王平娟，王安鑫，劉春華，燕海亞

寶雞市婦幼保健院，陜西寶雞721000

子宮內(nèi)膜癌是常見(jiàn)的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，我國(guó)子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率為63.4/10 萬(wàn)，病死率為21.8/10萬(wàn)，并且其發(fā)病率有逐年升高的趨勢(shì)［1］。子宮內(nèi)膜樣腺癌是子宮內(nèi)膜癌最常見(jiàn)的病理類型，由于患者早期癥狀不典型，對(duì)于已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者及復(fù)發(fā)患者手術(shù)治療效果差，5 年生存率不足30%［2］。因此，深入研究子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，尋找新的判斷預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物具有重要意義。配對(duì)相關(guān)同源框1（PRRX1）基因位于1q24.2，該基因編碼蛋白能增強(qiáng)促細(xì)胞增殖及分化相關(guān)因子與DNA 結(jié)合，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄共激活的作用［3］。研究表明，在膠質(zhì)瘤、胃癌等多種腫瘤組織中PRRX1 表達(dá)均升高，可促進(jìn)下游癌基因（細(xì)胞外信號(hào)相關(guān)激酶）表達(dá)及腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移［4］。核糖體結(jié)合蛋白1（RRBP1）基因位于20p12.1，該基因編碼內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的核糖體結(jié)合蛋白，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增殖、蛋白運(yùn)輸和分泌、細(xì)胞分化及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)—微管相互作用等過(guò)程中具有重要作用［5］。RRBP1 已經(jīng)被證實(shí)在肺癌、乳腺癌等腫瘤組織中均呈過(guò)表達(dá)，可促進(jìn)惡性腫瘤進(jìn)展并提示患者預(yù)后不良［6］。本研究觀察了子宮內(nèi)膜樣腺癌患者癌組織中PRRX1、RRBP1的表達(dá)變化，并探討其與患者臨床病理參數(shù)和預(yù)后之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理檢查明確診斷為子宮內(nèi)膜樣腺癌；②臨床病理資料完整；③初次診治，既往未接受過(guò)放化療等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有嚴(yán)重的心肺功能不全；②合并其他惡性腫瘤；③孕期或者哺乳期婦女。選取2015年1月—2017年1月于我院就診并符合上述標(biāo)準(zhǔn)的子宮內(nèi)膜樣腺癌患者86 例，年齡32～75（47.13 ± 10.46）歲；腫瘤直徑：≤5 cm 61 例，＞5 cm 25 例；腫瘤分化程度：高分化 30例，中低分化 56 例；FIGO 臨床分期［7］：Ⅰ期 57 例，Ⅱ～Ⅲ期29例；腫瘤肌層浸潤(rùn)深度：淺肌層65例，深肌層21 例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14 例，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移72例。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核，患者及其家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 子宮內(nèi)膜樣腺癌組織與癌旁正常組織PRRX1、RRBP1 表達(dá)檢測(cè)方法 采用免疫組化法。收集患者術(shù)中新鮮獲取的子宮內(nèi)膜樣腺癌組織及癌旁正常組織（距腫瘤邊緣2 cm 以上且經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為正常子宮內(nèi)膜組織）各86 例份，中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，4μm厚度切片；70 ℃烤箱中烤片2 h，二甲苯脫蠟，梯度水化?？乖瓱嵝迯?fù)：將切片放入含檸檬酸緩沖液的高壓鍋中，高壓鍋加熱4 min 后斷電，自然冷卻。加入3%雙氧水，室溫孵育0.5 h，去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；5%羊血清室溫封閉30 min；加入PRRX1、RRBP1 一抗（稀釋比例分別為1∶400、1∶300），4 ℃孵育過(guò)夜；滴加二抗，室溫孵育2 h。DAB 顯色4 min，蘇木精復(fù)染 1 min，鹽酸乙醇分化；梯度脫水，封片鏡檢。每張片子隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野（×200），對(duì)陽(yáng)性表達(dá)部位的染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行評(píng)估［8］。以染色強(qiáng)度評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分的乘積判定蛋白表達(dá)情況：0～2 為表達(dá)陰性，3～9為表達(dá)陽(yáng)性。

1.3 預(yù)后隨訪方法 所有患者自確診起開(kāi)始隨訪，隨訪時(shí)間為3年，截止日期為2020年1月。隨訪方式為門診復(fù)查或電話隨訪，隨訪終點(diǎn)為患者死亡或隨訪結(jié)束，記錄患者生存情況，計(jì)算3年總體生存率（OS）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS24.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。癌組織RRBP1 與 PRRX1 表達(dá)的相關(guān)性采用 Spearman 秩相關(guān)分析。繪制不同RRBP1、PRRX1 表達(dá)患者的Kaplan-Meier 生存曲線，Log-Rank 檢驗(yàn)比較其 3 年OS。以患者預(yù)后為應(yīng)變量，賦值1=死亡，0=生存，t=生存期。自變量選擇FIGO 分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度、RRBP1 及PRRX1，采用多因素COX回歸模型分析影響患者3年OS的相關(guān)因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 子宮內(nèi)膜樣腺癌組織與癌旁正常組織PRRX1、RRBP1 陽(yáng)性表達(dá)率比較 子宮內(nèi)膜樣腺癌組織PRRX1、RRBP1 陽(yáng)性表達(dá)率分別為83.72%（72/86）、86.05%（74/86），癌旁正常組織分別為10.47%（9/86）、13.95%（12/86），二者比較P均＜0.01。子宮內(nèi)膜樣腺癌組織PRRX1 與RRBP1 表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中RRBP1與PRRX1陽(yáng)性表達(dá)情況

2.2 不同臨床病理參數(shù)患者癌組織PRRX1、RRBP1 表達(dá)比較 FIGO 臨床分期Ⅱ～Ⅲ期患者的癌組織PRRX1、RRBP1陽(yáng)性表達(dá)率均高于Ⅰ期患者（P均＜0.05），不同年齡、腫瘤大小、分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的癌組織PRRX1、RRBP1陽(yáng)性表達(dá)率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床病理參數(shù)患者癌組織PRRX1、RRBP1表達(dá)比較［例（%）］

2.3 不同 RRBP1、PRRX1 表達(dá)患者的 3 年 OS 比較 隨訪時(shí)間為2～36 個(gè)月，中位隨訪時(shí)間28個(gè)月。隨訪期間無(wú)失訪，死亡18 例，總體3 年OS為79.07%（68/86）。RRBP1 陽(yáng)性與陰性表達(dá)患者 的 3 年 OS 分 別 為 77.03%（57/74）、91.67%（11/12），二者比較P＜0.05。PRRX1 陽(yáng)性與陰性表達(dá)患者的 3 年 OS 分別為 76.39 %（55/72）、92.86%（13/14），二 者 比 較P＜0.05。不 同RRBP1、PRRX1 表 達(dá)患 者的 Kaplan-Meier 生 存 曲線見(jiàn)圖1。

圖1 不同RRBP1、PRRX1表達(dá)患者的Kaplan-Meier生存曲線

2.4 影響患者預(yù)后的多因素COX回歸分析結(jié)果 見(jiàn)表3。

表3 影響患者預(yù)后的多因素COX回歸分析結(jié)果

3 討論

子宮內(nèi)膜樣腺癌是子宮內(nèi)膜上皮來(lái)源的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病率及病死率較高，雖然早期子宮內(nèi)膜樣腺癌患者預(yù)后較好，但部分患者術(shù)后可能出現(xiàn)復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，特別是中晚期患者的手術(shù)、化療等治療效果差，長(zhǎng)期生存率較低［9］。腫瘤的發(fā)生與癌基因激活、抑癌基因失活有關(guān)，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中存在多種癌基因如表皮生長(zhǎng)因子受體基因及抑癌基因p53 等異常表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的無(wú)限增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為，從而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展［10］。因此，尋找子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵癌基因及其調(diào)控機(jī)制是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。

PRRX1 屬于配對(duì)同源異形盒蛋白家族成員，具有轉(zhuǎn)錄共激活因子的作用。MARCHAND 等［11］研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織中PRRX1 表達(dá)升高，能促進(jìn)下游癌基因如叉頭盒M1 表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤DNA 損傷修復(fù)障礙及腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲性，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜樣腺癌患者癌組織中PRRX1陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常組織，表明子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中PRRX1表達(dá)上調(diào)。但目前其機(jī)制尚不清楚，可能與PRRX1 基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制異常有關(guān)。既往研究表明，微小RNA-655 能夠結(jié)合PRRX1 信使RNA 的 3'非編碼區(qū)，促進(jìn) PRRX1 信使 RNA 降解，而三陰性乳腺癌發(fā)生時(shí)微小RNA-655 表達(dá)降低，導(dǎo)致PRRX1 表達(dá)水平升高［12］。故推測(cè)在子宮內(nèi)膜樣腺癌中可能也存在類似的變化，導(dǎo)致PRRX1陽(yáng)性表達(dá)率升高。此外，F(xiàn)IGO 高分期的子宮內(nèi)膜樣腺癌患者癌組織中PRRX1 陽(yáng)性表達(dá)率更高，表明PRRX1 可促進(jìn)子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展。分析原因，可能是PRRX1 能激活腫瘤細(xì)胞中Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，即間質(zhì)性表型波形蛋白表達(dá)升高，而E-鈣黏素表達(dá)降低，腫瘤增殖及浸潤(rùn)能力增強(qiáng)，從而促進(jìn)腫瘤迅速惡化［13］。本研究結(jié)果顯示，PRRX1陽(yáng)性表達(dá)患者的3年OS較低，表明PRRX1 陽(yáng)性表達(dá)提示患者預(yù)后不良，多因素分析進(jìn)一步證實(shí)PRRX1是影響患者3年OS的相關(guān)因素。因此，檢測(cè)癌組織PRRX1表達(dá)情況有望成為判斷子宮內(nèi)膜樣腺癌患者預(yù)后的分子標(biāo)志物。

RRBP1 蛋白由膜結(jié)合結(jié)構(gòu)域、核糖體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和酸性卷曲螺旋末端域構(gòu)成，主要位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，在蛋白質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)中具有重要作用，并參與蛋白質(zhì)的分泌。研究表明，RRBP1 在前列腺癌、肺癌等腫瘤中均存在過(guò)表達(dá)，可促進(jìn)糖調(diào)節(jié)蛋白78 表達(dá)，降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激壓力，從而減少細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，并且RRBP1 陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤患者的不良生存預(yù)后有關(guān)［14-15］。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜樣腺癌患者癌組織RRBP1 陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織。分析原因，一方面可能與促進(jìn)RRBP1 表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)增加有關(guān)，子宮內(nèi)膜癌發(fā)生時(shí)轉(zhuǎn)錄因子E2F 轉(zhuǎn)錄因子1 表達(dá)上調(diào)，而E2F 轉(zhuǎn)錄因子1能夠結(jié)合于RRBP1 基因啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)RRBP1基因的表達(dá)［16-17］；另一方面，腫瘤發(fā)生時(shí)細(xì)胞處于應(yīng)激狀態(tài)，自身抗原La 通過(guò)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)，從而誘導(dǎo) RRBP1 表達(dá)［18］。此外，本研究顯示在 FIGO高分期子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中RRBP1 陽(yáng)性表達(dá)率更高，表明RRBP1 可促進(jìn)子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展，其機(jī)制可能與RRBP1參與的未折疊蛋白反應(yīng)通路異常有關(guān)。子宮內(nèi)膜癌發(fā)生時(shí)常伴有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)未折疊蛋白表達(dá)增多，RRBP1可以通過(guò)促進(jìn)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78表達(dá)，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤分期升高［19］。本研究中RRBP1陽(yáng)性表達(dá)患者3年OS明顯降低，并且是影響患者預(yù)后的相關(guān)因素，表明癌組織RRBP1 陽(yáng)性表達(dá)與患者預(yù)后不良有關(guān)，其可能成為判斷患者預(yù)后的重要指標(biāo)。本研究中癌組織PRRX1、RRBP1表達(dá)呈正相關(guān)，其機(jī)制尚不清楚，可能與腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）分泌異常有關(guān)。研究表明，腫瘤微環(huán)境中TGF-β能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞中PRRX1表達(dá)升高，同時(shí)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，進(jìn)而促進(jìn)RRBP1 表達(dá)［20］。但二者相互作用的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，子宮內(nèi)膜樣腺癌患者癌組織PRRX1、RRBP1 陽(yáng)性表達(dá)率升高，兩者陽(yáng)性表達(dá)與FIGO 分期有關(guān)，并提示患者預(yù)后不良，有望成為新的子宮內(nèi)膜樣腺癌的腫瘤標(biāo)志物。但本研究樣本例數(shù)有限，二者的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。