施嬋麗

（寧波原水環(huán)境檢測(cè)有限公司，浙江寧波 315000）

甲霜靈和苯霜靈屬于內(nèi)吸性殺菌劑，可用于防治卵菌綱病害，如防治葡萄霜霉病、馬鈴薯、草莓等疫霉病。內(nèi)吸性殺菌劑可進(jìn)入植物體內(nèi)，水溶性和殺菌效果均高于一般殺菌劑。由于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)需要大量使用，環(huán)境中廣泛存在甲霜靈和苯霜靈。

隨著人們對(duì)食品安全和生態(tài)環(huán)境健康的重視，這幾年對(duì)甲霜靈和苯霜靈的殘留測(cè)試皆有報(bào)道，主要為食品中的農(nóng)藥殘留測(cè)試，采用氣相色譜質(zhì)譜法[1]或LC-MS/MS 等方法對(duì)不同的食品進(jìn)行測(cè)試。而環(huán)境中對(duì)甲霜靈和苯霜靈的殘留測(cè)試相對(duì)較少，何書(shū)海采用自動(dòng)固相萃取/高效液相色譜法對(duì)海南地區(qū)的土壤和地表水進(jìn)行甲霜靈殘留量的測(cè)試。房健采用氣相色譜質(zhì)譜法對(duì)水中苯霜靈和甲霜靈濃度進(jìn)行測(cè)試。目前采用氣相色譜質(zhì)譜法對(duì)土壤中苯霜靈和甲霜靈進(jìn)行殘留測(cè)試尚未報(bào)道。本文采用經(jīng)典索氏提取法萃取土壤樣品中的甲霜靈和苯霜靈，運(yùn)用氣相色譜質(zhì)譜法進(jìn)行分析。因目前氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀在環(huán)境測(cè)試領(lǐng)域普及度較高，結(jié)合經(jīng)典索氏提取，該項(xiàng)目的檢測(cè)推廣可行性高。本方法的建立可以為土壤中甲霜靈和苯霜靈的測(cè)試提供參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，安捷倫7890B-5977B；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，東京理化N-1300V-W；氮吹儀，青島海科DCY-12SD；固相萃取裝置，Supelco 57044；商品化固相萃取小柱：ProElut CARB/NH2，500mg/500mg/6mL，迪馬科技。

正己烷，丙酮：農(nóng)殘級(jí)，CNW，上海安譜。甲醇：色譜純，CNW，上海安譜。

無(wú)水硫酸鈉，氯化鈉：分析純，國(guó)藥試劑，在400℃下加熱6h，除去表面吸附法有機(jī)化合物，冷卻后保存于干凈的試劑瓶中，置于干燥器中保存。

石英砂（20～50目）：在450℃下加熱4h 后冷卻，置于玻璃瓶中干燥器內(nèi)保存。

甲霜靈，苯霜靈：純度99.5%，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer。

甲醇中苯霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度2 000mg/L：準(zhǔn)確稱量約20.0mg 苯霜靈于10mL 容量瓶中，用甲醇定容。

丙酮中甲霜靈標(biāo)注溶液，濃度2 000mg/L：準(zhǔn)確稱量約20.0mg 甲霜靈于10mL 容量瓶中，用丙酮定容。

1.2 儀器工作條件

色譜條件。進(jìn)樣口溫度260℃，不分流進(jìn)樣；柱流量1.0mL/min；柱溫條件：DB-5ms，30m×0.25mm×0.25μm，70℃保持1min，20℃/min 升至320℃，保持1min；進(jìn)樣量：1.0μL。

質(zhì)譜條件。電子轟擊源（EI）；離子源溫度230℃；離子化能量70eV；四極桿溫度150℃；接口溫度280℃；溶劑延遲時(shí)間：4min；掃描模式：全掃描（SCAN）和選擇離子掃描（SIM）。SCAN 質(zhì)量范圍：40～500amu；SIM 特征離子：苯霜靈定量離子148，輔助定性離子206、325；甲霜靈定量離子206，輔助定性離子132、279。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 土壤采集與制備

土壤樣品按照HJ/T166的相關(guān)要求采集和保存，樣品在潔凈的具塞磨口棕色玻璃瓶中保存。運(yùn)輸過(guò)程中密封、避光、4℃以下冷藏。運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室后，若不能及時(shí)分析，于4℃以下密封、冷藏、避光，保存時(shí)間不能超過(guò)10d。

將樣品放在搪瓷托盤(pán)上，混勻，除去枝棒、葉片、石子等異物，按照四分法粗分。稱取20g（精確到0.01g）的新鮮樣品，加入適量無(wú)水硫酸鈉研磨均化成流沙狀顆粒，待用。

1.3.2 萃取

將制備好的土壤樣品用雙層濾紙包住轉(zhuǎn)移至索氏提取器中，加入100mL 正己烷/丙酮混合溶劑（1+1），提取12h，保證每小時(shí)回流速度4～6次。收集提取溶液，用正己烷/丙酮（1+1）混合溶劑淋洗2次，合并提取溶液，過(guò)無(wú)水硫酸鈉脫水柱，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器濃縮至約5mL，待層析柱凈化。

1.3.3 柱層析凈化

用5mL 丙酮/正己烷（1+2）活化石墨化炭黑氨基柱，棄去流出液。將樣品溶液轉(zhuǎn)移至小柱上，用含丙酮/正己烷（1+2）6mL 分三次洗滌燒瓶，將洗滌液一并轉(zhuǎn)移到凈化柱上，然后用丙酮/正己烷（1+2）25mL 洗脫，收集全部流出液，氮吹濃縮定容至1mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 萃取時(shí)間的選擇

因經(jīng)典索氏提取時(shí)間較長(zhǎng)，一般為16～18h。本次實(shí)驗(yàn)對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，分別選擇8h、12h、16h 作為實(shí)驗(yàn)條件，每個(gè)萃取時(shí)間分別平行實(shí)驗(yàn)6次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1，測(cè)定值為6次平行測(cè)試結(jié)果的平均值。

表1 不同萃取時(shí)間下的甲霜靈和苯霜靈的測(cè)試結(jié)果

從表1看出，萃取時(shí)長(zhǎng)為8h，萃取效率偏低。而萃取12h和16h，萃取效率非常接近，達(dá)到80%～120%，滿足環(huán)境樣品質(zhì)量控制要求。因此選擇12h 作為萃取時(shí)間，既可以達(dá)到理想的回收率，又可提高工作效率，比經(jīng)典索氏提取的時(shí)間縮短了4～6h。

2.2 凈化方式的選擇

在索氏提取時(shí)，由于長(zhǎng)時(shí)間的萃取，土壤中的許多雜質(zhì)如大分子脂類、色素等連同甲霜靈和苯霜靈一起被提取出來(lái)，這些雜質(zhì)會(huì)干擾測(cè)定，因此須采用凈化方法將雜質(zhì)去除。土壤凈化常用的方式有濃硫酸凈化法和固相萃取凈化法，本文對(duì)兩種凈化方式進(jìn)行了對(duì)比。

濃硫酸凈化法利用濃硫酸的強(qiáng)氧化性破壞提取液中的脂肪、色素等大分子雜質(zhì)，從而達(dá)到凈化效果。因苯霜靈在硫酸性條件下較穩(wěn)定，回收率較高，基本在75%～118%。而甲霜靈因在強(qiáng)酸條件下穩(wěn)定性差，回收率較低，基本在30%～64%。

固相萃取凈化法采用商品化石墨化炭黑氨基柱對(duì)土壤樣品進(jìn)行凈化，石墨化炭黑可以去除色素，氨基可以去除脂肪類化合物，兩者結(jié)合可有效去除大部分雜質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果甲霜靈和苯霜靈的回收率在82%～125%，因此選擇固相萃取作為本法目標(biāo)物的凈化方式。

2.3 方法的線性關(guān)系和檢出限

取甲霜靈和苯霜靈混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00mg/L 標(biāo)準(zhǔn)系列，按照本實(shí)驗(yàn)儀器條件，以目標(biāo)物濃度為橫坐標(biāo)，以目標(biāo)物定量離子響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，甲霜靈和苯霜靈均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，甲霜靈線性相關(guān)系數(shù)r=0.998，苯霜靈線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 2。

取10.00g 石英砂，甲霜靈和苯霜靈加標(biāo)濃度分別為0.029 6mg/kg、0.032 4mg/kg，7次平行測(cè)定，計(jì)算7次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，根據(jù)MDL=3.143×S計(jì)算得到甲霜靈的檢出限為0.004mg/kg（以10g 土壤計(jì)），苯霜靈檢出限為0.003mg/kg（以10g 土壤計(jì)）。

2.4 方法的精密度、準(zhǔn)確度

稱取20g 新鮮土壤樣品進(jìn)行加標(biāo)，甲霜靈加標(biāo)量分別為0.198μg、0.495μg，苯霜靈加標(biāo)量分別為0.216μg、0.540μg，每組濃度平行測(cè)試6次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2和表3。甲霜靈回收率分別為93.4%和96.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.0%和4.2%；苯霜靈回收率分別為87.5%和93.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為6.7%和2.3%。

表2 甲霜靈加標(biāo)回收率測(cè)試表

表3 苯霜靈加標(biāo)回收率測(cè)試表

3 結(jié)束語(yǔ)

采用索氏提取、柱層析凈化、氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定土壤中甲霜靈和苯霜靈，方法靈敏度高、準(zhǔn)確度高、實(shí)用性強(qiáng)，可為土壤中甲霜靈和苯霜靈的檢測(cè)提供一定的技術(shù)支持。