李璐璐1，關(guān)昕睿1，王子璇1，郭曉玉1，穆英麗1，解佳1，陳立功1★，王學(xué)靜1,2★

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定071001；2.河北省畜牧獸醫(yī)研究所，河北保定071000）

2020 年11 月， 河北某養(yǎng)殖場(chǎng)初生仔豬發(fā)生嘔吐、腹瀉，為了確定其病因，對(duì)該場(chǎng)發(fā)病仔豬進(jìn)行了臨床癥狀觀察、病理學(xué)剖檢、腹瀉病毒分子生物學(xué)診斷和細(xì)菌學(xué)診斷，初步判定該場(chǎng)仔豬發(fā)生了豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）和大腸桿菌的混合感染，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 發(fā)病情況

2020 年11 月初河北某養(yǎng)殖場(chǎng)初生仔豬開(kāi)始發(fā)生嘔吐、腹瀉，主訴發(fā)病仔豬為該養(yǎng)豬場(chǎng)產(chǎn)房3～10 日齡仔豬， 其中3～7 日齡仔豬發(fā)病率為100%，死亡率為75%～100%；8～10 日齡仔豬發(fā)病率為60%，死亡率為20%～30%。

2 臨床癥狀

發(fā)病仔豬主要表現(xiàn)為水樣腹瀉和排黃色稀便，部分仔豬哺乳后發(fā)生嘔吐， 發(fā)病后2～3 天后開(kāi)始脫水，脫水嚴(yán)重個(gè)體在昏迷中死亡。

3 剖檢病變

取3 頭病死豬剖檢病變主要為消瘦。 腹股溝淋巴結(jié)、頜下淋巴結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)呈紅褐色（3/3）。胃內(nèi)有未消化奶塊，胃黏膜瘀血（3/3）。 小腸腔內(nèi)充滿黃色稀薄液體（3/3）。部分仔豬腎臟見(jiàn)針尖大小出血點(diǎn)（1/3）。其他臟器未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)病變。

4 腹瀉病毒分子生物學(xué)診斷

取腹瀉死亡仔豬的小腸和腸系膜淋巴結(jié)等組織，立即進(jìn)行研磨。 研磨病料經(jīng)8000 轉(zhuǎn)/分鐘4℃離心2分鐘， 提取離心后上清液中病毒RNA，然后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，取cDNA 分別進(jìn)行PEDV、 傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、 豬 輪 狀 病 毒 （Porcine rotavirus，PoRV） 及 豬 丁 型 冠 狀 病 毒（Porcine deltacoronavirus，PDCoV） 的PCR 擴(kuò)增。PCR 產(chǎn)物經(jīng)2% 瓊脂糖凝膠電泳， 結(jié)果表明腹瀉仔豬病料呈PEDV 陽(yáng)性（見(jiàn)圖1），呈TGEV、PoRV和PDCOV 陰性（電泳圖略）。

5 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)

取小腸內(nèi)容物分別接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基平板和十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基平板，37℃培養(yǎng)24～48 小時(shí)。 十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基平板未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)。 麥康凱培養(yǎng)基上可見(jiàn)邊緣整齊、稍突起、表面光滑濕潤(rùn)， 粉紅色或深紅色的圓形菌落；伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上呈紫黑色帶金屬光澤的圓形菌落。 代表性單菌落純化后進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。 結(jié)果鏡下可見(jiàn)純化細(xì)菌為革蘭氏陰性短小桿菌，不形成芽孢。根據(jù)以上特征可初步判斷該細(xì)菌為大腸桿菌。 用紙片擴(kuò)散（K-B）法檢測(cè)該大腸桿菌對(duì)阿莫西林、氟苯尼考、林可霉素、慶大霉素、新霉素、恩諾沙星、多西環(huán)素和紅霉素等8 種抗菌藥物的敏感性。 藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，大腸桿菌僅對(duì)新霉素和慶大霉素高敏；對(duì)恩諾沙星低敏；對(duì)其余5 種藥物均耐藥。

6 討論與分析

據(jù)豬場(chǎng)管理人員介紹，該豬場(chǎng)所有母豬均接種過(guò)PED 疫苗，但根據(jù)臨床癥狀觀察、病理學(xué)剖檢、腹瀉病毒分子生物學(xué)診斷和細(xì)菌學(xué)診斷結(jié)果，初步判定該豬場(chǎng)初生仔豬發(fā)生了豬流行性腹瀉與大腸桿菌混合感染。 建議采取以下措施：

6.1 加強(qiáng)初生仔豬的飼養(yǎng)管理

圖1 PEDV PCR 產(chǎn)物電泳結(jié)果

PED 可以發(fā)生于幼齡仔豬、育肥豬和母豬， 但10 日齡內(nèi)哺乳仔豬更為易感PEDV。 2020 年冬季較為寒冷，因此，在冬季應(yīng)做好豬舍，尤其是產(chǎn)房的通風(fēng)、干燥和保溫工作。

6.2 及時(shí)調(diào)查PED 免疫失敗原因

本試驗(yàn)結(jié)果表明該豬場(chǎng)發(fā)生了PED 免疫失敗的現(xiàn)象。 導(dǎo)致PED 免疫失敗因素較多， 如免疫程序不合理；疫苗因運(yùn)輸、保存不當(dāng)或疫苗取出后在免疫接種前受到日光的直接照射，均會(huì)影響免疫效果；此外，新的PEDV 變異毒株的出現(xiàn)， 也可能是當(dāng)前該病流行的原因。

6.3 治療方法

發(fā)病仔豬應(yīng)立即隔離，及時(shí)對(duì)豬舍、用具等進(jìn)行徹底消毒。 發(fā)病早期給腹瀉仔豬注射敏感抗菌藥物，適當(dāng)補(bǔ)充葡萄糖氯化鈉溶液，日齡稍大的仔豬部分成活。

6.4 優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌疫苗的接種

產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)也可致仔豬發(fā)生腹瀉，致初生仔豬腹瀉大腸桿菌O 血清型眾多，這可能是當(dāng)前豬場(chǎng)很少使用大腸桿菌疫苗的原因。 因此，大腸桿菌耐藥日趨嚴(yán)重情況下，應(yīng)使用適于該地區(qū)的優(yōu)勢(shì)血清型大腸桿菌疫苗為母豬進(jìn)行接種。