何文潔，杜小正，王娜娜，張馨予，鄭欣，李夢(mèng)莘

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 針灸推拿學(xué)院，蘭州 730000)

RA是一種復(fù)雜的慢性多系統(tǒng)自身免疫性疾病，炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致血管痙攣和破骨細(xì)胞形成，最終導(dǎo)致骨和軟骨的破壞[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，RA的全球患病率約為1%[2]，而我國發(fā)病率為0.26%～0.50%，且女性發(fā)病率高于男性[3]，該病最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失，致殘率高，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。目前對(duì)于RA的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但有研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)貫穿RA發(fā)病的始終，炎性因子引起的滑膜成纖維細(xì)胞增殖是該疾病病理的核心[4]。嘌呤能離子通道型受體7(purinergic ligand-gated ion channel 7 receptor，P2X7R)是嘌呤受體P2X家族受體亞型之一，屬三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)門控的非選擇性陽離子通道，其激活導(dǎo)致多種促炎因子的釋放[5]。近年來，大量證據(jù)表明，P2X7R與RA的發(fā)病密切相關(guān)[6]，參與免疫和炎癥的發(fā)生及進(jìn)展，有望成為疾病診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物。因此，探究P2X7R與RA的相關(guān)性，可進(jìn)一步了解RA的發(fā)病機(jī)制并為其提供新的診療思路。

1 P2X7R的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能

人類P2X7R最初是從人單核細(xì)胞cDNA文庫中克隆出來的，其信息來自于克隆大鼠的P2X7R基因序列[7]。P2X7R基因位于染色體12q24上，53 kb，具有高度多態(tài)性，編碼由595個(gè)氨基酸組成的多肽鏈。P2X各亞型的基本結(jié)構(gòu)均由胞內(nèi)的氨基端(N端)與羧基端(C端)、2個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和1個(gè)胞外環(huán)組成。其N端序列結(jié)構(gòu)高度保守，由395個(gè)氨基酸構(gòu)成；C端包含蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的結(jié)合模序，由239個(gè)氨基酸構(gòu)成，是P2X受體家族成員中最長的序列[8]，這種結(jié)構(gòu)賦予P2X7R獨(dú)特的生理功能。P2X7R的胞外結(jié)構(gòu)域是一個(gè)包含18～21個(gè)氨基酸殘基、3個(gè)N-糖基化位點(diǎn)和1個(gè)含有10個(gè)半胱氨酸的區(qū)域，此區(qū)域是ATP的結(jié)合位點(diǎn)[9]。研究發(fā)現(xiàn)，P2X7R廣泛表達(dá)于巨噬細(xì)胞、DC、T細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞，影響免疫細(xì)胞功能[10]。

ATP是P2X7R的天然配體，P2X7R對(duì)高濃度ATP及其激動(dòng)劑BzATP異常敏感。在激活狀態(tài)下可由離子通道轉(zhuǎn)化為大的細(xì)胞孔徑，參與機(jī)體遞質(zhì)釋放、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、炎癥反應(yīng)等生理病理過程[11]。P2X7R為雙向功能受體，其通道開放程度與ATP濃度及作用時(shí)間密切相關(guān)。短時(shí)間較低濃度ATP刺激P2X7R時(shí)引起非選擇性陽離子通道開放，介導(dǎo)Na+、Ca2+內(nèi)流和K+外流；較高濃度或持續(xù)ATP刺激時(shí)細(xì)胞膜表面形成大的質(zhì)膜孔道，允許相對(duì)分子質(zhì)量900以下的有機(jī)陽離子和細(xì)菌代謝物通過，最終可誘導(dǎo)炎性因子釋放和細(xì)胞凋亡[12]。

2 P2X7R與RA

2.1 P2X7R誘導(dǎo)炎性因子的釋放細(xì)胞因子作為一類免疫調(diào)節(jié)介質(zhì)，在RA的發(fā)病、進(jìn)展及預(yù)后中起到重要作用[13]。其中，IL-1、IL-6、IL-17及TNF-α等在RA滑膜病變中起關(guān)鍵作用，是RA發(fā)病的重要促炎因子。大量證據(jù)表明，P2X7R水平在多種炎癥病理?xiàng)l件下均有上調(diào)。P2X7R的激活可誘導(dǎo)與炎癥損傷密切相關(guān)的IL-6、IL-1β、TNF-α等炎性因子的產(chǎn)生和釋放[14]。

研究發(fā)現(xiàn)，P2X7R在人單核與吞噬細(xì)胞中功能性表達(dá)，同時(shí)也可以偶聯(lián)IL-1β和IL-18的釋放[15]。Chen等[16]發(fā)現(xiàn)，P2X7R在RA患者滑膜組織中高表達(dá)，其表達(dá)與炎性因子IL-1β、IL-6、IL-18的水平呈正相關(guān)，阻斷P2X7R可抑制炎性因子分泌，抑制炎癥反應(yīng)，對(duì)RA有較好的治療價(jià)值。Shieh等[17]發(fā)現(xiàn)P2X7R被ATP及激動(dòng)劑BzATP激活后可誘導(dǎo)IL-6、TNF-α、CCL2 mRNA表達(dá)，并能促進(jìn)炎性因子IL-6、TNF-α及趨化因子CCL2的釋放，與P2X7R基因被敲除細(xì)胞有顯著差異。動(dòng)物研究也表明，P2X7R在鏈球菌細(xì)胞壁誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎滑膜組織中高表達(dá)，而抑制P2X7R可緩解關(guān)節(jié)炎癥和糜爛進(jìn)展[18]。這些研究均提示，P2X7R與炎癥的發(fā)生密切相關(guān)，通過調(diào)控炎性因子的分泌，進(jìn)而參與RA的發(fā)病。

2.2 P2X7R參與炎性疼痛有研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)膠質(zhì)ATP受體P2X7R參與了對(duì)病理性疼痛的調(diào)節(jié)[19]。在炎癥與細(xì)胞損傷時(shí)，P2X7R被胞外ATP激活，誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生IL-6、IL-18及TNF-α等[20]，進(jìn)而參與病理性疼痛的發(fā)展。關(guān)節(jié)疼痛是關(guān)節(jié)炎的主要癥狀之一，炎癥性疼痛與P2X7R的激活密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠關(guān)節(jié)內(nèi)注射碘乙酸鈉引起的關(guān)節(jié)疼痛與脊髓ATP釋放和P2X7R的特異性上調(diào)有關(guān)，阻斷P2X7R可預(yù)防和逆轉(zhuǎn)機(jī)械性異位性疼痛[21]。動(dòng)物研究表明，P2X7R可以增強(qiáng)蜂毒誘導(dǎo)下慢性約束應(yīng)激引起的炎癥性疼痛，而使用P2X7R拮抗劑全身預(yù)處理后機(jī)械痛縮足閾值升高，同時(shí)可緩解炎癥性疼痛[22]。類似的研究發(fā)現(xiàn)，給神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型注射P2X7R拮抗劑A740003能減輕其引起的急性疼痛，還可抑制甲醛引起的二相痛[23]。由上可知，P2X7R在炎癥性疼痛敏感中扮演了重要角色，P2X7R的激活可能參與了RA的炎癥性疼痛，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

2.3 P2X7R促進(jìn)Th17存活和分化Th17在自身免疫性疾病和機(jī)體防御反應(yīng)中具有重要意義，P2X7R通過介導(dǎo)Th的存活和分化，誘導(dǎo)炎性因子的分泌，在RA的發(fā)病中起到重要作用。Fan等[24]通過Ⅱ型膠原(Ⅱ collagen，CⅡ)誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎模型發(fā)現(xiàn)，CⅡ通過介導(dǎo)P2X7R信號(hào)來調(diào)控Th17的分化，阻斷P2X7R信號(hào)可使促進(jìn)Th17分化的細(xì)胞因子(如IL-1β、TGF-β1和IL-6)的分泌減少，同時(shí)可以減輕CⅡ介導(dǎo)的小鼠關(guān)節(jié)損傷。另外，P2X7R參與CⅡ誘導(dǎo)DC釋放ATP，發(fā)現(xiàn)在CⅡ作用下ATP釋放與P2X7R之間存在相互關(guān)系，CⅡ誘導(dǎo)的P2X7R活化通過膜孔的形成促進(jìn)ATP釋放，同時(shí)ATP的強(qiáng)化刺激增強(qiáng)了P2X7R的表達(dá)。因此，P2X7R信號(hào)促進(jìn)了DC衍生細(xì)胞因子發(fā)展，促進(jìn)T細(xì)胞存活和分化，進(jìn)而起到促炎作用。

2.4 P2X7R激活細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑RA的發(fā)病與細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)，而這些信號(hào)通路是炎癥反應(yīng)的核心。P2X7R的激活可通過多種特異性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響細(xì)胞功能，包括Nod樣受體蛋白3 (Nod-like receptor protein 3， NLRP3)炎性小體的活化、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)等通路，其下游可介導(dǎo)炎性因子的轉(zhuǎn)錄和激活，在免疫及炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。

2.4.1 激活NLRP3炎性小體 NLRP3炎性小體是一種廣泛存在于細(xì)胞胞質(zhì)中的多蛋白復(fù)合物，被激活后可促使Caspase-1活化，誘導(dǎo)IL-1β及IL-18的生成和分泌，從而發(fā)揮對(duì)細(xì)胞的調(diào)控作用，在機(jī)體的固有免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用[25]。研究證實(shí)，P2X7R的激活促使下游NLRP3炎性小體的形成，這是細(xì)胞內(nèi)參與危險(xiǎn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和炎癥啟動(dòng)的主要復(fù)合物[26]。炎癥或細(xì)胞損傷時(shí)胞外ATP激活P2X7R，使細(xì)胞膜上的離子通道開放，形成非特異性的孔道Pannexin-1，細(xì)菌及其產(chǎn)物通過該孔道進(jìn)入胞質(zhì)內(nèi)與NLRP3蛋白的LRR結(jié)合，使得NLRP3炎性小體被激活，活化的NLRP3進(jìn)而激活Caspase-1，從而促使IL-1β由前體蛋白轉(zhuǎn)換為有活性的IL-1β，大量IL-1β釋放至機(jī)體，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加劇[27]。因此，P2X7R膜孔的形成是激活炎性小體的必要條件。此外，細(xì)胞內(nèi)K+濃度的改變也是NLRP3炎性小體激活的一個(gè)重要信號(hào)。研究發(fā)現(xiàn)，LL-37能夠激活人類和小鼠巨噬細(xì)胞中炎性小體的中心酶Caspase-1，介導(dǎo)IL-1β和IL-18的釋放，其激活NLRP3炎性小體是通過P2X7R介導(dǎo)的K+外流引起的[28]。NLRP3炎性小體的激活與RA的炎癥活動(dòng)密切相關(guān)，Niemi等[29]發(fā)現(xiàn)血清淀粉樣蛋白A可通過P2X7R激活NLRP3炎性小體促進(jìn)IL-1β的分泌，進(jìn)而參與RA的發(fā)病。另有研究發(fā)現(xiàn)，NLRP3炎性小體的一些基因多態(tài)性與RA的遺傳易感性、疾病早期活動(dòng)情況有著密切的聯(lián)系[30]。

2.4.2 激活MAPK信號(hào)通路 MAPK是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)一類高度保守的絲氨酸蛋白激酶，其作為細(xì)胞內(nèi)重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，介導(dǎo)了細(xì)胞的生長、分化、發(fā)育、凋亡等多種生理過程。有研究發(fā)現(xiàn)，其在RA滑膜中活化明顯增強(qiáng)，參與了關(guān)節(jié)炎癥及骨質(zhì)破壞[31]。p38/MAPK信號(hào)通路是介導(dǎo)RA滑膜炎癥的核心機(jī)制，能被TNF-α、IL-1等細(xì)胞因子激活，而活化后又可產(chǎn)生細(xì)胞因子，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，由此使關(guān)節(jié)炎癥遷延進(jìn)展[32]。研究發(fā)現(xiàn)，P2X7R可通過p38/MAPK信號(hào)通路調(diào)控炎癥介質(zhì)的釋放[33]，P2X7R激動(dòng)劑BzATP刺激人單核細(xì)胞，能引起MAPK、NF-κB、COX2和組織因子的激活，進(jìn)而參與炎癥反應(yīng)，此過程與膜孔形成、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和介導(dǎo)子形成有關(guān)[34]。當(dāng)P2X7R被激活時(shí)，離子通道開放，促進(jìn)Na+、Ca2+內(nèi)流，K+外流，胞內(nèi)Ca2+濃度的升高使Ca2+非依耐性磷脂酶A2活性升高，從而誘導(dǎo)溶酶體內(nèi)的成熟IL-1β釋放至胞質(zhì)中[35]，IL-1β進(jìn)一步作用于下游p38/MAPK信號(hào)通路，p38MAP激酶磷酸化導(dǎo)致其活化，從而促進(jìn)炎性因子的表達(dá)。P2X7R阻滯劑可通過抑制p38/MAPK通路降低p38MAP激酶的活化，減少促炎因子的分泌，從而減輕炎癥反應(yīng)。Lan等[36]通過動(dòng)物研究表明，抑制MAPK信號(hào)通路可以抑制RA大鼠的炎癥反應(yīng)。綜上所述，P2X7R通過激活p38/MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，增強(qiáng)炎性因子轉(zhuǎn)錄，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。

2.5 P2X7R基因多態(tài)性與RA的相關(guān)性人類P2X7R基因具有高度多態(tài)性，其編碼區(qū)的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)影響其表達(dá)和功能。Al-Shukaili等[37]研究發(fā)現(xiàn)，1513A/C基因型與RA患者中RF和抗突變型瓜氨酸波形蛋白自身抗體的存在密切相關(guān)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)RA組1068 A/A基因型頻率與對(duì)照組相比明顯增加(為對(duì)照組的2倍)，這種多態(tài)性與RA患者CRP的平均濃度顯著相關(guān)。P2X7R基因中第1068位和第1513位的多態(tài)性可能是RA的發(fā)病機(jī)制之一。已有研究發(fā)現(xiàn)，P2X7R基因多態(tài)性與IL-1β的表達(dá)相關(guān)聯(lián)，其有利于促炎因子的分泌，不同位點(diǎn)的SNP對(duì)IL-1β的分泌影響各不相同[38-39]。綜上所述，P2X7R基因多態(tài)性可能與RA的易感性相關(guān)，參與了RA的發(fā)病。

3 結(jié)語

P2X7R與RA的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，其被胞外ATP激活后介導(dǎo)炎性因子的釋放、參與病理性炎癥性疼痛、激活胞內(nèi)多種信號(hào)通路，從而發(fā)揮一列生物學(xué)效應(yīng)，對(duì)RA的發(fā)病起著重要的調(diào)控作用。此外，P2X7R基因多態(tài)性可能與RA的易感性有關(guān)，其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究證實(shí)。目前，P2X7R在RA中的具體表達(dá)及分子調(diào)控機(jī)制尚未明確。因此，未來應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注P2X7R在RA治療與康復(fù)中的變化規(guī)律，明確其在RA發(fā)病及康復(fù)中的分子調(diào)控機(jī)制，以期為RA的靶向治療提供理論依據(jù)。