何亞磊，魏引，蔡葉銳，普永紅，洪琴

急性冠狀動(dòng)脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)是常見的心血管危重癥之一，其包括不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris,UAP)和急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)，主要是由于各種原因?qū)е碌墓跔顒?dòng)脈損傷粥樣硬化引起冠狀動(dòng)脈血管堵塞，進(jìn)而導(dǎo)致心肌缺血缺氧壞死引發(fā)急性心臟病。其發(fā)病急，病死率較高[1]。ACS治療的最佳時(shí)期在發(fā)病1 h以內(nèi)，超過(guò)4 h患者死亡風(fēng)險(xiǎn)會(huì)上升數(shù)倍，因此其早診早治對(duì)患者的預(yù)后至關(guān)重要[2]。目前，臨床對(duì)ACS的快速篩查手段主要有體表心電圖及心肌酶譜等，但體表心電圖診斷ACS的特異度較差，心室肥大及心包炎均會(huì)導(dǎo)致心電圖ST段的改變；另外患者心肌酶的改變較為滯后，多數(shù)指標(biāo)在患者發(fā)病3 h以后才升高明顯，并且特異度亦欠佳，因此對(duì)于ACS的快速評(píng)估診斷不利[3]。近年來(lái)機(jī)體基因組學(xué)發(fā)展迅速，越來(lái)越多的微小RNA(microRNA，miR)家族成員出現(xiàn)在心血管疾病的相關(guān)研究中，其中miR-133a和miR-208b一直是研究熱點(diǎn)，其在心肌細(xì)胞中特異性表達(dá)，并且檢測(cè)操作方便快捷，可能為ACS的早期快速診斷提供新思路[4-5]。鑒于此，現(xiàn)分析ACS患者血漿miR-133a、miR-208b的表達(dá)水平及其與心肌損傷和冠狀動(dòng)脈病變程度的相關(guān)性，旨在為ACS的快速診斷及病情評(píng)估提供臨床依據(jù)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年5月—2019年5月云南省第三人民醫(yī)院心內(nèi)科收治的ACS患者106例作為研究對(duì)象，其中UAP患者51例(UAP組)，AMI患者55例(AMI組)。另選取同期于醫(yī)院進(jìn)行體檢的健康者40例作為對(duì)照(CON組)。3組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性， 見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)，入選者或家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18周歲；②ACS的診斷符合“急性冠狀動(dòng)脈綜合征急診快速診療指南”診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；③無(wú)精神疾病或意識(shí)障礙。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并全身感染性或免疫性疾?。虎诤喜盒阅[瘤；③合并肝、肺、腎等重要器官功能障礙；④發(fā)病至入院時(shí)間超過(guò)6 h。

1.3 觀察指標(biāo)與方法 ACS患者確診后即刻、健康者體檢當(dāng)日采集外周靜脈血10 ml，分裝為2管，其中1管靜置5 min后離心留取血清置于-20℃冰箱中備用。以SYSMEXBX-5000全自動(dòng)生化檢測(cè)儀(日本希森美康公司)進(jìn)行檢測(cè)。(1)血清心肌損傷標(biāo)志物：包括肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)、腦鈉肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)。(2)血脂指標(biāo)：包括總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)。(3)外周血漿miR-133a和miR-208b表達(dá)水平：另一管加抗凝取血漿應(yīng)用定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)外周血miR-133a和miR-208b表達(dá)水平，總RNA提取—逆轉(zhuǎn)錄—PCR擴(kuò)增。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)于日本Takara公司，引物由上海生工生物工程股份有限公司提供。miR-133a和miR-208b的PCR判讀使用公式：ΔCt=樣品Ct均值-內(nèi)參Ct均值[7]，以2-ΔΔCt表示基因的相對(duì)表達(dá)量。(4)左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)：使用飛利浦iE33超聲診斷儀進(jìn)行檢測(cè)。(5)冠狀動(dòng)脈病變程度：應(yīng)用Gensini評(píng)分[8]評(píng)估患者冠狀動(dòng)脈病變程度，得分越高，病變?cè)絿?yán)重。

表1 3組臨床資料比較 [例(%)]

2 結(jié) 果

2.1 3組心肌損傷指標(biāo)比較 與CON組比較，UAP組和AMI組患者血清cTnI、BNP、CK-MB水平均明顯升高，且AMI組血清cTnI、BNP、CK-MB水平高于UAP組，而LVEF低于UAP組(P<0.05)， 見表2。

2.2 3組Gensini評(píng)分比較 CON組Gensini評(píng)分(8.23±5.42)分

2.3 3組血漿miR-133a、miR-208b表達(dá)水平比較 血漿miR-133a、miR-208b表達(dá)水平比較，CON組

2.4 血漿miR-133a、miR-208b表達(dá)水平與心肌損傷指標(biāo)的相關(guān)性 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b的表達(dá)水平與血清cTnI、BNP、CK-MB呈正相關(guān)(P<0.05)，與LVEF呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表4。

表3 3組受試者血漿miR-133a、miR-208b表達(dá)水平比較

表4 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b表達(dá)水平與心肌損傷指標(biāo)的相關(guān)性

2.5 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈病變程度的相關(guān)性 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b的表達(dá)水平與Gensini評(píng)分均呈正相關(guān)(r=0.647、0.666，P=0.002、0.013)。

3 討 論

ACS是常見的危重心血管疾病，為冠心病的嚴(yán)重類型，臨床主要表現(xiàn)為急性胸痛、胸悶，嚴(yán)重者導(dǎo)致心律失常及心力衰竭，甚至導(dǎo)致猝死，其早發(fā)現(xiàn)早診斷可明顯降低患者并發(fā)癥發(fā)生率及病死率[9-10]。近年來(lái)，各種類型的生物標(biāo)志物對(duì)于ACS的早期篩查診斷、病情評(píng)估及預(yù)后判斷做出了重大貢獻(xiàn)，降低了患者的病死率。miRNA一直是冠心病研究的熱點(diǎn)，很多類型的miRNA亞型在心肌細(xì)胞中特異性表達(dá)，冠心病發(fā)作時(shí)其在血漿中的表達(dá)水平出現(xiàn)異常，研究其生物學(xué)特性可進(jìn)一步揭示心血管疾病發(fā)展的病理生理過(guò)程。還有很多研究顯示，miRNA對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的形成進(jìn)展、心肌缺血梗死后的血管重建再生等方面在基因水平起著調(diào)控作用[11-13]。雖然miRNA對(duì)ACS的發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要，但是目前有關(guān)此方面的研究較少，其具體的影響機(jī)制尚不明確，因此，本研究通過(guò)分析ACS患者血漿中miR-133a、miR-208b的表達(dá)水平及與心肌損傷指標(biāo)和冠狀動(dòng)脈病變程度的相關(guān)性，以期為臨床中選擇理想的ACS早期診斷及病情評(píng)估標(biāo)志物提供充分的理論依據(jù)。

表2 3組受試者心肌損傷指標(biāo)比較

miRNA是長(zhǎng)度在18～23個(gè)核苷酸之間的非編碼核糖核酸，其可以有效地調(diào)控機(jī)體內(nèi)DNA轉(zhuǎn)錄后翻譯效率，并可以維持目標(biāo)RNA的穩(wěn)定性，對(duì)細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)及程序性凋亡起著重要的作用[14]。miR-133a和miR-208b是miRNA的2個(gè)亞型，是機(jī)體內(nèi)多種生物過(guò)程的調(diào)控因子，在心肌細(xì)胞中特異性表達(dá)，對(duì)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展作用重大，當(dāng)患者發(fā)生ACS時(shí)，可以通過(guò)受損破裂的心肌細(xì)胞滲漏入體循環(huán)，還可通過(guò)心肌細(xì)胞的微囊泡主動(dòng)分泌[15-16]。本研究顯示，ACS患者血漿miR-133a和miR-208b表達(dá)水平明顯高于健康者，且AMI患者較UAP患者表達(dá)水平更高，說(shuō)明當(dāng)患者發(fā)生ACS時(shí)，2種標(biāo)志物在血漿中的表達(dá)水平明顯上升，并且疾病程度越嚴(yán)重，其表達(dá)水平越高，與既往研究一致。孫杰等[17]對(duì)AMI患者血漿中miR-208b進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)，其在AMI急性期時(shí)表達(dá)水平顯著升高，2周后開始下降至基線水平；Wang 等[18]通過(guò)分析AMI患者及AMI鼠模型心肌細(xì)胞miR-208b表達(dá)的規(guī)律后得出，其在心肌細(xì)胞中特異性表達(dá)，病情急性發(fā)作時(shí)升高顯著，在正常心肌細(xì)胞中表達(dá)較少；張松林等[19]研究發(fā)現(xiàn)，miR-133a在心肌梗死患者體內(nèi)表達(dá)顯著升高，并且表達(dá)水平變化趨勢(shì)與cTnI一致，即疾病發(fā)作時(shí)升高數(shù)倍，1～2 d內(nèi)恢復(fù)至基線水平。miR-133a是心肌特異性miRNA，其參與了心肌細(xì)胞的分化生長(zhǎng)，其可能通過(guò)MAPK/ERK信號(hào)通路調(diào)控心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)[20]。miR-208b屬于miR-208基因簇類別，高特異性表達(dá)于損傷的心肌細(xì)胞中，其可通過(guò)正性調(diào)節(jié)—主要組織相容性復(fù)合物引起心肌重構(gòu)及纖維化的形成[21]。因此，患者發(fā)生ACS時(shí)，心肌細(xì)胞受損嚴(yán)重，胞內(nèi)核物質(zhì)大量釋放，作為心肌細(xì)胞特異性表達(dá)的miR-133a和miR-208b，可通過(guò)各種機(jī)制釋放，故在患者體內(nèi)呈現(xiàn)高表達(dá)，病情越嚴(yán)重，其表達(dá)水平越高。本研究觀察到AMI患者miR-133a和miR-208b表達(dá)水平較UAP患者亦明顯升高，進(jìn)一步證實(shí)早期檢測(cè)其表達(dá)水平，可為ACS的早發(fā)現(xiàn)、早診斷提供新思路。

患者發(fā)生ACS時(shí)，各種心肌損傷指標(biāo)均會(huì)不同程度的升高，本研究也發(fā)現(xiàn)，ACS患者血清cTnI、BNP、CK-MB明顯升高，而代表心功能的LVEF明顯下降，并且ACS患者冠狀動(dòng)脈病變程度Gensini評(píng)分明顯升高，且病情更嚴(yán)重的AMI患者升高程度高于UAP患者，這些指標(biāo)均可以作為ACS診斷及病情評(píng)估的輔助指標(biāo)之一。本研究顯示，ACS患者血漿miR-133a和miR-208b表達(dá)水平與心肌損傷指標(biāo)及冠狀動(dòng)脈病變程度具有一定的相關(guān)性[22]，具體表現(xiàn)為ACS組患者血漿miR-133a、miR-208b表達(dá)水平均與血清cTnI、BNP、CK-MB及Gensini評(píng)分呈正相關(guān)，與LVEF呈負(fù)相關(guān)，此結(jié)果說(shuō)明，miR-133a和miR-208b在ACS早期診斷及病情評(píng)估中的地位不亞于傳統(tǒng)的評(píng)估指標(biāo)。Wang等[23]研究得出，miR-208b在AMI患者中較對(duì)照組明顯升高，上升幅度與cTnI及CK-MB明顯相關(guān)；Zhang等[24]研究顯示，AMI患者血清miR-133a表達(dá)水平與Gensini評(píng)分、cTnI及LDL呈明顯的正相關(guān)，與本研究結(jié)果基本一致。cTnI、BNP、CK-MB均是ACS發(fā)作時(shí)的血清標(biāo)志物，其水平越高，心肌損傷程度越大，心功能越差，心功能指標(biāo)LVEF也越低，而Gensini評(píng)分代表了冠狀動(dòng)脈阻塞情況，其分值越高冠狀動(dòng)脈病變程度越嚴(yán)重，miR-133a和miR-208b均與上述指標(biāo)有著明顯的相關(guān)性，可見檢測(cè)2種miRNA在ACS患者血漿中的表達(dá)水平可能成為預(yù)測(cè)ACS發(fā)生和評(píng)估病情嚴(yán)重程度的標(biāo)志物。

綜上所述，ACS患者血漿miR-133a、miR-208b表達(dá)水平明顯升高，且與心肌損傷指標(biāo)和冠狀動(dòng)脈病變程度呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性，可為ACS的早期診斷和病情評(píng)估提供新思路。

利益沖突：所有作者聲明無(wú)利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

何亞磊：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過(guò)程，論文撰寫；魏引：提出研究思路，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核;蔡葉銳：進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;普永紅、洪琴：實(shí)施研究過(guò)程，資料搜集整理，論文修改