方法包括痰培養(yǎng)、血培養(yǎng)、痰涂片革蘭染色鏡檢、抗原檢測(cè)、聚合酶鏈反應(yīng)、活組織病理檢查等，其中痰培養(yǎng)和血培養(yǎng)是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但檢查時(shí)間較長(zhǎng)，且由于受培養(yǎng)溫度、接種時(shí)間等多種外在因素影響，導(dǎo)致其靈敏度、特異度較低，極易導(dǎo)致患兒錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)；活檢屬于有創(chuàng)性操作，技術(shù)要求較高，花費(fèi)高昂；聚合酶鏈反應(yīng)的結(jié)果易受基因缺失與突變的影響而發(fā)生漏診和誤診[4-5]。

本研究結(jié)果顯示，相較于痰革蘭染色鏡檢、尿抗原檢測(cè)的單獨(dú)檢查，二者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度均較高，漏診率、誤診率較低，表明痰革蘭染色鏡檢聯(lián)合尿抗原檢測(cè)適用于肺炎鏈球菌的早期診斷。痰革蘭染色鏡檢利用的肺炎鏈球菌屬于革蘭陽(yáng)性雙球菌，因其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多，經(jīng)染色處理后可呈現(xiàn)紫色，可與周?chē)h(huán)境清晰區(qū)分，在光學(xué)顯微鏡下可觀察到其形態(tài)是矛尖狀成雙排列，偶爾呈現(xiàn)短鏈狀，特征較為典型[6]。但其檢測(cè)結(jié)果受到標(biāo)本采集、送檢等外在因素影響可出現(xiàn)假陰性；在檢測(cè)中肺炎鏈球菌可能被黏液包裹或被白細(xì)胞吞噬導(dǎo)致著色困難出現(xiàn)漏診現(xiàn)象；部分肺炎鏈球菌的莢膜在抵抗白細(xì)胞吞噬時(shí)，可引起形態(tài)變化，特征失去典型性，較難分辨，故單獨(dú)檢測(cè)的診斷效能低于聯(lián)合檢測(cè)[7]。尿抗原檢測(cè)的主要原理是肺炎鏈球菌C多糖抗原可經(jīng)肺部的毛細(xì)血管循環(huán)流入代謝系統(tǒng)，并經(jīng)尿液排出體外，因該抗原具有可溶性，在尿液中具有穩(wěn)定含量，不受標(biāo)本采集、抗生素等影響，故用膠體金法對(duì)尿液中的抗原進(jìn)行檢測(cè)具有較高的診斷效能[8-9]。但尿抗原檢測(cè)的結(jié)果可能受接種肺炎鏈球菌疫苗的影響而出現(xiàn)假陽(yáng)性，且由于肺炎鏈球菌肺炎患兒的尿液中抗原可持續(xù)數(shù)周或數(shù)個(gè)月，故該項(xiàng)檢查無(wú)法判別患兒感染肺炎鏈球菌的時(shí)間，故臨床診斷需與痰革蘭染色鏡檢相結(jié)合[10]。

綜上所述，痰革蘭染色鏡檢聯(lián)合尿抗原檢測(cè)對(duì)肺炎鏈球菌診斷的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度均較高，可作為小兒肺炎鏈球菌肺炎臨床診斷的輔助手段。