1.解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心放射科(北京 100091)

2.解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心骨科(北京 100091)

張婭麗1 羅小波2,* 代 鵬1 洪 劍1

脊柱結(jié)核是臨床常見骨關(guān)節(jié)疾病，會(huì)引起椎體骨質(zhì)破壞、塌陷、后凸畸形、病理性骨折，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)脊髓神經(jīng)損傷，功能難以恢復(fù)[1-2]。影像學(xué)引導(dǎo)下病變穿刺活檢是脊柱結(jié)核診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”，但存在損傷脊髓神經(jīng)風(fēng)險(xiǎn)及假陰性可能[3-4]。CT可顯示脊椎病變形態(tài)特征，在脊柱結(jié)核診斷中發(fā)揮著重要作用，但其能否用于不同臨床病理分期脊柱結(jié)核鑒別診斷，鮮有研究報(bào)道[5-6]。微小RNA-27b(miR-27b)從HeLa細(xì)胞中克隆出來，研究發(fā)現(xiàn)，其與結(jié)核分枝桿菌病理過程有關(guān)，可能為脊柱結(jié)核早期診斷分子標(biāo)志物之一[7-8]?；诖?，本研究首次探討CT征象與外周血miR-27b表達(dá)對(duì)脊柱結(jié)核鑒別效能及與臨床病理分期的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年1月至2020年3月我院收治的61例脊柱結(jié)核患者，均行CT檢查，根據(jù)臨床病理分期分為活動(dòng)期組(n=38)、穩(wěn)定期組(n=23)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)；患者年齡、性別、病史等病歷資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有脊柱外傷病史；合并其他器官或系統(tǒng)感染；自身免疫系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

1.2.1 CT檢查 Philip Brilliance 16排螺旋CT，層距1mm，層厚2mm，檢查包括所有病變椎體及上下相鄰椎體，骨窗和軟組織窗顯示圖像。采用Philip后處理工作站處理CT重建圖像。

1.2.2 miR-27b表達(dá) 入組24h內(nèi)，清晨空腹采集外周靜脈血5ml，離心(3000r/min，5min，離心半徑5cm)，取血清，T R I z o l 法提取與純化總R N A，測定R N A 濃度(NanoDropND-1000分光光度儀)，A260/A280均＞1.8，以總RNA為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，以cDNA為模板行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，采用2-ΔΔCT算法分析反應(yīng)結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)(1)脊柱結(jié)核不同臨床病理分期患者CT征象表現(xiàn)、miR-27b表達(dá)。(2)CT征象表現(xiàn)、miR-27b與脊柱結(jié)核活動(dòng)期的關(guān)系。(3)CT征象表現(xiàn)、miR-27b鑒別脊柱結(jié)核不同臨床病理分期的ROC。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)描述，計(jì)量資料采取Bartlett方差齊性檢驗(yàn)與Kolmogorov-Smirnov正態(tài)性檢驗(yàn)，均確認(rèn)具備方差齊性且近似符合正態(tài)分布，以(±s)描述；Logistic回歸分析各參數(shù)與脊柱結(jié)核活動(dòng)期的關(guān)系；診斷、鑒別效能分析采用受試者工作特征(receiver operating characteristic curve，ROC)曲線，獲取曲線下面積(AUC)、置信區(qū)間、敏感度、特異度及cut-off值，聯(lián)合預(yù)測實(shí)施Logistic二元回歸擬合，返回預(yù)測概率logit(p)，將其作為獨(dú)立檢驗(yàn)變量。均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 不同臨床病理分期脊柱結(jié)核患者CT征象表現(xiàn)、miR-27b表達(dá)比較脊柱結(jié)核不同臨床病理分期患者椎體輪廓、骨破壞方式、病灶在椎骨中分布、椎旁腫塊、椎旁腫塊強(qiáng)化比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；脊柱結(jié)核活動(dòng)期患者病灶內(nèi)死骨、椎間盤受累、椎旁腫塊鈣化患者占比高于穩(wěn)定期患者，miR-27b表達(dá)低于穩(wěn)定期患者(P＜0.05)，見表1、圖1。

表1 脊柱結(jié)核不同臨床病理分期患者CT征象表現(xiàn)、miR-27b表達(dá)比較[n(%)]

圖1 脊柱結(jié)核CT征象。患者女，63歲，背痛、雙下肢感覺運(yùn)動(dòng)障礙3月余，CT軸位、矢狀位示：胸4-6椎間隙狹窄，椎體正常形態(tài)消失，多發(fā)低密度骨質(zhì)破壞及高密度死骨，部分向后突入椎管內(nèi)，椎旁混雜密度團(tuán)塊影，內(nèi)見斑片壞死及斑塊狀鈣化。

2.2 CT征象表現(xiàn)、miR-27b與脊柱結(jié)核活動(dòng)期的關(guān)系以脊柱結(jié)核活動(dòng)期為因變量，納入病灶內(nèi)死骨、椎間盤受累、椎旁腫塊鈣化、miR-27b作為自變量進(jìn)行Logistic回歸方程分析，結(jié)果顯示，病灶內(nèi)有死骨患者處于活動(dòng)期的風(fēng)險(xiǎn)可能是無死骨患者的2.033倍，椎間盤受累患者處于活動(dòng)期的風(fēng)險(xiǎn)可能是未受累患者的3.308倍，椎旁腫塊鈣化患者處于活動(dòng)期的風(fēng)險(xiǎn)可能是無鈣化患者的2.603倍，miR-27b每降低1個(gè)單位，處于活動(dòng)期的風(fēng)險(xiǎn)可能增高4.596倍(P＜0.05)，見表2。

表2 CT征象表現(xiàn)、miR-27b與脊柱結(jié)核活動(dòng)期的關(guān)系

2.3 CT征象表現(xiàn)、miR-27b鑒別脊柱結(jié)核不同臨床病理分期的ROC采用ROC-AUC分析獲取曲線下面積、置信區(qū)間、敏感度、特異度及cut－off值，結(jié)果顯示單一參數(shù)中，椎旁腫塊鈣化鑒別脊柱結(jié)核活動(dòng)期的AUC最大，為0.816；采用Logistic二元回歸擬合進(jìn)行聯(lián)合診斷，返回預(yù)測概率logit(p)，將其作為獨(dú)立檢驗(yàn)變量，結(jié)果顯示，各參數(shù)聯(lián)合鑒別脊柱結(jié)核活動(dòng)期的AUC大于任一單一指標(biāo)，為0.884，見圖2、表3。

表3 ROC分析結(jié)果

3 討 論

脊柱結(jié)核是常見脊柱病變，活動(dòng)期約占85%～95%，表現(xiàn)盜汗、發(fā)熱、腰背疼痛、消瘦、竇道、神經(jīng)功能障礙等，需積極進(jìn)行治療，以順利進(jìn)入穩(wěn)定期[9]。故對(duì)脊柱結(jié)核進(jìn)行病理分期鑒別診斷具有重要意義。CT能明確提示脊椎病變各種征象，多項(xiàng)研究證實(shí)，其對(duì)脊柱結(jié)核與脊椎轉(zhuǎn)移瘤有較高鑒別診斷價(jià)值[10-11]。本研究首次探討CT征象表現(xiàn)與脊柱結(jié)核患者病理分期關(guān)系，發(fā)現(xiàn)脊柱結(jié)核活動(dòng)期患者病灶內(nèi)死骨、椎間盤受累、椎旁腫塊鈣化患者占比較高，均與脊柱結(jié)核病理分期有關(guān)。分析原因在于穩(wěn)定性脊柱結(jié)核病灶已穩(wěn)定，而脊柱結(jié)核活動(dòng)期病變處于發(fā)展階段，逐漸突破椎體及椎旁，向四周蔓延，椎體骨質(zhì)進(jìn)一步破壞，嚴(yán)重累及椎間盤，且椎旁腫塊鈣化嚴(yán)重。

miRNA作為一種具有調(diào)節(jié)作用的RNA具有組織特異性，不同miRNA在不同組織中表達(dá)不盡相同。研究證實(shí)，結(jié)核感染患者存在miR-27b差異性表達(dá)[12]。脊柱結(jié)核中，結(jié)核分枝桿菌病理過程與巨噬細(xì)胞密切相關(guān)[13]。學(xué)者陸秋安[14]研究顯示，脊柱結(jié)核患者miR-27b表達(dá)降低，且miR-27b可能通過CYP450花生四烯酸途徑影響巨噬細(xì)胞凋亡，進(jìn)而對(duì)結(jié)核分枝桿菌病理過程產(chǎn)生影響。本研究結(jié)果顯示，miR-27b表達(dá)與脊柱結(jié)核病理分期有關(guān)。原因可能為脊柱結(jié)核活動(dòng)期患者病情持續(xù)進(jìn)展，椎體骨質(zhì)破壞，可能通過CYP450花生四烯酸途徑影響miR-27b表達(dá)。

ROC曲線顯示，病灶內(nèi)死骨、椎間盤受累、椎旁腫塊鈣化、miR-27b鑒別脊柱結(jié)核活動(dòng)期的AUC均較高，尤以各參數(shù)聯(lián)合鑒別AUC最高，達(dá)0.884。提示各參數(shù)聯(lián)合檢測可為脊柱結(jié)核活動(dòng)期鑒別提供更多參考信息，提高鑒別準(zhǔn)確性。

綜上可知，CT征象表現(xiàn)、miR-27b表達(dá)在脊柱結(jié)核活動(dòng)期、穩(wěn)定期患者中存在差異，利于二者診斷與鑒別，為治療方案制定及預(yù)后評(píng)估提供依據(jù)。