李栗妍，于月新，張 寧，劉星池，閆 麗，王愷悅

北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)科，遼寧 沈陽(yáng) 110000

近年來(lái)，不孕不育癥的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，在不孕癥中，免疫性不孕約占10%[1]。隨著生殖免疫學(xué)科的發(fā)展，免疫因素是不孕不育的重要因素已達(dá)成共識(shí)[2]。而且，生殖免疫學(xué)是具有獨(dú)特反應(yīng)系統(tǒng)的臨床免疫學(xué)，任何環(huán)節(jié)發(fā)生異常，均有可能導(dǎo)致免疫病理反應(yīng)，最終引起不孕、流產(chǎn)。在輔助生殖技術(shù)中，免疫性抗體所發(fā)揮的作用越來(lái)越受到臨床學(xué)者的關(guān)注[3]。體外受精/卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射的臨床妊娠率已達(dá)到50%～60%，排除高齡、生殖系統(tǒng)畸形、遺傳等因素后，仍有10%的女性經(jīng)過(guò)多個(gè)周期治療未能成功妊娠，通常歸為反復(fù)種植失敗(recurrent implantation failure，RIF)[4]。RIF的定義目前尚無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，2018年，我國(guó)《胚胎植入前遺傳學(xué)診斷/篩查專(zhuān)家共識(shí)》將RIF定義為移植3次以上或移植高評(píng)分卵裂球期胚胎數(shù)4～6個(gè)或高評(píng)分囊胚數(shù)3個(gè)及以上均失敗者[5]。目前，RIF的原因尚未完全明確，主要包括胚胎因素、子宮因素、免疫因素等[6]。本研究旨在探討抗精子抗體、抗子宮內(nèi)膜抗體與RIF的相關(guān)性，為RIF的臨床治療提供參考依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1—12月于北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院進(jìn)行胚胎移植失敗的218例患者為B組，年齡25～35歲，平均年齡(30±3)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并生殖道感染、染色體異常、生殖器官腫瘤；合并心血管、肝、腎疾病及全身造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾??；其他影響生育的疾病。另選取同期進(jìn)行同種獲卵方式、移植周期數(shù)≤2個(gè)周期、確定臨床妊娠(移植后超聲檢查確定臨床妊娠，并維持妊娠時(shí)間>13周)的321例孕婦作為A組，年齡25～35歲，平均年齡(30±3)歲。兩組研究對(duì)象的年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有研究對(duì)象均知情同意。

1.2 研究方法 抽取兩組研究對(duì)象的外周靜脈血3 ml，離心分離血清，應(yīng)用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀，采用化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法檢測(cè)抗精子抗體和抗子宮內(nèi)膜抗體(試劑由北京源德生物醫(yī)學(xué)工程有限公司提供)，將發(fā)光物質(zhì)直接標(biāo)記在抗原或抗體上，或使用酶作用于發(fā)光底物上，利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器測(cè)量出發(fā)光物質(zhì)或酶反應(yīng)底物上光子的數(shù)量，得到免疫反應(yīng)時(shí)的被測(cè)物質(zhì)濃度，進(jìn)而判定被檢測(cè)物質(zhì)的陰陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：陰性對(duì)照品的平均相對(duì)發(fā)光單位(relative light unit，RLU)的2.1倍為Cut Off值；用每個(gè)樣品的RLU與Cut Off的比值(S/CO)來(lái)判斷該樣本為陰性或陽(yáng)性，其中，S/CO≤1.0為陰性，S/CO>1.0為陽(yáng)性(各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室建立自己的Cut Off值)。本研究實(shí)驗(yàn)室擁有完整的質(zhì)量控制體系，可保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。比較兩組研究對(duì)象抗精子抗體、抗子宮內(nèi)膜抗體的陽(yáng)性率。

2 結(jié)果

B組抗精子抗體陽(yáng)性者27例(12.39%)，抗子宮內(nèi)膜抗體陽(yáng)性者19例(8.72%)，兩種抗體均為陽(yáng)性者6例(2.75%)。A組抗精子抗體陽(yáng)性者56例(17.45%)，抗子宮內(nèi)膜抗體陽(yáng)性者43例(13.40%)，兩種抗體均為陽(yáng)性者20例(6.23%)。兩組抗精子抗體陽(yáng)性率、抗子宮內(nèi)膜抗體陽(yáng)性率及兩種抗體陽(yáng)性率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

正常情況下，胚胎和精子對(duì)于母體來(lái)說(shuō)是異己的，男性精液這一異物可引起生殖道局部免疫反應(yīng)，精子抗原誘導(dǎo)免疫反應(yīng)產(chǎn)生抗精子抗體[7]?？咕涌贵w產(chǎn)生后會(huì)對(duì)精子的質(zhì)膜顆粒流動(dòng)能力造成影響，降低精子質(zhì)量[8]。抗精子抗體可與精子表面抗原特異性結(jié)合。早期胚胎表達(dá)精子抗原，同時(shí)，抗精子抗體可識(shí)別并結(jié)合精子抗原，通過(guò)激活補(bǔ)體、巨噬細(xì)胞和殺傷細(xì)胞來(lái)殺傷受精卵和早期胚胎；還可通過(guò)抑制早期的胚胎卵裂，大大降低優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)量，進(jìn)而影響胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育；同時(shí)阻礙胚胎的植入，進(jìn)而導(dǎo)致胚胎的種植失敗和早期流產(chǎn)[9-10]。

抗子宮內(nèi)膜抗體主要存在于子宮內(nèi)膜中，是一種特異性自身抗體[11]，主要與子宮內(nèi)膜異位刺激及體內(nèi)環(huán)境失調(diào)有關(guān)。該抗體對(duì)子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)進(jìn)行破壞，影響子宮內(nèi)膜發(fā)育，使受精卵著床和胚胎發(fā)育不良，是導(dǎo)致孕婦流產(chǎn)的重要因素。大量研究報(bào)道，不孕不育患者抗子宮內(nèi)膜抗體、抗精子抗體等檢測(cè)水平明顯高于正常孕婦，生殖免疫抗體陽(yáng)性是育齡婦女不孕的主要原因之一[12-13]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A、B兩組研究對(duì)象的抗精子抗體陽(yáng)性率、抗子宮內(nèi)膜抗體陽(yáng)性率及兩種抗體陽(yáng)性率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示抗精子抗體和抗子宮內(nèi)膜抗體與RIF并無(wú)明顯相關(guān)性，不具有臨床特異性。抗精子抗體、抗子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)已經(jīng)被臨床廣泛應(yīng)用多年，目前常用的檢測(cè)方法主要有化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫熒光法等，但不同的檢測(cè)方法及不同的試劑盒往往檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)一定的差異性，甚至出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。因此，在檢測(cè)這些抗體的過(guò)程中實(shí)驗(yàn)方法的選擇和嚴(yán)格的質(zhì)量控制至關(guān)重要[14]。且本實(shí)驗(yàn)室僅對(duì)IgG型進(jìn)行檢測(cè)分析，未對(duì)其他分型進(jìn)行檢測(cè)，而這兩種抗體不同分型的陽(yáng)性率結(jié)果是否對(duì)RIF的發(fā)生發(fā)展有著不同的臨床意義，將是筆者今后工作中應(yīng)該研究探索的內(nèi)容。

綜上所述，抗精子抗體和抗子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)在RIF患者中并無(wú)明顯相關(guān)性及特異性。對(duì)抗精子抗體和抗子宮內(nèi)膜抗體在RIF的發(fā)生發(fā)展中的作用還需要在今后的工作中進(jìn)一步研究確證，以更好地為輔助生殖技術(shù)中免疫因素的診治提供更多的理論依據(jù)。