陳 斌

（福建省淡水水產(chǎn)研究所，福州350002）

半刺厚唇魚（Acrossocheilius hemispinus）隸屬鯉形目（Cypriniformes）鯉科（Cyprindae）鲃亞科（Barbi?nae）光唇魚屬（Acrossocheilus），俗稱“石板”“坑魚”，分布于湖南省湘江、資水、沅水、澧水［1］及福建省閩江、九龍江、交溪、霍童溪等水系［2］。近年來(lái)，為增加種群數(shù)量，滿足人們的消費(fèi)需求，人工養(yǎng)殖半刺厚唇魚逐漸興起，養(yǎng)殖方式包括水泥池精養(yǎng)、土池養(yǎng)殖、稻田生態(tài)養(yǎng)殖等，其中水泥池精養(yǎng)病害最多，尤其小瓜蟲病對(duì)其危害最大，造成的死亡率最高。小瓜蟲病病原為多子小瓜蟲（Ichthyopthirius multifillis），多子小瓜蟲隸屬原生動(dòng)物門（Protozoa）寡膜纖毛綱（Oligohymenophorea）膜口目（Hymenostomatida）凹口科（Ophryoglenidae）小瓜蟲屬（Ichthyophthirius），主要寄生在魚類的皮膚、鰭條和鰓等部位，生活史分為成蟲、包囊、幼蟲3個(gè)階段［3］，其中幼蟲階段具有感染性，能夠感染大部分的淡水魚類［4］，半刺厚唇魚對(duì)小瓜蟲的易感性較強(qiáng)，感染后治療周期較長(zhǎng)、死亡率較高，為保障半刺厚唇魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的順利發(fā)展，篩選治療該魚小瓜蟲病的有效藥物迫在眉睫。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)用魚自然感染小瓜蟲及健康的半刺厚唇魚，均來(lái)自福建省順昌縣兆興魚種養(yǎng)殖有限公司，平均體重（10.5±2.7）g。試驗(yàn)前，將健康半刺厚唇魚暫養(yǎng)于實(shí)驗(yàn)室塑料精養(yǎng)桶中，水溫控制在18.0～21.0℃，暫養(yǎng)24 h，待半刺厚唇魚適應(yīng)環(huán)境后開始試驗(yàn)。

1.1.2 試驗(yàn)藥物試驗(yàn)選用的8種常用漁藥均購(gòu)自漁藥專賣店，其藥物名稱、有效成分含量、生產(chǎn)企業(yè)詳見表1。試驗(yàn)用漁藥在使用前先配制成母液，然后按照試驗(yàn)設(shè)置的濃度和試驗(yàn)溶液體積計(jì)算相應(yīng)的母液添加量，按所需體積稀釋。

表1 試驗(yàn)用藥來(lái)源

1.1.3 其他材料小瓜蟲傳代感染容器為4 m3的黑色塑料精養(yǎng)桶，藥物治療試驗(yàn)容器為直徑30 cm、高30 cm的紅色塑料桶，試驗(yàn)用水和發(fā)病魚池用水相同，水溫18～21℃，pH 6.8～7.2。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 小瓜蟲的傳代感染取30尾自然攜帶小瓜蟲的半刺厚唇魚放入塑料精養(yǎng)桶中，同時(shí)，放入600尾健康的半刺厚唇魚，感染過(guò)程中水溫保持在18～21℃，使用遮陽(yáng)網(wǎng)避免陽(yáng)光直射，正常換水和投喂，15 d后發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)魚體表、鰭條和鰓出現(xiàn)許多白點(diǎn)，經(jīng)鏡檢均為小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體，說(shuō)明試驗(yàn)魚成功感染小瓜蟲。

1.2.2 藥物治療試驗(yàn)用紅色塑料桶裝水，每桶10 L，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)配制藥物濃度并設(shè)置空白對(duì)照，每種藥物濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)，將患病魚隨機(jī)分組，每桶5尾。每天更換1/2的水，并補(bǔ)充全水體50%的藥物，記錄患病魚死亡情況，及時(shí)撈出死魚。分別于試驗(yàn)第2、4、6、8天每桶隨機(jī)取1尾魚，魚體相同部位用蓋玻片刮取適量黏液，放回患病魚，壓片，4倍顯微鏡下計(jì)一個(gè)視野小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量，20 d后鏡檢每組存活魚，并計(jì)算最終成活率。試驗(yàn)魚累計(jì)死亡率=試驗(yàn)魚累計(jì)死亡數(shù)量/每組試驗(yàn)魚總數(shù)×100%；試驗(yàn)魚最終成活率=試驗(yàn)魚治愈后存活數(shù)量/每組試驗(yàn)魚總數(shù)×100%。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 17.0軟件對(duì)半刺厚唇魚死亡率及小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥物作用下小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量變化

由表2可知，對(duì)照組魚體黏液中小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量有輕微遞減趨勢(shì)。硫酸銅組小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量在第2天均倍增，且各濃度組之間差異不明顯；1 000 mg/L工業(yè)鹽組和對(duì)照組差異不明顯，3 000和5 000 mg/L工業(yè)鹽組小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量在第2天時(shí)均明顯減少，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)而遞減，第8天時(shí)未檢測(cè)到小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體；在甲醛溶液組中，3個(gè)濃度組小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量和對(duì)照組相比均有明顯減少，且用藥濃度越高，營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量減少幅度越大；在魚康樂(lè)組中，2 mg/L組和對(duì)照組差異不明顯，4和6 mg/L組小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量減少明顯，且6 mg/L魚康樂(lè)組在第6天時(shí)開始檢測(cè)不到營(yíng)養(yǎng)體，8和10 mg/L組用藥濃度過(guò)高，試驗(yàn)用魚過(guò)早死亡；百草解毒劑組和本穩(wěn)精組小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量與空白對(duì)照組相比差異不明顯；在百靈小瓜凈組中，當(dāng)藥物濃度大于1.2 mg/L時(shí)，小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量才有明顯減少，1.2、1.6、2.0 mg/L組分別在8、6、4 d時(shí)開始檢測(cè)不到營(yíng)養(yǎng)體；小瓜絕殺組中，所有濃度組第2天時(shí)小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量均倍增，之后遞減，0.3、0.5、0.7 mg/L組遞減明顯，在第8天時(shí)開始檢測(cè)不到營(yíng)養(yǎng)體。

表2 不同藥物處理后小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量

2.2 不同藥物作用下半刺厚唇魚的死亡情況及最終成活率

由表3可知，空白對(duì)照組第8天魚已全部死亡，成活率為0；硫酸銅組第4天魚全部死亡，成活率為0；3 000和5 000 mg/L工業(yè)鹽組死亡情況明顯減緩，最終成活率分別達(dá)（73.3±9.4）%和（86.7±9.4）%；甲醛溶液組中，隨著藥物濃度的增高，死亡情況有所減緩，但成活率仍為0；魚康樂(lè)組中，4和6 mg/L組治療效果最好，成活率分別達(dá)（46.7±9.4）%和（60.0±0.0）%；百草解毒劑組無(wú)治療效果；本穩(wěn)精組中，用藥前期患病魚死亡數(shù)明顯降低，但因?yàn)榇怂帤⑾x效果不明顯，最終患病魚成活率仍為0；百靈小瓜凈組中，當(dāng)藥物濃度大于1.2 mg/L時(shí)有明顯治療效果，當(dāng)藥物濃度為1.6和2.0 mg/L時(shí)，成活率分別達(dá)（73.3±9.4）%和（80.0±0.0）%；小瓜絕殺組中，當(dāng)藥物濃度為0.5 mg/L時(shí)治療效果最好，成活率達(dá)（46.7±9.4）%。

3 小結(jié)與討論

空白對(duì)照組中小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量從0～6 d有輕微遞減趨勢(shì)，可能原因是成熟的小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體離開魚體形成包囊，部分包囊因換水而流失，桶底遺留的包囊還未形成幼蟲重新感染魚體［3］。

表3 不同藥物處理后患病魚死亡情況

銅離子作為重金屬離子可以與病原蛋白質(zhì)結(jié)合形成絡(luò)合物，從而使蛋白質(zhì)變性，酶失活，因此在種植業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)中應(yīng)用頗多，在水產(chǎn)中主要用于殺滅魚類的各種病原菌、寄生蟲和藻類，如水霉、車輪蟲、斜管蟲、波豆蟲、隱鞭蟲、卵甲藻、微囊藻等。但在本試驗(yàn)中硫酸銅對(duì)小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體沒有殺滅作用，反而可以使魚體上的小瓜蟲分裂增殖速度加快，大大縮短其生活周期，這和張善忠等［5］研究結(jié)果一致。

工業(yè)鹽的主要成分為NaCl，可以改變水體滲透壓，也被用來(lái)殺滅魚體的寄生蟲和病原菌，且在泛池?fù)尵群蜌馀莶≈委煼矫嬉灿辛己玫男Ч?，7］。在本試驗(yàn)中當(dāng)工業(yè)鹽濃度為3 000和5 000 mg/L時(shí)均能有效去除患病魚體表小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體，因其殺蟲和滅菌的雙重作用保證了患病魚成活率高達(dá)（86.7±9.4）%。

甲醛能夠凝固蛋白和溶解脂類，具有廣譜的殺蟲殺菌功效。在本試驗(yàn)中甲醛試驗(yàn)組和對(duì)照組相比小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體數(shù)量明顯減少，說(shuō)明甲醛對(duì)小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體有一定的殺滅作用，但第8天時(shí)3個(gè)濃度組均能檢測(cè)到小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體且患病魚成活率為0，說(shuō)明甲醛單獨(dú)使用時(shí)治療周期過(guò)長(zhǎng)，不能短期內(nèi)完全殺滅小瓜蟲，或?qū)疾◆~毒性較強(qiáng)，無(wú)法保證患病魚成活率。

魚康樂(lè)是福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院自行研制的產(chǎn)品，是一種水質(zhì)處理劑，主要成分為活性碳酸鈣，具有效改善富營(yíng)養(yǎng)化水質(zhì)、降低水中微生物的存活能力，具有殺滅寄生蟲的功效［8］。該試驗(yàn)中當(dāng)魚康樂(lè)用藥濃度在4～6 mg/L時(shí)能夠有效殺滅小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體且保證患病魚的成活率，用藥濃度過(guò)低時(shí)殺蟲效果不明顯，當(dāng)用藥濃度≥8 mg/L時(shí)則超過(guò)患病半刺厚唇魚的耐受濃度，影響死亡率，試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。

百草解毒劑的主要成分為天然植物炭，具有溫胃和中、止瀉解毒、收斂止血的功效，常用于防治畜禽的腸道疾?。?］，當(dāng)飼料中添加劑量為0.1%～0.5%時(shí)能顯著提高大刺鰍部分消化酶和非特異性免疫酶活性［10］。該藥物對(duì)纖毛蟲類的寄生蟲有一定的抑制作用，但本試驗(yàn)中對(duì)小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體沒有明顯殺滅作用。

本穩(wěn)精的主要成分為干姜、花椒、杏葉的提取物，其中花椒提取物具有較強(qiáng)的殺蟲殺菌功效［11］，杏葉中含有大量的黃酮類、萜內(nèi)脂類化合物成分，這些成分具有強(qiáng)烈的抗氧化作用，能夠提高動(dòng)物機(jī)體免疫力［12］，干姜成分姜辣素對(duì)機(jī)體細(xì)胞形態(tài)具有保護(hù)作用，并且能夠抑制炎癥介質(zhì)的合成與釋放［13］。本試驗(yàn)中本穩(wěn)精對(duì)小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體沒有明顯的殺滅作用，導(dǎo)致患病魚成活率為0，但用藥前期患病魚的死亡率明顯降低，說(shuō)明該藥物可能發(fā)揮了殺菌、消炎、提高免疫力的功效，對(duì)患病魚有明顯的保護(hù)作用。

本試驗(yàn)中當(dāng)百靈小瓜凈的用藥濃度在1.6～2.0 mg/L時(shí)，對(duì)小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體的殺滅效果明顯，且能夠保證患病魚較高的成活率。

小瓜絕殺的主要成分為苦參堿和辣椒堿，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中苦參堿和辣椒堿均有抑菌和殺蟲的作用［14-17］。本試驗(yàn)中，小瓜絕殺用藥早期小瓜蟲蟲體數(shù)量倍增，說(shuō)明該藥可以刺激小瓜蟲營(yíng)養(yǎng)體使其分裂增殖速度加快，而后期小瓜蟲蟲體數(shù)量明顯減少又能充分體現(xiàn)其殺蟲功效，這和馮桂榕等［18］的研究結(jié)果一致，即辣椒生姜法殺小瓜蟲，只對(duì)小瓜蟲幼蟲階段有效果，而對(duì)營(yíng)養(yǎng)體階段的殺滅效果不明顯。

硫酸銅可以加速小瓜蟲的分裂增殖，當(dāng)魚體有小瓜蟲時(shí)不能使用；百草解毒劑對(duì)小瓜蟲無(wú)殺滅作用；甲醛溶液?jiǎn)为?dú)使用時(shí)治療效果不好，且易殘留，對(duì)人體健康有害，不建議使用；本穩(wěn)精雖無(wú)殺滅小瓜蟲的作用，但能夠明顯增加魚體抵抗力，建議和其他殺小瓜蟲藥物配合使用；小瓜絕殺用藥前期小瓜蟲蟲體數(shù)量倍增，因此該藥適合在患病魚體表小瓜蟲數(shù)量不多時(shí)使用，如果蟲體數(shù)量較多時(shí)使用只會(huì)加速患病魚的死亡；當(dāng)工業(yè)鹽使用濃度在3 000～5 000 mg/L時(shí)治療效果較好，適合在精養(yǎng)桶、水泥池等小水體使用，以免增加經(jīng)濟(jì)成本，使用時(shí)尤其注意水溫變化，以免高水溫高鹽度條件下造成患病魚缺氧死亡。魚康樂(lè)的適宜治療濃度為4～6 mg/L，百靈小瓜凈的適宜治療濃度為1.6～2.0 mg/L，可以放心使用。魚類小瓜蟲病的治療是一個(gè)世界公認(rèn)的難題，必須充分了解小瓜蟲的生活史，在其薄弱環(huán)節(jié)入手，篩選出有效藥物，結(jié)合升溫、清底等輔助措施，才能在小瓜蟲病治療中取得良好效果。