汪向明，嚴(yán)敏琴，盧林明，劉銀華，顧 倩，李佳嘉，梅晶晶

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率位于女性惡性腫瘤的第二位，也是女性惡性腫瘤死亡最常見的原因[1-2]。因缺乏可靠的生物學(xué)標(biāo)志物，70%的卵巢癌患者在確診時已為中晚期，5年生存率不足50%[3]。因此，目前探索新的早期病理分子生物學(xué)輔助診斷指標(biāo)和治療靶點并研發(fā)靶向藥物，是卵巢癌研究的熱點。長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA, LncRNA)是一種長度大于200個核苷酸非編碼RNA，在很多疾病特別是腫瘤中扮演著重要作用[4]。LncRNA尿路上皮癌胚抗原1(urothelialcarcinoma associated 1, UCA1)在多種惡性腫瘤中高表達，如乳腺癌和胃癌等，UCA1高表達可能作為預(yù)測這些腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后的分子標(biāo)志物[5]。但國內(nèi)關(guān)于UCA1在卵巢癌中的相關(guān)研究較少，因此本實驗采用qRT-PCR技術(shù)檢測48例卵巢癌、15例卵巢交界性腫瘤、20例卵巢良性腫瘤及20例癌旁正常組織中UCA1的表達，旨在探討UCA1在卵巢癌中的表達及在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機制，以期對卵巢癌的靶向治療提供新的理論支持與依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集2015年1月～2018年3月皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院/弋磯山醫(yī)院存檔的卵巢癌手術(shù)標(biāo)本48例，包括漿液性癌31例(圖1)，透明細胞癌12例(圖2)，黏液性囊腺癌5例(圖3)。患者年齡41～81歲，平均(55.08±9.66)歲。臨床分期按FIGO標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期12例，Ⅱ期11例，Ⅲ期25例。另收集同期15例卵巢交界性腫瘤[平均年齡(41.67±15.22)歲]、20例卵巢良性腫瘤[平均年齡(47.55±16.02)歲]、20例癌旁正常卵巢組織[平均年齡(56.15±16.43)歲]作為對照組。其中正常卵巢組織來源于子宮肌瘤行附件切除或輸卵管良性病變的患者。所有標(biāo)本病理診斷均經(jīng)兩位病理學(xué)專家確診，均為原發(fā)性卵巢癌?；颊咝g(shù)前均未接受化療及放療，術(shù)中取出的新鮮卵巢癌組織、交界性腫瘤、良性腫瘤及正常卵巢組織均立即處理，并于-80 ℃冰箱中保存待用。本次實驗已獲得我院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均知情同意。

①②③圖1 卵巢漿液性癌HE染色圖2 卵巢透明細胞癌HE染色 圖3 卵巢黏液性囊腺癌HE染色

1.2 主要試劑和器材IKAT10勻漿機，Thermo Arktik PCR儀，逆轉(zhuǎn)錄定量PCR(qRT-PCR)，NanoDrop 2000超微量分光光度計(美國Thermo Evolution公司)，Trizol試劑(美國Invitrogen公司)、無核酶水及PCR引物(Invitrogen公司)，RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(ABI公司)。RIPA裂解液、5×SDS-PAGE上樣緩沖液和BCA蛋白濃度測定試劑盒(北京中杉金橋公司)。

2 結(jié)果

2.1 不同卵巢組織中UCA1的表達48例卵巢癌組織中UCA1的平均表達量(12.90±2.60)均明顯高于卵巢交界性腫瘤(4.73±1.10)、卵巢良性腫瘤(2.85±0.99)、正常卵巢組織(2.30±1.13)(P均<0.05)；UCA1在卵巢交界性腫瘤中的表達高于卵巢良性腫瘤、正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢良性腫瘤與正常卵巢組織中UCA1的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，圖4)。

圖4 卵巢癌、卵巢交界性腫瘤、卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織中UCA1的表達量比較

2.2 卵巢癌中UCA1表達與臨床病理特征的關(guān)系UCA1表達與患者年齡、是否絕經(jīng)、病理學(xué)類型、有無腹水無關(guān)(P均>0.05)，但與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05，表1)。

表1 卵巢癌中UCA1表達與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 卵巢癌中UCA1表達與患者預(yù)后的關(guān)系以UCA1相對表達量的中位數(shù)值(13)為界點，將卵巢癌中UCA1表達量≥13為高表達組，<13為低表達組，進行生存分析。結(jié)果顯示，UCA1表達與卵巢癌患者預(yù)后密切相關(guān)，UCA1高表達患者具有更差的預(yù)后(HR=6.940，P<0.001，圖5)。

圖5 卵巢癌中UCA1表達與患者預(yù)后的關(guān)系

3 討論

卵巢癌是高致死性女性上皮源性惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅女性的身體健康。據(jù)統(tǒng)計，2018年美國新發(fā)卵巢癌22 240例，14 000例卵巢癌患者死亡[6]。2004～2016年中國卵巢癌患者的病死率呈逐年上升趨勢，2016年卵巢癌的病死率達2.41/10萬[7]。卵巢癌早期無特異性臨床癥狀，確診時已為中晚期。目前卵巢癌的治療主要是手術(shù)治療加放、化療，近年來雖然出現(xiàn)免疫治療等新的治療手段，但卵巢癌的病死率并未得到明顯改善，且該病具有發(fā)展迅速、易耐藥、易復(fù)發(fā)等特點[8]。故尋找卵巢癌早期診斷標(biāo)志物和調(diào)控其生物學(xué)特性的有效靶點，成為目前研究的迫切問題。

近年來，LncRNA在惡性腫瘤中的異常表達受到廣泛關(guān)注。LncRNA是一類非編碼RNA，主要存在于細胞內(nèi)。目前研究認為，LncRNA與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其參與多種惡性腫瘤的細胞基因轉(zhuǎn)錄、細胞增殖、細胞分化、細胞周期調(diào)控、凋亡、代謝、耐藥等生物學(xué)行為[9-10]。UCA1是在膀胱癌中檢測到的第一個致瘤性LncRNA，位于人類第19號染色體(19p13.12)[11]。近年來，國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，UCA1在膀胱癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、胃癌、肺癌等惡性腫瘤組織中表達上調(diào)，發(fā)揮了促癌基因的作用[12-13]。Duan等[14]運用RT-PCR、Western blot和免疫組化技術(shù)在56例口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)組織和細胞的體外和體內(nèi)實驗中發(fā)現(xiàn)，UCA1在OSCC組織和細胞中的表達明顯升高，其通過吸附miR-143-3p蛋白和上調(diào)下游基因MYO6，促進OSCC細胞的增殖和轉(zhuǎn)移。He等[15]在60例胃癌組織、2個胃癌細胞系(BGC-823和SGC-7901)和1個正常胃黏膜細胞系(GES-1)中的研究發(fā)現(xiàn)，UCA1在胃癌組織中的表達顯著高于正常胃黏膜組織。進一步分析胃癌組織中UCA1表達與臨床病理特征的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，UCA1表達與癌組織浸潤深度和臨床分期密切相關(guān)。相比較GES-1細胞系，UCA1在BGC-823和SGC-7901細胞系中表達明顯升高。而敲除UCA1顯著抑制了體外和體內(nèi)胃癌細胞的增殖和遷移能力，其主要是通過介導(dǎo)H3K27和SPRY1啟動子中的三甲基化。上述研究結(jié)果證實，UCA1具有潛在的靶向治療價值。最近國內(nèi)有學(xué)者對LncRNA與卵巢癌的關(guān)系進行研究報道，發(fā)現(xiàn)了多個在卵巢癌組織中異常表達的LncRNA[16-17]。但目前國內(nèi)外關(guān)于UCA1與卵巢癌關(guān)系的研究報道較少，主要是基于UCA1在卵巢癌細胞中的表達，迄今未見國內(nèi)有UCA1在卵巢癌組織中表達及功能研究的報道。Li等[18]應(yīng)用qRT-PCR方法在31例卵巢癌組織和5個卵巢癌細胞系、1個正常卵巢上皮細胞系中研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組織中UCA1表達水平顯著高于正常卵巢組織，且卵巢癌細胞系中UCA1表達水平顯著高于正常卵巢上皮細胞系，呈特異性表達(P<0.05)。上述研究結(jié)果說明，UCA1與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本實驗結(jié)果顯示，48例卵巢癌組織中UCA1的平均表達量(12.90±2.60)均明顯高于卵巢交界性腫瘤組織(4.73±1.10)、卵巢良性腫瘤(2.85±0.99)、正常卵巢組織(2.30±1.13)(P均<0.05)；UCA1在卵巢交界性腫瘤組織中的表達高于卵巢良性腫瘤、正常卵巢組織(P均<0.05)；卵巢良性腫瘤與正常卵巢組織中UCA1的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。以上結(jié)果顯示，卵巢癌組織中UCA1表達上調(diào)，提示UCA1表達與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。為進一步探討UCA1與卵巢癌的關(guān)系，本實驗對UCA1表達與卵巢癌臨床病理特征進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示卵巢癌組織中UCA1表達與患者年齡、是否絕經(jīng)、病理學(xué)類型、有無腹水無關(guān)(P均>0.05)，與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。進一步生存分析結(jié)果顯示，UCA1表達與卵巢癌患者預(yù)后密切相關(guān)，提示UCA1高表達卵巢癌患者具有更差的預(yù)后(HR=9.056，P<0.001)。上述結(jié)果顯示，卵巢癌患者分期越高且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，UCA1的表達亦越高，表明UCA1與卵巢癌的惡性程度密切相關(guān)，卵巢癌中UCA1高表達與患者預(yù)后不良有關(guān)，故UCA1可能是卵巢癌臨床治療的潛在靶向和預(yù)后不良的分子標(biāo)志物。

綜上所述，本實驗結(jié)果提示，UCA1在卵巢癌組織中表達上調(diào)，并與臨床分期和預(yù)后密切相關(guān)，表明UCA1可能作為判斷卵巢癌惡性程度和患者預(yù)后的分子標(biāo)志物。然而，其在卵巢癌中發(fā)揮生物學(xué)功能的確切作用機制尚待深入探究。