羅曉琴，江 平，程時磊 （青海省人民醫(yī)院分子病理科，西寧 810007）

葉酸(folic)由蝶啶(pteridine)、對氨基苯甲酸(PABA)和L-谷氨酸(L-glutamic acid)組成，體內(nèi)葉酸以四氫葉酸(tetrahydrofolate,THF)的形式起作用，5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶(methylene tetra hydro folate reductase,MTHFR）是葉酸代謝通路中的關(guān)鍵酶之一[1]。據(jù)國內(nèi)外多篇文獻記載，體內(nèi)葉酸利用能力障礙是構(gòu)成不良孕產(chǎn)的危險因素[2-3]，而葉酸利用能力障礙與編碼MTHFR 多態(tài)性有關(guān)。因此，MTHFR 與神經(jīng)管畸形、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)和妊娠期高血壓的發(fā)病率以及不孕癥等密切相關(guān)[3-5]。本研究致力于探討青海地區(qū)育齡女性MTHFR 在位點C677基因的多態(tài)性分布特征，旨在為青海地區(qū)育齡女性葉酸個體化補充提供科學(xué)依據(jù)。

1 對象和方法

1.1 研究對象 本研究選取2016年12月1日～2018年12月7日自青海省人民醫(yī)院進行葉酸代謝能力檢測的漢族及各少數(shù)民族育齡女性3 036例，年齡16～52歲，平均年齡29.8歲。其中孕前期及孕期2 008例，不孕癥患者1 028例。

1.2 儀器與試劑 本研究所用儀器為美國Applied Biosystems ViiaTM7 Dx Real-Time PCR Instrument，使用深圳奧薩公司的亞甲基四氫葉酸還原酶基因677C/T檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）檢測。

1.3 研究方法 DNA 提取與PCR 擴增：取受試者清晨空腹靜脈血1～2ml，EDTA 抗凝，提取血樣的全基因DNA，借助熒光PCR 技術(shù)進行檢測。反應(yīng)條件為：50℃ 2min，95℃ 2min，95℃ 15s，60℃1min，共45個循環(huán)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 對本研究人群樣本進行哈迪-溫伯格定律(Hardy-Weinberg)遺傳平衡檢驗,使用統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)軟件SPSS 25.0，對組間基因型及等位基因頻率對比采用χ2檢驗，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 青海地區(qū)孕前或孕早期女性與不孕癥女性MTHFR在位點C677基因多態(tài)性數(shù)據(jù)比較 見表1。通過數(shù)據(jù)比較，青海地區(qū)孕前或孕早期女性MTHFR在位點C677的TT 純合基因型頻率（20.72%）與不孕癥女性頻率（18.68%）接近，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.52，P=0.28)。

表1 青海地區(qū)孕前或孕早期女性與不孕癥女性MTHFR C677基因多態(tài)性比較[n（%）]

2.2 青海地區(qū)漢族與各少數(shù)民族女性MTHFR C677基因型多態(tài)性數(shù)據(jù)比較 見表2。通過數(shù)據(jù)比較，漢族女性MTHFR C677的TT 純合基因型頻率（20.70%）與藏族女性頻率（11.65%）差異較大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=25.06，P<0.05），而與回族、土族比較差異卻無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示青海地區(qū)漢族、藏族兩民族間的葉酸代謝能力存在明顯差異。

表2 青海地區(qū)不同民族女性間MTHFR C677基因多態(tài)性比較[n（%）]

2.3 青海地區(qū)漢族女性MTHFR C677基因多態(tài)性與不同地區(qū)數(shù)據(jù)比較 見表3。通過數(shù)據(jù)比較，青海地區(qū)漢族女性MTHFR C677的TT 純合基因型頻率（20.70%）與西藏漢族女性頻率[6]（20.43%）接近，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.86，P＜0.05)。但是，與佛山女性頻率[7]（27.70%）相比有較大差異。因此，青海地區(qū)與低海拔地區(qū)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，提示本地區(qū)基因多態(tài)性分布有高原海拔特異性。

表3 青海地區(qū)與其他地區(qū)漢族女性MTHFR C677基因多態(tài)性比較[n（%）]

3 討論

葉酸是人體必需的水溶性維生素之一，人體葉酸攝入不足或葉酸代謝障礙，均可表現(xiàn)為葉酸缺乏。研究表明，葉酸代謝障礙與胎兒神經(jīng)管畸形、先天性心臟病及唐氏綜合征等多種出生缺陷密切相關(guān)[3]。我國是出生缺陷高發(fā)國家，衛(wèi)生部發(fā)布的《2012年中國出生缺陷防治報告》指出，我國每年出生缺陷新增病例高達90萬例,然而青海地區(qū)圍產(chǎn)兒出生缺陷發(fā)生率平均為100.43/萬[8]。為了預(yù)防出生缺陷，全國普遍實施了補充葉酸的措施，但是仍有部分女性即便補充了葉酸，胎兒仍會發(fā)生出生缺陷，主要原因是遺傳因素導(dǎo)致的葉酸代謝障礙[9-10]。MTHFR是葉酸代謝過程中的關(guān)鍵酶，MTHFR C677是其多態(tài)性位點之一，此位點的突變將MTHFR 編碼蛋白中的一個丙氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)槔i氨酸，造成該酶活性的改變[11-12]。有研究表明，在同等條件下CT型和TT型女性細胞內(nèi)葉酸含量低于正?；蛐蚚9]。也有研究表明，TT型易導(dǎo)致高同型半胱氨酸癥，而高同型半胱氨酸是導(dǎo)致新生兒神經(jīng)管缺陷的重要危險因素[12-13]。因此，根據(jù)不同基因型做個性化的葉酸補充方案對于預(yù)防出生缺陷具有重要作用。

本研究統(tǒng)計分析了青海地區(qū)育齡女性葉酸代謝相關(guān)基因MTHFR C677基因位點多態(tài)性的分布特征，并就孕前及孕期女性和不孕癥女性群體做了比較。本研究發(fā)現(xiàn)，青海地區(qū)孕前或孕早期女性和不孕癥女性群體間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。從比較數(shù)據(jù)來看，青海地區(qū)漢族女性TT型頻率（20.70%）同藏族女性（11.65%）存在較大差異，而同回族（19.91%）、土族（20.72%）無統(tǒng)計學(xué)差異。同時本研究發(fā)現(xiàn)，如果將青海地區(qū)漢族基因多態(tài)性分布情況同多個已有文獻報道[9]的地區(qū)進行比較，研究顯示青海地區(qū)漢族女性TT型頻率（20.70%）與低海拔地區(qū)（遼源28.76%，淄博43.61%，鄭州36.78%，南寧7.71%，佛山27.70%，瓊海6.14%）差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而與高海拔西藏地區(qū)漢族女性（20.43%）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。因此，本地區(qū)漢族女性基因多態(tài)性分布顯然具有高原海拔特異性。

相關(guān)研究表明，人體對葉酸的利用受遺傳基因影響，葉酸缺乏是導(dǎo)致出生缺陷的主要原因之一。青海地區(qū)是多民族聚居地，各民族情況復(fù)雜。本研究通過分析比較青海地區(qū)各民族間葉酸利用能力差異及與低海拔地區(qū)的區(qū)別,發(fā)現(xiàn)青海地區(qū)漢族與各民族尤其是藏族在葉酸代謝關(guān)鍵酶基因多態(tài)性存在分布差異。青海地區(qū)女性與低海拔地區(qū)女性基因多態(tài)性分布相比存在明顯的高原海拔特異性，為后期制定個性化的葉酸營養(yǎng)補充方案提供了一定的參考依據(jù)。