陳苑平 陳 柯 許金森 鄭淑霞*

1.福建中醫(yī)藥大學，福建 福州 350108；2.福建省中醫(yī)藥科學院，福建 福州 350003

腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome，IBS)是常見的消化系疾病，表現(xiàn)為腹痛或腹部不適，且伴隨排便情況改變的功能性腸病，多為慢性、間歇性發(fā)作。IBS的發(fā)病率逐年增高，在IBS的亞型中又以腹瀉型(IBS-D)最為常見，約占IBS發(fā)病率的3/4，因IBS-D容易反復發(fā)作，給患者生活及心理造成一定的影響[1]。研究認為，IBS的發(fā)病機制與胃腸道動力異常以及內(nèi)臟高敏感性存在聯(lián)系[2]。研究調(diào)查表明，目前西藥對該疾病的治療存在一定的局限性，而針灸對該病的治療則有一定的優(yōu)勢[3]。本實驗通過電針大鼠足三里，觀察電針足三里對IBS-D模型大鼠的內(nèi)臟敏感性以及大鼠腹瀉情況的影響，初步探討電針足三里對于IBS-D的療效及其效應機制。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 健康的雄性SD大鼠30只，體重(200～230)g，動物許可證號: SCXK(滬)2018-0006(上海西普爾-必凱實驗動物有限公司)，實驗前先適應性飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥科學院動物房(普通級)7 d，控制室內(nèi)溫度為 23～26 ℃，相對濕度為50%～70%。在本次實驗過程中，按照《實驗動物管理條例》等相關(guān)文件標準進行飼養(yǎng)與處置。

1.2 試劑 番瀉葉生藥(亳州市華鑫中藥飲片科技有限公司)，液體石蠟(運加牌，黑龍江省運加醫(yī)療科技有限公司)，0.9%氯化鈉注射液(江西科倫藥業(yè)有限公司)，8FR導尿管(事達牌，湛江市事達實業(yè)有限公司)，2 mL注射器(康友牌，江蘇康友醫(yī)用器械有限公司)。

1.3 儀器 電子秤(福建福日電子股份有限公司)，R407小動物呼吸麻醉系統(tǒng)(瑞沃德生命科技有限公司)，異氟烷(瑞沃德生命科技有限公司)，200 mm×80 mm×80 mm自制亞克力盒，自制大鼠固定器，SDZ-Ⅱ型電針儀(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)，0.25 mm×13 mm無菌針灸針(蘇州東邦醫(yī)療器械有限公司)。

2 實驗方法

2.1 分組與造模 實驗開始前先將30只大鼠隨機分成空白組、模型組及電針組，空白組大鼠正常喂養(yǎng)，余下兩組則需進行2w的IBS-D造模處理。參照Williams等[4]的方法進行改進，采用慢性束縛應激聯(lián)合番瀉葉灌胃的方法建立IBS-D大鼠模型，并參照趙妍等[5]的方法制備0.3 g/mL的番瀉葉煎劑。造模的具體操作：造模時先給予番瀉葉煎劑(0.3 g/mL)，并按照10 mL/kg的給藥劑量灌胃。灌服番瀉葉煎劑后，將大鼠裝進自制的固定器中，限制其無法進行自如活動，持續(xù)時長為1 h，每日1次，持續(xù)2周。

2.2 干預方法 電針組在造模成功后對大鼠的足三里穴進行電針干預，參照實驗針灸研究會制定的《實驗動物針灸穴位圖譜》，選取大鼠的足三里穴，其位置在大鼠的膝關(guān)節(jié)后外側(cè)。操作時先觸及大鼠的腓骨小頭，再往下約5 mm即為該穴，再選用規(guī)格為0.25 mm×13 mm的毫針直刺，深度約為5 mm，并接上電針儀。具體方法：首先將大鼠固定在自制固定器內(nèi)，使其不亂跑亂動，定穴后直刺，進針后不做手法刺激，連接SDZ-II電針儀進行干預，選用波形為疏密波，頻率調(diào)至2 Hz，強度約為1～2 mA，以大鼠下肢出現(xiàn)輕微抖動且不嘶叫為度，留針20 min，每日1次，持續(xù)7 d。

2.3 觀察指標

2.3.1 一般情況 觀察大鼠在實驗過程中的精神狀態(tài)、活動情況、毛發(fā)光澤度以及體重增長等情況。

2.3.2 腹瀉情況 在大鼠造模前后以及干預后，對所有大鼠進行腹瀉指數(shù)的測算。腹瀉指數(shù)測定時在鼠籠內(nèi)墊上濾紙，定時觀察大鼠排便情況，如有稀便污跡沾染濾紙則需更換濾紙，并及時記錄濾紙的污跡面積。持續(xù)觀察5 h后，統(tǒng)計大鼠排稀便的數(shù)量及腹瀉情況，再根據(jù)公式計算每只大鼠的腹瀉指數(shù)。

公式[6]：腹瀉指數(shù)=稀便率(每只大鼠的稀便數(shù)/總便數(shù))×稀便級(每只大鼠的稀便級數(shù)總和/稀便數(shù))。

稀便級數(shù)分級[7]：以稀便污染濾紙形成污跡面積的大小定級, 分為4級：1級為污染直徑<1 cm，2級污染直徑1.0～1.9 cm，3級污染直徑2～3 cm，4級污染直徑>3 cm。測量操作：先統(tǒng)計每個大鼠排便的總數(shù)，再統(tǒng)計大鼠排稀便的總數(shù)，并逐一測定每堆稀便的級數(shù)，然后參照公式算出腹瀉率、稀便級以及腹瀉指數(shù)。測量污染直徑時，如果糞便形狀大致為圓形，則可以直接量直徑；若糞便形狀為橢圓形或較不規(guī)則時，則測量其最長距離和近似圓的直徑，并將二者相加除以2。

2.3.3 內(nèi)臟敏感性評價 在造模前、造模后及干預后，先將大鼠禁食12 h，將所有大鼠逐個放入小動物呼吸麻醉誘導盒內(nèi)，使其吸入異氟烷麻醉。待其麻醉后將帶有球囊的8FR導尿管插入大鼠肛門內(nèi)，導尿管插入深度為4.5 cm，隨后用膠帶將其纏在大鼠尾巴上固定。將大鼠放入規(guī)格為200 mm×80 mm×80 mm的透明固定盒中，并將含有溫生理鹽水的2 mL注射器接入導尿管尾部，待大鼠完全清醒后盡快檢測大鼠的內(nèi)臟敏感性。測量結(jié)直腸擴張(CRD)時，緩慢向球囊內(nèi)注溫生理鹽水，使球囊內(nèi)的壓力逐漸增高，記錄大鼠出現(xiàn)腹壁收縮反應及腹部、臀部抬高并抬離地面時的容量閾值，需重復3次該操作，并取平均值。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠一般情況比較 空白組在全程實驗中大鼠精神良好、活動自如、毛色潤澤，大便正常未見有腹瀉的情況。模型組及電針組的大鼠在進行造模后逐漸出現(xiàn)精神狀態(tài)差、活動減少、蜷縮、易激惹、毛發(fā)干枯無澤、肛周有稀便污跡附著。電針組在電針干預后精神狀態(tài)、活動情況以及毛色得到一定程度的好轉(zhuǎn)。如圖1所示，在造模期結(jié)束后，與空白組相比較，模型組及電針組體重增長幅度較小，且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。干預期結(jié)束后，電針組大鼠體重增長情況得到一定改善，且與模型組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

3.2 內(nèi)臟敏感性評價 大鼠CRD容量閾值比較，如圖2所示，模型組大鼠的腹部收縮、腹部抬起及臀部抬起的容量閾值，與空白組相比均顯著降低，且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。電針組大鼠的腹部收縮、腹部抬起及臀部抬起的容量閾值與模型組相比，在電針干預后得到了提高(P<0.05)。

3.3 腹瀉情況 空白組在實驗期間未出現(xiàn)腹瀉情況，則只對模型組及電針組大鼠的腹瀉指數(shù)進行比較。如圖3所示，模型組及電針組在造模后檢測發(fā)現(xiàn)均出現(xiàn)了腹瀉(P>0.05)，但是在干預之后電針組大鼠的腹瀉情況得到了好轉(zhuǎn)，且與模型組對比具有差異(P<0.01)。

4 分析與討論

中醫(yī)角度來看，可根據(jù)IBS-D的主要臨床表現(xiàn)，將其劃入“泄瀉”“腹痛”范疇，其病位在腸，與脾胃密切相關(guān)。目前，IBS的發(fā)病機制尚未有定論，但是隨著現(xiàn)代醫(yī)學科學技術(shù)的發(fā)展，近年來IBS發(fā)病機制被研究者們不斷深入挖掘?，F(xiàn)代醫(yī)學認為IBS的發(fā)病機制可能主要與機體的內(nèi)臟高敏感性、腸動力異常等聯(lián)系密切[8]。Bouin等[9]研究發(fā)現(xiàn)，患有IBS的人群的腸道疼痛閾值普遍低于正常人群，此后內(nèi)臟高敏感性逐漸成為研究IBS的發(fā)病機制的一個新的切入點。降低內(nèi)臟高敏感性，可以改善IBS患者的癥狀。

實驗結(jié)果顯示，電針足三里穴能夠改善IBS-D大鼠的易激惹、倦怠、體重增長緩慢的情況，并且有效緩解IBS-D大鼠的腹瀉情況。目前，CRD閾值是評價IBS-D大鼠模型內(nèi)臟敏感性的方法之一，即通過對大鼠結(jié)腸刺激所產(chǎn)生的反應。與空白組相比，模型組大鼠的CRD閾值偏低，說明模型組存在內(nèi)臟高敏感，電針組在干預之后，其內(nèi)臟敏感程度也得到了一定的改善。

針灸是治療IBS的常用補充療法和替代療法之一，針灸的干預方式對機體的調(diào)節(jié)具有整體性，并且對IBS的改善機制可能涉及道多環(huán)節(jié)、多層次。研究[10-11]表明，采用包括電針、艾灸等在內(nèi)的針灸方式治療IBS-D，均可改善內(nèi)臟高敏感性、胃腸道炎癥，并且能調(diào)節(jié)胃腸蠕動。此外，有研究[12]發(fā)現(xiàn)，電針治療IBS-D的療效甚至略優(yōu)于藥物，且電針副作用少，所以在臨床上越來越受到患者們的認可。

《四總穴歌》有云：“肚腹三里留”，足三里是臨床針灸治療胃腸疾病的常用穴，其具有和胃健脾、補中益氣、通調(diào)腑氣等功能?！夺樉拇蟪伞芬蔡岬剑骸靶篂a肚腹諸般疾，三里、內(nèi)庭功無比”?！鹅`樞·五亂》言：“氣在于腸胃者，取之足太陰、陽明；不下者，取之三里”，說明該穴不僅可以固護后天正氣以調(diào)胃腸，又能調(diào)暢氣機以和肝脾[13]。

梳理總結(jié)近10年針灸臨床治療IBS-D選穴規(guī)律，通過計算、歸納出腧穴、歸經(jīng)及選穴部位的頻次，發(fā)現(xiàn)在IBS-D的針灸治療中足三里穴出現(xiàn)的頻次居于前列[14]。臨床經(jīng)驗證明，在足三里穴位上施以針刺或艾灸等干預，可以改善IBS-D患者的腹痛、腹瀉等不適癥狀，足三里治療IBS-D的療效確切，且未見有不良反應[15-16]。雖然足三里在治療IBS-D的臨床療效得到了認可，但是其起效的作用機制卻未有確切闡述。有研究[17]認為，在足三里穴在上施以電針可以調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的表達、降低結(jié)腸黏膜組織中的炎性因子含量，從而減輕IBS-D大鼠的腸道炎性損傷，達到治療疾病的作用；還有的研究[13]發(fā)現(xiàn)，電針足三里可以下調(diào)與胃腸動力相關(guān)的結(jié)腸波形蛋白的表達，從而糾正IBS-D大鼠的胃腸功能。

綜上所述，電針足三里穴能夠改善IBS-D大鼠的易激惹、倦怠、體重增長緩慢的情況，改善大鼠的腹瀉情況，降低內(nèi)臟高敏感性。電針足三里治療IBS-D的療效確切，但是其可能存在的作用機制仍然需要本課題組進一步去探索。