桑晨晨，李紫薇，龐 熙，鄒雪怡，葉文才, 2，張曉琦, 2*

蓬萊葛枝葉的生物堿類成分研究

桑晨晨1，李紫薇1，龐 熙1，鄒雪怡1，葉文才1, 2，張曉琦1, 2*

1. 暨南大學(xué)藥學(xué)院 中藥及天然藥物研究所，廣東省現(xiàn)代中藥工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510632 2. 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局 中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510632

研究蓬萊葛枝葉的化學(xué)成分。采用硅膠、ODS、Sephadex LH-20和HPLC等色譜方法進(jìn)行分離純化，并根據(jù)化合物的理化性質(zhì)及波譜學(xué)數(shù)據(jù)鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。從蓬萊葛枝葉中分離得到13個(gè)生物堿類化合物，分別鑒定為antirhine 4α-oxide（1）、geissoschizol（2）、melosline E（3）、土波臺(tái)文堿（4）、tubotaiwine-oxide（5）、pyridinium（6）、melosline B（7）、-甲基巴婆堿（8）、venoterpine（9）、肉桂酰胺（10）、lyaloside（11）、異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺（12）、柯諾辛堿（13）?；衔?～13均為首次從該植物中分離得到。

蓬萊葛；馬錢科；生物堿；土波臺(tái)文堿；異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺；柯諾辛堿

蓬萊葛Makino為馬錢科（Loganiaceae）蓬萊葛屬植物，又名紅絡(luò)石藤、九里火、放光藤等，主要分布于亞洲東南部和東部，我國(guó)分布于長(zhǎng)江以南地區(qū)；其味苦、辛、性溫，有祛風(fēng)通絡(luò)、止血之效；主治風(fēng)濕麻痹，創(chuàng)傷出血，關(guān)節(jié)、坐骨神經(jīng)痛等[1]。文獻(xiàn)報(bào)道該植物中吲哚類生物堿為主要成分，且具有良好的藥理活性，如細(xì)胞毒活性[2]、神經(jīng)節(jié)阻斷作用[3]等。本課題組前期發(fā)現(xiàn)了一些結(jié)構(gòu)新穎、生物活性良好的單萜吲哚類生物堿[4-7]，本研究繼續(xù)從蓬萊葛中尋找生物堿類化合物。運(yùn)用硅膠、ODS、Sephadex LH-20、HPLC等色譜分離方法，從蓬萊葛枝葉中分離到13個(gè)生物堿類化合物，分別鑒定為antirhine 4α-oxide（1）、geissoschizol（2）、melosline E（3）、土波臺(tái)文堿（tubotaiwine，4）、tubotaiwine-oxide（5）、pyridinium（6）、melosline B（7）、-甲基巴婆堿（-methyl- asimilobine，8）、venoterpine（9）、肉桂酰胺（cinnamamide，10）、lyaloside（11）、異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺（strictosamide，12）、柯諾辛堿（corynoxine，13）。結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。所有化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

JASCO V-550 紫外-可見(jiàn)光譜儀（日本JASCO公司）；JASCO FI/IR-480 Plus Fourier Transform 型紅外光譜儀（KBr壓片，日本 JASCO 公司）；JASCO P-1020 型旋光儀（日本JASCO公司）；Agilent 6210 ESI/TOF 質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent公司）；Bruker AV-300/400/600 型核磁共振儀（美國(guó)Bruker公司）；分析型高效液相色譜（Agilent 1260，G1311C 1260 Quat 泵和G13150 1260 DAD VL檢測(cè)器，美國(guó)Agilent公司）；制備型高效液相色譜儀（Agilent 1260，G1310B Iso 泵系統(tǒng)和G1365D MWD VL檢測(cè)器，美國(guó)Agilent公司）。

硅膠柱色譜硅膠（80～100、200～300目）購(gòu)于青島海洋化工公司；碳十八烷基反相鍵合硅膠（ODS）柱色譜填料購(gòu)自Merck公司；凝膠Sephadex LH-20柱色譜所用材料為Pharmacia Biotech AB公司產(chǎn)品；TLC硅膠預(yù)制板購(gòu)于煙臺(tái)化學(xué)工業(yè)研究所；分析及制備色譜柱為美國(guó)Waters公司生產(chǎn)的X bridge型號(hào)的耐堿C18分析和制備柱；氘代試劑為美國(guó)CIL公司生產(chǎn)；所用試劑為分析純和色譜純。

實(shí)驗(yàn)用藥材蓬萊葛枝葉于2015年3月采自貴州省龍里縣羊場(chǎng)鎮(zhèn)，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)孫慶文教授鑒定為蓬萊葛Makino的干燥枝葉。植物標(biāo)本（201503GZQSY098）保存于暨南大學(xué)中藥及天然藥物研究所。

圖1 化合物1～13的結(jié)構(gòu)

2 提取與分離

取蓬萊葛干燥枝葉40.0 kg，粉碎，經(jīng)95%乙醇（200 L）滲漉提取，減壓濃縮后得總浸膏2.9 kg。加水混懸均勻后，用5% HCl將pH值調(diào)至2～3后用氯仿萃取，得到氯仿層和酸水層，然后將酸水層用氨水將pH調(diào)至9～10，氯仿萃取，得粗總堿（氯仿部位）53.1 g?？倝A（52.6 g）經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，結(jié)合TLC和高效液相分析結(jié)果，合并得到9個(gè)流分（Fr. 1～9）。Fr. 4經(jīng)凝膠柱Sephadex LH-20[氯仿-甲醇（1∶1）]分離，再經(jīng)ODS柱甲醇-水梯度洗脫（10∶90→100∶0）得到5個(gè)亞流分（Fr. 4A～4E），其中Fr. 4C和Fr. 4E分別用Sephadex LH-20（甲醇）以及制備型高效液相色譜儀分離得到化合物1 [8.1 mg，乙腈-水（30∶70），R＝25.0 min]、2 [4.1 mg，乙腈-水（30∶70），R＝43.5 min]、3 [5.4 mg，乙腈-水（33∶67），R＝30.0 min]；Fr. 3經(jīng)凝膠Sephadex LH-20[氯仿-甲醇（1∶1）]分離，再經(jīng)ODS柱甲醇-水梯度洗脫（10∶90→100∶0）得到6個(gè)亞流分（Fr. 3A～3F），其中Fr. 3A和Fr. 3C分別用Sephadex LH-20（甲醇）以及制備型高效液相色譜儀分離得到化合物4 [3.2 mg，乙腈-水（40∶60），R＝28.2 min]、5 [1.1 mg，乙腈-水（30∶70），R＝14.6 min]、8 [9.1 mg，乙腈-水（40∶60），R＝21.5 min] 和13 [1.5 mg，乙腈-水（30∶70），R＝36.3 min]；Fr. 7經(jīng)凝膠Sephadex LH-20[氯仿-甲醇（1∶1）]分離，再經(jīng)ODS柱甲醇-水梯度洗脫（10∶90→100∶0）得到5個(gè)亞流分（Fr. 7A～7E），其中Fr. 7C用Sephadex LH-20（甲醇）以及制備型高效液相色譜儀分離得到化合物6 [2.5 mg，乙腈-水（20∶80），R＝31.2 min]、7 [1.9 mg，乙腈-水（18∶82），R＝28.6 min]、10 [2.2 mg，乙腈-水（34∶66），R＝25.4 min]；Fr. 5經(jīng)凝膠Sephadex LH-20[氯仿-甲醇（1∶1）]分離，再經(jīng)ODS柱甲醇-水梯度洗脫（10∶90→100∶0）得到6個(gè)亞流分（Fr. 5A～5F），其中Fr. 5D和Fr. 5E分別用Sephadex LH-20（甲醇）以及制備型高效液相色譜儀分離得到化合物9 [3.1 mg，甲醇-水（54∶46），R＝27.4 min]、11 [6.1 mg，甲醇-水（54∶46），R＝20.5 min]和12 [22.1 mg，乙腈-水（39∶61），R＝18.3 min]。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

4 討論

蓬萊葛根、葉可供藥用，有祛風(fēng)活血，主治關(guān)節(jié)炎、坐骨神經(jīng)痛等功效。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，化合物8具有一定的抗腫瘤細(xì)胞活性，以阿霉素為陽(yáng)性對(duì)照藥，在體外通過(guò)SRB分析法對(duì)非小細(xì)胞肺腺癌A549細(xì)胞、卵巢癌SK-OV-3細(xì)胞、皮膚黑色素瘤SK-MEL-2細(xì)胞和結(jié)腸癌HCT-15細(xì)胞的半數(shù)抑制劑濃度（IC50）分別為13.1、14.6、6.0、2.8 μmol/L[21]。此外，文獻(xiàn)報(bào)道化合物11和12具有較弱的單胺氧化酶A [IC50值分別為（50.04±1.09）、（132.50±1.33）μg/mL]和單胺氧化酶B [IC50值分別為（306.6±1.40）、（162.8±1.26）μg/mL]抑制活性[22]。本研究對(duì)蓬萊葛枝葉生物堿部位化學(xué)成分進(jìn)行研究，鑒定了13個(gè)生物堿類化合物均為首次從該植物中分離得到，為今后蓬萊葛化學(xué)成分研究提供依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Alkaloid constituents from twigs and leaves of

SANG Chen-chen1, LI Zi-wei1, PANG Xi1, ZOU Xue-yi1, YE Wen-cai1, 2, ZHANG Xiao-qi1, 2

1. Institute of Traditional Chinese Medicine & Natural Products, Guangdong Engineering Research Center for Modernization of TCM, College of Pharmacy, Jinan University, Guangzhou 510632, China 2. NMPA Key Laboratory for Quality Evaluation of TCM (Traditional Chinese Patent Medicine), Guangzhou 510632, China

To study the chemical constituents of.The chemical constituents were isolated from the total alkaloids of the twigs and leaves ofby using silica gel, ODS, Sephadex LH-20, and HPLC chromatographic methods. The chemical structures were identified based on their physical and chemical properties and spectroscopic methods.Thirteen alkaloids were isolated and identified as antirhine 4α-oxide (1), geissoschizol (2), melosline E (3), tubotaiwine (4), tubotaiwine-oxide (5), pyridinium (6), melosline B (7),-methylasimilobine (8), venoterpine (9), cinnamamide (10), lyaloside (11), strictosamide (12), corynoxine (13), respectively.All compounds are obtained from this plant for the first time.

Makino; Loganiaceae; alkaloids; tubotaiwine; strictosamide; corynoxine

R284.1

A

0253 - 2670(2021)08 - 2210 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.08.003

2020-10-22

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（U1801287）；國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（82073712）；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2018B020207008，2020B1111110004）

桑晨晨（1996—），女，碩士研究生，研究方向中藥及天然藥物活性成分研究。Tel: 13535104676 E-mail: sccnice@outlook.com

張曉琦，博士，教授。E-mail: xqzhang74@hotmail.com

[責(zé)任編輯 王文倩]