楊先富，莫興虎，楊勝紅，楊政益，彭彩麗，吳通奎，袁曉娟

(黔東南州動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 凱里 556000)

小反芻獸疫(PPR)又稱羊瘟、小反芻獸假牛瘟等，是由小反芻獸疫病毒(Peste des petits ruminants virus，PPRV)引起的一種急性病毒性傳染病。該病毒主要感染山羊、綿羊等小反芻動物，常呈急性發(fā)作,病死率高[1]。一旦發(fā)生羊小反芻獸疫疫情，會對養(yǎng)羊生產(chǎn)造成很大威脅。為掌握黔東南州小反芻獸疫疫苗的免疫效果，為全州小反芻獸疫的防控提供重要依據(jù)，2020年下半年筆者等在黔東南州16個縣(市)的16個規(guī)模羊場采集羊血清樣品，進行抗體檢測，現(xiàn)將檢測結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 山羊血清與檢測試劑

山羊血清采集于黔東南州16個縣(市)的16個規(guī)模羊場，共計687份。小反芻獸疫ELISA抗體檢測試劑盒(批號：20200509)由深圳市康百得生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 免疫抗體檢測與結(jié)果判定

1.2.1 抗體檢測

1) 洗滌液配置。用蒸餾水將洗滌液10×(2號液)按1∶10稀釋為工作濃度洗滌液。

2) 樣品稀釋及加樣。用樣品稀釋液(5號液)將待檢血清按1∶100稀釋，每個樣品孔加100μL。

3) 加陰、陽性對照品。陰性對照2孔，每個孔陰性對照品(試劑盒內(nèi)提供)加入100 μL；陽性對照2孔，每個孔加陽性對照品(試劑盒內(nèi)提供)100 μL，蓋好封板膜，37℃避光反應(yīng)30 min。

4) 洗板。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，1 min/次，最后1次甩凈，拍干。

5) 加酶反應(yīng)。每孔加酶標(biāo)結(jié)合物(1號)100 μL，蓋好封板膜，37℃避光反應(yīng)30 min。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，1 min/次，最后1次甩凈，拍干。

6) 顯色反應(yīng)。按所需用量，臨用前取等體積底物溶液(3號液)和顯色液(4號液)充分混勻，每孔加100 μL，蓋好封板膜，37℃避光反應(yīng)15 min；

7) 終止反應(yīng)。加終止液(6號液)50 μL，用酶標(biāo)儀于450 nm波長讀取OD值。

1.2.2 結(jié)果判定 有效性判斷標(biāo)準(zhǔn):陰性對照孔OD值≤0.20(>0.2則試驗無效)，陽性對照孔OD值≥0.30(<0.3則試驗無效)?？贵w陽性利用S/P值判定。

S/P=樣品OD值/陽性對照平均OD值

樣品S/P≥0.2，判斷為小反芻獸疫抗體陽性；樣品S/P<0.2，判斷為小反芻獸疫抗體陰性。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)測定，陰性對照OD450nm平均值為0.06，小于0.20；陽性對照OD450nm平均值為0.91，大于0.30。說明此次抗體檢測試驗有效。

2.1 羊小反芻獸疫抗體合格率

從表1看出，在黔東南州16個規(guī)模羊場687份血清樣品中合格494份，免疫合格率為71.91%，達(dá)到國家合格標(biāo)準(zhǔn)(70%)，但各場小反芻獸疫免疫抗體合格率差異較大，達(dá)到國家合格標(biāo)準(zhǔn)以上的有7號場(73.33%)、2號場(80.00%)、14號場(80.00%)、10號場(91.11%)、8號場(92.00%)、13號場(93.94%)、9號場(98.00%)、16號場(98.00%)，而11號場、12號場、15號場免疫合格率均為100%；抗體合格率較低的有3號場(21.67%)、6號場(22.00%)、1號場(30.00%)、4號場(44.00%)、5號場(65.71%)。

表1 黔東南州羊場羊小反芻獸疫的免疫合格率與S/P值

2.2 S/P值

黔東南州16個規(guī)模羊場的S/P值平均為0.50，

其中1號、3號、4號、6號4個規(guī)模羊場的S/P<0.2，其余規(guī)模羊場的S/P>0.2，且11號、12號、15號3個規(guī)模羊場的S/P大于0.8。免疫抗體水平與S/P值呈正比，即免疫抗體水平越高S/P值越高；免疫抗體水平越低S/P值越低，小反芻獸疫疫情風(fēng)險就越高。

3 小結(jié)

小反芻獸疫疫苗免疫1次，一般保護期限為3年[2]。檢測結(jié)果表明，黔東南州16個規(guī)模羊場小反芻獸疫的免疫合格率為71.91%，達(dá)國家合格標(biāo)準(zhǔn)(70%)，但各場的免疫抗體合格率差異較大，且3號場、6號場、1號場、4號場、5號場均未達(dá)國家合格標(biāo)準(zhǔn)。免疫合格率較高(高于70%)的羊場，都制定了合理的小反芻獸疫免疫程序，經(jīng)常開展免疫抗體檢測，掌握免疫抗體水平變化情況，山羊受到嚴(yán)格的免疫保護；5個未達(dá)標(biāo)的羊場，可能是最后1次小反芻獸疫疫苗免疫時間接近或超過了3年，建議經(jīng)常開展免疫抗體檢測，根據(jù)抗體水平變化制定適合本場的免疫程序，使小反芻獸疫抗體合格率達(dá)到國家合格標(biāo)準(zhǔn)，避免或減少發(fā)生小反芻獸疫的風(fēng)險。