周茂超, 黃艷娜, 段賽菲, 束仕元, 唐雪明*

(1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院， 上海 201306； 2.上海農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所， 上海 201106)

玉米是我國(guó)的主要糧食、飼料與工業(yè)原料作物，對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要作用。隨著玉米地位的提升，提高玉米的品質(zhì)和總產(chǎn)量已經(jīng)成為我國(guó)農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要研究方向。影響玉米產(chǎn)量的重要因素之一是土傳病害的侵染，因此抑制病害的發(fā)生是提高玉米產(chǎn)量的關(guān)鍵。玉米莖腐病又稱莖基腐病或青枯病，是世界玉米產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生的一種土傳病害，也是我國(guó)玉米產(chǎn)區(qū)的主要病害之一[1]。目前對(duì)于該病害的防治主要是協(xié)調(diào)運(yùn)用生物防治和化學(xué)防治等措施。

種衣劑是將一種或多種活性成分與粘合劑和著色劑結(jié)合的組合物，在種子消毒、緩釋藥肥、防治病蟲(chóng)鼠害、提高作物抗逆性和降低環(huán)境污染等方面發(fā)揮著重要作用。而生物種衣劑是以生物制劑為有效成份的一種新型環(huán)保種衣劑，含有對(duì)作物有益的微生物或其分泌物，如木霉菌、根瘤菌，固氮菌等。根據(jù)生物菌類之間的拮抗原理，篩選有益的拮抗菌，以抵抗有害病菌的繁殖、侵害，從而達(dá)到防病的目的。鑒于其環(huán)境友好性和可持續(xù)發(fā)展性，目前具有較好的應(yīng)用潛力和價(jià)值。Zeng等[2]研究發(fā)現(xiàn)，由天然多糖聚合物和其他添加劑組成的玉米種衣劑對(duì)玉米紋枯病的防治率達(dá)到93.72%，抗害蟲(chóng)率達(dá)81.29%，玉米增產(chǎn)17.75%。Wu等[3]研究發(fā)現(xiàn)，含有根際促生菌Klebsiellaoxtoca和Bacillussp.的生物種衣劑可以將棉花種子的發(fā)芽率提高11.3%，也提高了一些主要的植物防御酶活性。目前市場(chǎng)上所使用的玉米種衣劑大多數(shù)是農(nóng)藥型種衣劑，許多種衣劑產(chǎn)品存在藥劑老化、性狀不穩(wěn)定、包衣脫落率高等問(wèn)題[4]，并且微生物在玉米種衣劑上的應(yīng)用相對(duì)少[5]。因此，研究生物種衣劑對(duì)于玉米病害的防治具有十分重要的意義。本研究從微生物菌種資源庫(kù)中篩選出既有生防作用又有促生效果的菌株，將其與其他助劑一起配制成環(huán)保的生物種衣劑，應(yīng)用于盆栽玉米種植中，探究其對(duì)玉米苗期生長(zhǎng)的影響。本研究成果可為該生物種衣劑的生產(chǎn)和應(yīng)用提供參考和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1供試菌株和玉米種子玉米莖腐病病原菌為禾谷鐮孢菌(Fusariumgraminearum)，待篩選拮抗菌包括TXM-1貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)、TXM-2解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、TXM-3解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)、TXM-4短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)、TXM-5枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、TXM-7蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)、TXMT-2里氏木霉(Trichodermareesei)、TXMT-3里氏木霉(T.reesei)、TXMT-4哈茨木霉(Trichodermaharzianum)和TXMT-5綠色木霉(Trichodermaviride)10個(gè)菌株。以上菌株均由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所唐雪明研究團(tuán)隊(duì)篩選提供。供試玉米品種為‘申科糯1號(hào)’，種子由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院莊行基地提供。

1.1.2培養(yǎng)基PD液體培養(yǎng)基：葡萄糖20 g，馬鈴薯200 g，加水定容至1 L。PDA培養(yǎng)基：葡萄糖20 g，馬鈴薯200 g，瓊脂粉20 g，加水定容至1 L。LB液體培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化鈉10 g，加水定容至1 L。MKB培養(yǎng)基：酪蛋白氨基酸5 g，甘油15 mL，K2HPO42.5 g，MgSO4·7H2O 2.5 g，加水定容于1 L。培養(yǎng)基均在121 ℃滅菌后使用。

1.1.3主要試劑及溶液的制備CAS檢測(cè)液：1 mmol·L-1鉻天青，4 mmol·L-1十六烷基三甲基溴化銨，0.1 mmol·L-1FeCl3溶液。Salkowski試劑：0.5 mol·L-1FeCl3與濃硫酸按體積比1∶20混合，加入500 mL水混合均勻。

成膜劑助劑制備：將海藻酸鈉溶液與聚乙烯醇溶液按照一定的比例混合，再加入5 g·L-1膨潤(rùn)土和1 g·L-1苯甲酸鈉，用玻璃棒攪拌混勻。

主要試劑：葡萄糖、瓊脂粉、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、酪蛋白氨基酸、甘油、K2HPO4、MgSO4·7H2O 、濃硫酸，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。鉻天青、十六烷基三甲基溴化銨、FeCl3，購(gòu)自上海生工生物工程股份有限公司。成膜劑和助劑：聚乙烯醇(polyvinyl alcohol)、海藻酸鈉(sodium alginate)、苯甲酸鈉(sodium benzoate)，購(gòu)自上海生工生物工程股份有限公司。膨潤(rùn)土(bentonite)、著色珠光粉，購(gòu)自深圳市航彩化工有限公司。

1.1.4主要儀器Evolution 60紫外分光光度計(jì)(美國(guó)賽默飛世爾科技公司)，ZWY-240搖床(上海智城分析儀器制造有限公司)，ZHJH-C1112C型超凈工作臺(tái)(上海智城分析儀器制造有限公司)，DHP-9272型培養(yǎng)箱(太倉(cāng)市華利達(dá)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，XTL-208C型生物顯微鏡(上海明茲精密儀器有限公司)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1拮抗菌的篩選用打孔器分別在木霉和病原菌上打孔，各挑一塊至平板兩側(cè)的中央，間距5～6 cm。芽孢桿菌則用移液槍頭點(diǎn)至距離病原菌塊2～3 cm處，放置于28 ℃培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)，以單獨(dú)培養(yǎng)的病原菌平板為對(duì)照。培養(yǎng)3～5 d后，測(cè)量對(duì)照組病原菌菌落的直線生長(zhǎng)距離DCK、對(duì)峙培養(yǎng)組病原菌菌落的直線生長(zhǎng)距離DS，用以下公式計(jì)算抑菌率。

(1)

1.2.2菌株的促生效果檢測(cè)菌株鐵載體的測(cè)定采用CAS法[6]。菌株于MKB培養(yǎng)基培養(yǎng)24～48 h，10 000 r·min-1離心10 min，取上清液稀釋10倍，加入等體積CAS檢測(cè)液并混合，靜置1 h后于630 nm檢測(cè)吸光度A。將培養(yǎng)基稀釋10倍后與CAS等體積混合測(cè)得吸光度Ar，用以下公式計(jì)算鐵載體活性。

(2)

吲哚乙酸(indole-3-acetic acid，IAA)的測(cè)定采用Salkowski試劑比色法[7]：將培養(yǎng)2～3 d的菌懸液5 000 r·min-1離心10 min，上清液與檢測(cè)液按1∶2比例混勻，在暗處放置30 min后測(cè)其在530 nm處吸光值，離心的空培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。

1.2.3菌株對(duì)玉米種子發(fā)芽的影響試驗(yàn)將玉米種子浸在1%NaClO溶液10 min，進(jìn)行表面消毒，然后用無(wú)菌水清洗2～3次，洗去NaClO殘留液。將108cfu·mL-1的TXM-1和TXM-2菌液稀釋100、200、400倍，分別標(biāo)為TXM-1-100、TXM-1-200、TXM-1-400和TXM-2-100、TXM-2-200、TXM-2-400，用不同濃度菌液浸泡種子3 h后晾干，置于有兩層浸濕濾紙的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，室溫培養(yǎng)48 h，每個(gè)重復(fù)10粒玉米，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。7 d后測(cè)量胚芽與胚根長(zhǎng)度，計(jì)算發(fā)芽率，以浸在無(wú)菌水中的種子作為對(duì)照(CK)。

1.2.4成膜劑理化性能的測(cè)定選用海藻酸鈉(SA)和聚乙烯醇(PVA)作為成膜劑，將SA和PVA分別按照90%SA+10%PVA、80%SA+20%PVA、70%SA+30%PVA、60%SA+40%PV、50%SA+50%PVA、40%SA+60%PVA、30%SA+70%PVA、20%SA+80%PVA、10%SA+90%PVA共9個(gè)體積分?jǐn)?shù)配制藥劑。將配置好的藥劑于規(guī)格5 cm×15 cm的玻板上流延成膜，置于烘箱烘干后，用光學(xué)顯微鏡觀察其表面。將玉米種子先用75%乙醇表面消毒10 min，再置于超凈臺(tái)通風(fēng)口風(fēng)干。按照藥種質(zhì)量體積比1∶10加入到燒杯中，攪拌混勻進(jìn)行手動(dòng)包衣。置于紗布上，至種子表面干燥不粘連，包衣后計(jì)時(shí)，測(cè)定成膜時(shí)間。包衣均勻度(uniformity rate of coating，D)和包衣脫落率(shedding rate of coating，X)的測(cè)定參考熊海蓉等[8]方法。隨機(jī)取出10和100粒包衣種子，分別置于兩個(gè)錐形瓶中，按照每顆種子0.4 mL加入乙醇，搖動(dòng)1 min，在恒溫箱中放置20 min，每隔5 min搖動(dòng)一次，每次30 s。取出冷卻至室溫，將液體稀釋相同倍數(shù)，在550 nm下測(cè)定吸光度，根據(jù)公式(3)計(jì)算包衣均勻度(D)。將包衣種子置于恒溫箱內(nèi)烘15 min，使衣膜固化，取出室溫冷卻30 min，準(zhǔn)確稱其質(zhì)量，再轉(zhuǎn)入250 mL錐形瓶中，在振蕩器上振蕩1 h。將完整的種子取出，稱其質(zhì)量，根據(jù)公式(4)計(jì)算包衣脫落率(X)。

(3)

式中，A1是10顆包衣種子用乙醇溶解衣膜稀釋后的吸光度值，A2是100粒包衣種子用乙醇溶解衣膜稀釋后的吸光度值。

(4)

式中,M1是包衣前的種子質(zhì)量，M2是包衣后振蕩前的種子質(zhì)量，M3是振蕩后包衣種子質(zhì)量。

1.2.5成膜劑對(duì)玉米種子發(fā)芽和苗期生長(zhǎng)及菌株活性的影響試驗(yàn)將玉米種子浸泡在75%乙醇中進(jìn)行表面消毒，風(fēng)干。用90%SA+10%PVA、60%SA+40%PV、30%SA+70%PVA和10%SA+90%PVA配比的成膜劑助劑對(duì)玉米種子進(jìn)行包衣(比例根據(jù)成膜時(shí)間而定)，最后置于兩層浸濕濾紙的發(fā)芽盒內(nèi)，常溫培養(yǎng)。每個(gè)處理10顆種子，3個(gè)重復(fù)。7 d后，計(jì)算發(fā)芽率；14 d后，測(cè)量根長(zhǎng)、莖長(zhǎng)、葉長(zhǎng)、葉寬，并計(jì)算種子活力指數(shù)(viability index，VI)[9]。

VI=(莖長(zhǎng)+根長(zhǎng))×發(fā)芽率

(5)

將4個(gè)配比的成膜劑助劑溶液與稀釋100倍的發(fā)酵液按照體積比1∶1混合均勻，密封放于37 ℃培養(yǎng)箱中5 d，以無(wú)菌水與稀釋10倍的發(fā)酵液1∶1混合液為對(duì)照，通過(guò)稀釋平板計(jì)數(shù)法計(jì)算活菌數(shù)，以活菌下降率判斷成膜劑助劑對(duì)菌株活性的影響。

活菌下降率=

(6)

1.2.6生物種衣劑的制備及其對(duì)玉米種子及苗期的影響將90%SA+10%PVA配比的成膜劑助劑溶液中，加入TXM-1和TXM-2菌液，配制BSCA-1和BSCA-2生物種衣劑。具體如下：稱取各原料，先將成膜劑和增稠劑放入容器中，加入一定量無(wú)菌水，沸水浴直至溶解成粘稠狀，冷卻至40～50 ℃；再加入除菌劑外的其他原料，混合攪拌均勻；最后加入107cfu·mL-1的TXM-1、TXM-2菌液，充分混合攪拌均勻。將玉米種子表面消毒10 min，置于超凈臺(tái)中風(fēng)干。按照藥種比1:10稱取種衣劑和種子，倒入燒杯中，搖動(dòng)燒杯手動(dòng)包衣，至種子表面顏色均勻，晾干。

將包衣種子播種于花盆中，每盆10粒，每個(gè)處理3次重復(fù)，以未包衣種子為對(duì)照。分別在第3、7 d，計(jì)算發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率和種子活力指數(shù)，14 d測(cè)定根長(zhǎng)、根數(shù)、莖長(zhǎng)、地上株高、植株鮮重和干重。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 23.0 對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析，用Origin 8.5 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同拮抗菌株對(duì)病原菌的影響

研究發(fā)現(xiàn)，6株菌種有明顯抑菌效果，分別為芽孢桿菌TXM-1、TXM-3、TXM-4、TXM-5、TXM-2和木霉TXMT-3(表1)，效果最好的是TXM-2，抑菌率達(dá)到23.11%，6個(gè)菌株對(duì)病原菌的抑制作用表現(xiàn)為 TXM-2>TXM-3>TXMT-3>TXM-5>TXM-4>TXM-1。

表1 不同菌株對(duì)病原菌的抑制結(jié)果Table 1 Inhibitory effect of different strains on pathogenic bacteria

2.2 菌株的促生效果

有研究顯示菌株的促生特性與其產(chǎn)IAA能力有關(guān)[10]，鐵載體具有生物防治作用[6]，篩選結(jié)果(圖1)發(fā)現(xiàn)，有抑菌效果的TXM-1、TXM-2、TXM-3、TXM-4、TXM-5、TXM-7共6個(gè)菌株均有產(chǎn)鐵載體和IAA能力，TXM-2的鐵載體活性最高，達(dá)到15.8個(gè)活性單位。TXM-1的IAA含量最高，為9.3 μg·mL-1。綜合菌株的抑菌作用和促生效果，選擇TXM-2解淀粉芽孢桿菌和TXM-1貝萊斯芽孢桿菌進(jìn)行進(jìn)下一步研究。

注：圖中不同小寫(xiě)字母表示差異在P<0.05水平顯著。Note: Different lowercase letters in the figure indicate significant differences between different treatments at P<0.05 level.圖1 不同菌株的促生生理特性Fig.1 Physiological activities of different strains

2.3 菌株濃度對(duì)玉米種子發(fā)芽的影響

由表2可知，不同濃度TXM-2和TXM-1菌液浸泡的玉米種子發(fā)芽率均顯著高于對(duì)照。稀釋100倍TXM-2處理的玉米種子發(fā)芽率較CK顯著提高了29%，200倍和400倍處理均顯著提高了40%；稀釋100、200和400倍TXM-1處理的玉米種子發(fā)芽率分別較CK顯著提高了60%、50%和64%。

TXM-2和TXM-1菌液處理的種子胚芽和胚根長(zhǎng)度均較對(duì)照長(zhǎng)。稀釋100、200倍TXM-2的胚芽長(zhǎng)度分別較CK顯著提高了46%和25%，而稀釋400倍TXM-2處理的胚芽長(zhǎng)度與CK無(wú)顯著差異。稀釋100、200和400倍TXM-2處理的玉米胚根長(zhǎng)度分別較CK顯著提高了25%、61%、28%。稀釋100、200和400倍TXM-1處理的玉米種子胚芽分別較CK顯著提高了59%、38%、18%,胚根長(zhǎng)度分別較CK顯著提高了30%、72%、64%。綜合來(lái)看，TXM-2和TXM-1的最佳稀釋濃度均為200倍，對(duì)玉米種子發(fā)芽有顯著的促生作用。

表2 不同濃度菌液處理的玉米種子發(fā)芽性狀Table 2 Germination indexes of maize treated with different concentrations of bacterial strains

2.4 成膜劑比例的確定

2.4.1不同配比成膜劑的理化性質(zhì)從玻板的表面看出，海藻酸鈉與聚乙烯醇不同比例制作的成膜劑中，10%SA+90%PVA處理的氣泡較少，光學(xué)顯微鏡觀察也發(fā)現(xiàn)，其表面較平滑，沒(méi)有凹陷(圖略)。由表3看出，不同成膜劑的成膜時(shí)間均在10 min以內(nèi)，包衣均勻度均在90%以上，包衣脫落率均在7%以內(nèi)，成膜性能較好。通過(guò)三種性能的綜合評(píng)價(jià)，挑選了90%SA+10%PVA、60%SA+40%PVA、30%SA+70%PVA、10%SA+90%PVA四種配比用于進(jìn)一步研究。

表3 不同比例成膜劑的理化性能Table 3 Physical and chemical properties of film forming agents with different proportions

2.4.2不同配比成膜劑包衣對(duì)玉米種子發(fā)芽及苗期生長(zhǎng)的影響90%SA+10%PVA、60%SA+40%PVA、30%SA+70%PVA、10%SA+90%PVA及CK的成膜劑的包衣種子發(fā)芽率和活力指數(shù)結(jié)果(圖2)顯示，成膜劑包衣對(duì)于玉米種子的發(fā)芽率和活力指數(shù)沒(méi)有不利影響，60%SA+40%PVA、30%SA+70%PVA和10%SA+90%PVA成膜劑顯著提高了玉米種子的發(fā)芽率和種子活力指數(shù)，其中10%SA+90%PVA處理效果最佳，其發(fā)芽率較CK顯著增加19%，種子活力指數(shù)顯著提高79%。成膜劑包衣對(duì)玉米苗期生長(zhǎng)有一定的促生作用(表4)。90%SA+10%PVA、30%SA+70%PVA和10%SA+90%PVA 處理的玉米根長(zhǎng)較CK顯著增加；30%SA+70%PVA 處理的玉米莖長(zhǎng)較CK顯著提高；60%SA+40%PVA和10%SA+90%PVA 處理的玉米葉長(zhǎng)較CK顯著增加；不同處理的葉寬沒(méi)有顯著差異?？梢?jiàn)，不同處理中，10%SA+90%PVA處理的根長(zhǎng)和葉長(zhǎng)均最高，分別較CK提高了32%、20%。

注：不同小寫(xiě)字母表示同一指標(biāo)不同處理間差異在P<0.05水平顯著。Note: Different lowercase letters of the same index indicate significant differences between different treatments at P<0.05 level.圖2 不同比例成膜劑包衣的玉米發(fā)芽率和種子活力指數(shù)Fig.2 Germination rate and seed vigor index of maize coated with different proportions of film forming agents

表4 不同比例成膜劑對(duì)玉米苗期生長(zhǎng)的影響Table 4 Effects of different proportions of film forming agents on the growth of maize seedlings

2.4.3不同配比成膜劑對(duì)菌株活性的影響由表5可以看出，成膜劑的添加均引起TXM-1和TXM-2的活菌下降，且隨著成膜劑中PVA比例的增加，活菌下降率逐漸下降。其中10%SA+90%PVA成膜劑的活菌下降率最低，表明該比例可以較好地維持菌株活性，從而有利于種衣劑的貯藏。

2.5 BSCA-1和BSCA-2種衣劑對(duì)玉米種子及苗期的影響

由表6可知，BSCA-1和BSCA-2種衣劑處理的玉米種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、活力指數(shù)均較CK顯著提高，發(fā)芽率分別提高17%和13%。從苗期生長(zhǎng)來(lái)看，與裸種相比，經(jīng)BSCA-1種衣劑處理的玉米苗的根長(zhǎng)、莖長(zhǎng)、地上株高、鮮重和干重分別較CK顯著提高了43%、27%、19%、79%和78%；經(jīng)種衣劑BSCA-2處理的玉米苗的根長(zhǎng)、莖長(zhǎng)、地上株高、鮮重和干重分別顯著提高了41%、27%、19%、73%和61%。未包衣的種子根系稀疏，包衣后的種子根系粗壯且茂密，表明包衣后對(duì)玉米種子有明顯的促生作用。

表5 不同比例成膜劑對(duì)活菌下降率的影響Table 5 Effects of different proportions of film forming agents on live bacterial decline rate of strains

3 討論

對(duì)玉米土傳病害的綜合防治一般分為化學(xué)防治和生物防治。使用化學(xué)農(nóng)藥簡(jiǎn)單高效，但是會(huì)對(duì)環(huán)境造成一定的影響。利用微生物防治病害成本低、無(wú)殘毒。而且這些有益微生物不僅能阻止病原菌的生長(zhǎng)和侵入，還能在植物根際形成優(yōu)勢(shì)菌群，促進(jìn)植物生長(zhǎng)。微生物作為生物種衣劑的有效成分，也是種衣劑制備的關(guān)鍵方向。本研究通過(guò)平板對(duì)峙試驗(yàn)篩選到6株對(duì)玉米莖腐病病原菌均有較強(qiáng)抑制作用的菌株，分別為解淀粉芽孢桿菌TXM-2、解淀粉芽孢桿菌TXM-3、枯草芽孢桿菌TXM-5、短小芽孢桿菌TXM-4、貝萊斯芽孢桿菌TXM-1和里氏木霉TXMT-3，其中解淀粉芽孢桿菌TXM-2的抑菌效果最好。大多數(shù)生防菌是從土壤或者植株根際中分離，且對(duì)莖腐病病原菌有拮抗作用的細(xì)菌以芽孢桿菌為主，Li等[11]從玉米根際分離到一株能減少秸稈腐爛的芽孢桿菌BV23，其在禾本科植物上的抑菌作用最強(qiáng)，抑制66.2%菌絲生長(zhǎng)，抑制86.7%孢子產(chǎn)生。真菌以木霉的效果較明顯，吳曉儒等[12]通過(guò)木霉菌不同顆粒劑配方來(lái)計(jì)算對(duì)玉米莖腐病的防效，并同時(shí)進(jìn)行多個(gè)基地的田間試驗(yàn)，結(jié)果表明木霉顆粒劑具有良好的生物防治效果及增產(chǎn)作用。這些生物菌劑的應(yīng)用可以減少或者代替化學(xué)農(nóng)藥的使用。

表6 生物種衣劑包衣對(duì)玉米種子發(fā)芽和苗期生長(zhǎng)的影響Table 6 Effects of biological seed coating agents on seed germination and seedling the growth of maize

植物根際與其營(yíng)養(yǎng)的吸收利用直接相關(guān)，產(chǎn)生植物激素(IAA)和鐵載體等生理活性物質(zhì)與植物的根際營(yíng)養(yǎng)密切相關(guān)[13]。有研究表明鐵載體和吲哚乙酸可以修復(fù)被重金屬[14]和多環(huán)芳烴[15]污染的土壤，因而它們也具有修復(fù)土壤的潛力，是有較好應(yīng)用前景的生物制劑。本研究通過(guò)促生生理指標(biāo)的測(cè)定篩選到6株具有產(chǎn)鐵載體和IAA能力的菌株，其中TXM-2和TXM-1兩株菌的含量均較高，并且通過(guò)種子發(fā)芽試驗(yàn)，驗(yàn)證了其對(duì)種子發(fā)芽及幼苗生長(zhǎng)的促進(jìn)作用。結(jié)合抑菌作用和促生生理活性的比較，選擇具有抑菌和促生功能的TXM-2和TXM-1菌株。

成膜劑是種衣劑的重要部分，其決定了種衣劑產(chǎn)品的包衣性能[16]。聚乙烯醇能形成表面光滑、強(qiáng)韌的膜。海藻酸鈉中大量的羥基和羧基可與聚乙烯醇的羥基形成氫鍵，從而形成性能較好的混合膜，并且還具有促進(jìn)種子萌發(fā)的作用[17]。膨潤(rùn)土作為種衣劑的助劑，本身表面含有大量的羥基，與海藻酸鈉也會(huì)形成氫鍵作用[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，作為種衣成膜劑成分，90%SA+10%PVA處理的玉米種子發(fā)芽和苗期生長(zhǎng)最佳，菌株TXM-1和TXM-2的活性下降率最低。因此，成膜劑90%SA+10%PVA具有協(xié)同促生和減緩菌株活性下降的作用。從目前玉米的生物種衣劑研究現(xiàn)狀來(lái)看，芽孢桿菌、木霉菌、黃曲霉等菌株均可作為活性成分。張婷[19]將以木霉菌為活性成分的種衣劑應(yīng)用于玉米種子中，對(duì)于玉米出苗和生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，并且對(duì)根腐病有較好的防治效果。Cesare 等[20]研究的玉米種衣劑活性成分由不產(chǎn)黃曲霉毒素的黃曲霉菌株和兩種傳統(tǒng)農(nóng)藥復(fù)合而成，發(fā)現(xiàn)該種衣劑能夠降低玉米粒中黃曲霉毒素的含量。本研究結(jié)合菌株的抑菌和促生特性，確定以貝萊斯芽孢桿菌TXM-1和解淀粉芽孢桿菌TXM-2分別為活性成分配制而成的兩種生物種衣劑BSCA-1和BSCA-2，具有良好的促進(jìn)玉米種子發(fā)芽能力；結(jié)合盆栽試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這兩種生物種衣劑在保證拮抗病原菌生長(zhǎng)的同時(shí)，還可促進(jìn)玉米的苗期生長(zhǎng)，然而還有待大田試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。基于微囊劑能更好地保護(hù)生防菌免受環(huán)境影響[21]，將微囊劑添加到玉米生物種衣劑中從而延長(zhǎng)生防菌活性維持時(shí)間，值得進(jìn)一步研究。