段書強(qiáng) 鮑方 劉振邦 王菲 高慧敏 開蕾

乳腺癌被認(rèn)為是一種異質(zhì)性疾病，其生物學(xué)和表型特征差異巨大，其診斷和治療面臨挑戰(zhàn)[1]。在乳腺癌分型中，三陰性乳腺癌具有最差的預(yù)后，原因包括缺乏治療靶點(diǎn)、放化療敏感性低、腫瘤侵襲性高等[2]。研究發(fā)現(xiàn)，在浸潤(rùn)性乳腺癌病人中，CXC趨化因子受體4(CXCR4)及趨化因子配體12(CXCL12)的表達(dá)影響轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)[3]。在基礎(chǔ)研究中，CXCR4及CXCL12已顯示在乳腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲和黏附中起關(guān)鍵作用，可促進(jìn)腫瘤的發(fā)展、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[4]。CXCR4是近年來新發(fā)現(xiàn)的CXCL12的受體，CXCL12/CXCR4生物軸被證實(shí)與多種腫瘤生長(zhǎng)、發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)[5]。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

本院2017年1月～2019年7月病理科獲得70份三陰性乳腺癌組織標(biāo)本及配對(duì)癌旁組織(距離腫瘤最近距離超過5 cm)，34份三陰性乳腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織(與70份乳腺癌組織完全匹配)。入選標(biāo)準(zhǔn)：女性乳腺癌；病理檢查確診為三陰性浸潤(rùn)性導(dǎo)管乳腺癌,且切片復(fù)讀符合診斷；切除腫瘤組織前均未接受抗腫瘤治療；均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床病理資料不全；其他類型乳腺癌，如黏液癌等；年齡<18歲或>80歲；存在其他腫瘤疾病。

表1 癌組織、癌旁組織CXCL12/CXCR4表達(dá)情況(例，%)

表2 癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織CXCL12/CXCR4表達(dá)情況(例，%)

二、方法

1. 檢測(cè)方法：(1)試劑：CXCL12以及CXCR4多克隆抗體(美國(guó)Dako公司，稀釋比例1∶200)，酶標(biāo)羊抗鼠或兔IgG聚合物以及DAB酶底物顯色試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。儀器：石蠟組織切片機(jī)(Leica RM2015)、電熱恒溫干燥箱(GZX-DH-400-BS)、病理組織漂烘儀(PHY-Ⅲ)。(2)免疫組織化學(xué)PV法：4%甲醛固定，石蠟包膜，取蠟塊標(biāo)本切片，厚度4 μm。(3)閱片：采用雙盲法。隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野(×400)。判讀方法：根據(jù)著色強(qiáng)度判斷：0分指無色，1分指淺黃色，2分指中黃色，3分指棕黃色；根據(jù)陽性細(xì)胞比例：1分，陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例<25%；2分，25%～49%；3分，50%～75%：4分指>75%；著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例積分相乘總分≤3分為陰性，>3分為陽性。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 25.0軟件分析數(shù)據(jù)。定性資料使用例(%)表示，癌組織及癌旁組織中CXCL12以及CXCR4比較使用配對(duì)設(shè)計(jì)下頻數(shù)分布的McNemar檢驗(yàn)，其余定性資料比較使用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析使用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.癌組織、癌旁組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中CXCL12/CXCR4表達(dá)情況見表1、2，圖1。癌組織中CXCL12(+)、CXCR4(+)、CXCL12(+)/CXCR4(+)比例高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；轉(zhuǎn)移淋巴組織中CXCL12(+)/CXCR4(+)比例高于癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；

2.癌組織中CXCL12與CXCR4表達(dá)相關(guān)性：相關(guān)性分析顯示，癌組織中CXCL12與CXCR4表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.632，P=0.002)。

3.CXCL12、CXCR4表達(dá)與臨床病理資料關(guān)系見表3。CXCL12(+)病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率及Ⅲ～Ⅳ期比例高于CXCL12(-)病人，CXCR4(+)病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率及Ⅲ～Ⅳ期比例高于CXCR4(-)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

4.CXCL12/CXCR4生物軸與臨床病理資料關(guān)系見表4。CXCL12/CXCR4生物軸表達(dá)情況與三陰性乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有相關(guān)性(P<0.05)。

討論

乳腺癌是導(dǎo)致女性癌癥死亡的主要原因[6]。盡管多種分子機(jī)制參與了乳腺癌的轉(zhuǎn)移，但腫瘤細(xì)胞向特定器官遷移的確切機(jī)制仍有待建立。最近研究提出“趨化因子受體”模型來解釋腫瘤細(xì)胞歸巢于特定器官的情況[7]。趨化因子屬于小型細(xì)胞因子樣蛋白的超家族，其通過與G蛋白偶聯(lián)受體相互作用而誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重排以及內(nèi)皮細(xì)胞定向遷移。在最近15年研究的細(xì)胞因子/受體系統(tǒng)中，CXCL12/CXCR4軸被證實(shí)在腫瘤轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭衅痍P(guān)鍵作用[8]。在乳腺癌中已經(jīng)證明了趨化因子及其各自的受體參與了腫瘤的發(fā)展，其中CXCR4的過表達(dá)被認(rèn)為是乳腺癌細(xì)胞增殖的必要條件，并且與不良預(yù)后相關(guān)[9]。大量研究表明，原發(fā)性乳腺癌病人的CXCR4表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移之間存在相關(guān)性，乳腺癌組織中CXCR4和CXCR7趨化因子受體的表達(dá)水平高于鄰近的正常組織，且CXCL12-CXCR4-CXCR7趨化因子軸可能是乳腺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素[10]。

圖1 三陰性乳腺癌組織CXCL12/CXCR4表達(dá)情況：A，乳腺癌組織中CXCL12的表達(dá)陰性，HE×200；B，乳腺癌組織中CXCL12的表達(dá)陽性，HE×200；C，癌旁組織中CXCR4表達(dá)陰性，HE×200；D，癌旁組織中CXCR4表達(dá)陽性，HE×200

表3 CXCL12、CXCR4表達(dá)與臨床病理相關(guān)性分析

表4 CXCL12/CXCR4生物軸與臨床病理相關(guān)性

癌組織中CXCL12(+)、CXCR4(+)、CXCL12(+)/CXCR4(+)比例高于癌旁組織，提示三陰性乳腺癌組織中CXCL12/CXCR4生物軸的表達(dá)上調(diào)。乳腺癌細(xì)胞特異性表達(dá)活性CXCR4和CXCR7，其配體為CXCL12，趨化因子在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移中的機(jī)制可能通過腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子受體來反映，趨化因子受體對(duì)它們的同源配體(由某些器官產(chǎn)生)作出反應(yīng)并沿著趨化因子梯度遷移以觸發(fā)特定的器官轉(zhuǎn)移[11]。轉(zhuǎn)移淋巴組織中CXCL12(+)/CXCR4(+)比例高于癌組織。辛琪等[12]研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12/CXCR4生物軸與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)內(nèi)癌組織中CXCL12/CXCR4生物軸上調(diào)。Guembarovski等[13]研究證實(shí)，乳腺癌中，CXCL12/CXCR4生物軸與乳腺癌定向轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。幾項(xiàng)研究已經(jīng)觀察到在原發(fā)乳腺癌病人中CXCR4、CXCL12表達(dá)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移之間存在關(guān)聯(lián)[8，12]。

CXCL12(+)或CXCR4(+)病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率及Ⅲ～Ⅳ期比例高于CXCL12(-)病人，且CXCL12/CXCR4生物軸表達(dá)病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率及Ⅲ～Ⅳ期比例高，提示CXCL12/CXCR4生物軸與三陰性乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移存在關(guān)聯(lián)。Wu等[10]證明CXCR4和CXCR7趨化因子受體的表達(dá)以及CXCL12的表達(dá)是否可以預(yù)測(cè)乳腺癌轉(zhuǎn)移和死亡的風(fēng)險(xiǎn)，CXCL12/CXCR4生物軸在乳腺癌進(jìn)展中發(fā)揮一定作用。Dayer等[14]研究顯示，CXCR4表達(dá)降低的腫瘤相比，CXCR4表達(dá)水平升高的病人向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性更大，CXCL12/CXCR4生物軸與浸潤(rùn)性乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。然而，CXCL12/CXCR4生物軸在乳腺癌中的作用有待進(jìn)一步研究。目前已設(shè)計(jì)出幾種靶向CXCL12/CXCR4軸的治療劑。在臨床前模型中，靶向CXCL12/CXCR4軸的治療劑已被證明是有效的，不僅減少了乳腺癌的轉(zhuǎn)移，還可抑制原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)[10，15]。CXCL12/CXCR4軸與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性可能為了解乳腺癌的轉(zhuǎn)移和治療提供一種新的方法，值得進(jìn)一步研究。

CXCL12/CXCR4生物軸表達(dá)情況與三陰性乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)，CXCL12/CXCR4表達(dá)可能促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。但該項(xiàng)研究存在一定局限性，如病例數(shù)有限、未進(jìn)一步隨訪病人轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及死亡等預(yù)后情況，還應(yīng)進(jìn)一步完善研究證實(shí)結(jié)論。