吳 潔, 楊學(xué)華, 馬 玲, 范文強, 付冬冬, 高 曉, 左淑飛, 梁 舒, 秦藝璐, 王培山, 郭金燕

（1. 河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，河南 新鄉(xiāng) 453000；2. 河南省新鄉(xiāng)市第二人民醫(yī)院腎病風(fēng)濕科，河南 新鄉(xiāng) 453000；3. 河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院門診手術(shù)部，河南 新鄉(xiāng) 453000；4. 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，河南 鄭州 450000）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA） 是一種全身性慢性炎癥疾病，其發(fā)病機制復(fù)雜，特征為侵襲性炎癥反應(yīng)以及軟骨與骨骼結(jié)構(gòu)的破壞，屬于臨床上較常見的疑難病之一［1-2］。近年來，RA的致病率和致殘率均逐漸升高［3］。成纖維樣滑膜細胞（fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LSs）在維持滑膜炎癥和RA 侵襲性關(guān)節(jié)破壞中起著關(guān)鍵作用，RA 中活化的FLSs 具有腫瘤細胞樣特征，如持續(xù)增殖和對細胞凋亡的抵抗［4］。越來越多的研究［4-5］表明：抑制FLSs 的炎癥因子表達、遷移并促進其凋亡可能對RA 具有新的治療潛力。

微小RNA （microRNA，miRNA） 作為短鏈非編碼RNA，其平均長度為22 個核苷酸。miRNA可通過與靶基因mRNA 的3'非翻譯區(qū)（3'UTR）結(jié)合來抑制mRNA 表達［6］。目前，越來越多的研究

關(guān)注到miRNA 在關(guān)節(jié)軟骨穩(wěn)態(tài)以及RA 的發(fā)病機制和臨床治療中的作用。miR-26a-5p 作為miRNA大家族的一員，可發(fā)揮腫瘤抑制基因的作用，能夠阻斷細胞周期和細胞增殖［7］。研究［8-10］表明：miR-26a-5p 可抑制2 型糖尿病、急性心肌梗死、腎炎和多種癌癥的發(fā)生發(fā)展。而miR-26a-5p 在RA 中的作用及機制研究尚未見報道。因此，本研究通過過表達或抑制RA-FLSs 中miR-26a-5p 表達來觀察細胞增殖活性和凋亡的變化，探討miR-26a-5p 可能的作用機制，以期為以miR-26a-5p 為靶點的RA治療提供新的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 滑膜組織來源、主要試劑和儀器組織樣本：RA 滑膜組織取自河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院進行膝關(guān)節(jié)手術(shù)的RA 患者，所有采集樣本的患者均簽署知情同意書，本研究通過河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院倫理委員會批準（批件號：2019-064）。胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）、DMEM/F12 培養(yǎng)液和胰蛋白酶購自美國Gibco 公司， LipofectamineTM2000 試劑盒購于美國Invitrogen 公司，CCK-8 試劑盒和Annexin Ⅴ-FITC/PI 雙染試劑盒購自上海碧云天生物研究所，酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA） 檢測腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor，TNF-α）、白細胞介素1β （interleukin-1β，IL-1β）和白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）試劑盒及Hoechst 33342 染色試劑盒購自廣東省廣州市銳博生物科技有限公司，TRIzol 試劑購于日本 TaKaRa 公司，All-in-OneTMcDNA 第一鏈合成試劑盒與All-in-OneTMmiRNA 實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR） 檢測試劑盒購于美國GeneCopoeia 公司，RIPA 細胞裂解液、BCA 蛋白檢測試劑盒與ECL 顯色液購自北京索萊寶科技有限公司，pcDNA5 載體、pGL3-Promoter 載體和感受態(tài)大腸桿 菌DH5α購于日本 TaKaRa 公司，兔 抗 人vimentin 抗體和辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP） 標記山羊抗兔IgG 購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，兔抗人B 細胞淋巴瘤2（B cell lymphoma-2，Bcl-2）抗體、兔抗人Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）抗體、兔抗人酪氨酸激酶2 （Janus kinase 2，JAK2） 抗體、兔抗人磷酸化酪氨酸激酶2 （phosphorylated Janus kinase 2，p-JAK2）抗體和兔抗人信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3 （signal transducer and activator of transcription 3， STAT3）抗體購自美國Abcam 公司。M200 多功能酶標儀購自瑞士TECAN 公司，CO2培養(yǎng)箱購自美國Thermo 公司，紫外分光光度計購自上海儀電INESA 有限公司，PCR 擴增儀購自美國Gibco 公司，ACEA NovoCyte 流式細胞儀和倒置熒光顯微鏡購自美國Lifte-Technologies公司。

1.2 滑膜組織RA-FLSs 分離、培養(yǎng)和鑒定在無菌條件下取RA 滑膜組織，將多余外周組織除去，采用含2% 青霉素-鏈霉素的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solution，PBS）沖洗，將組織剪碎至約1 mm×1 mm×1 mm 小塊，PBS 緩沖液沖洗，將組織塊移至細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)均勻平鋪，加入含10%FBS 的DMEM/F12 培養(yǎng)液，置于37 ℃、5%體積分數(shù)CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔2 d 換液1 次，細胞融合度達到約90%時，采用0.25%胰蛋白酶溶液消化傳代，本實驗采用細胞為第3 ～7代。

當細胞密度生長至75% 時，PBS 緩沖液清洗2 次。采用4%多聚甲醛溶液固定，PBS 緩沖液沖洗，加0.1%Triton X-100 室溫透化15 min，2%牛血清白蛋白室溫封閉30 min，加入兔抗vimentin（1∶50），4 ℃孵育過夜，PBS 緩沖液沖洗后加入FITC-山羊抗兔IgG （1∶100），室溫孵育1 h，PBS 緩沖液再次沖洗后，加入DAPI 染核10 min，封片干燥，使用熒光顯微鏡進行觀察。

1.3 細胞分組和轉(zhuǎn)染將處于對數(shù)生長期的RAFLSs 以每孔5×104個的密度接種于12 孔板中，置于37 ℃、5%CO2細胞培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。參照LipofectamineTM2000 試劑說明書進行轉(zhuǎn)染。細胞分為空白對照組（正常培養(yǎng)，不進行轉(zhuǎn)染）、NCmimic 組（轉(zhuǎn)染模擬物陰性對照）、miR-26a-5p mimic 組（轉(zhuǎn)染miR-26a-5p 模擬物）、NC-inhibitor組（轉(zhuǎn)染抑制物陰性對照）和miR-26a-5p inhibitor組（轉(zhuǎn)染miR-26a-5p 抑制物），將LipofectamineTM2000 分別與50 nmol·L－1miR-26a-5p 模擬物、抑制物 和50 nmol·L－1陰性對照轉(zhuǎn)染至RA-FLSs 細 胞中，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集各組細胞進行后續(xù)實驗。

1.4 qRT-PCR 法檢測各組細胞中miR-26a-5p 表達水平使用TRIzol 試劑分別提取轉(zhuǎn)染后各組RA-FLSs 的總RNA，測定提取的RNA 純度和濃度。采用All-in-OneTMcDNA 第一鏈合成試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，根據(jù)All-in-OneTMmiRNA qRT-PCR 試劑盒說明書檢測miR-26a-5p 水平，以U6 作為內(nèi)參基因。引物序列：miR-26a-5p 上游引物，5'-GCTCTGAACGTAGATCCGAAC-3'，下游 引 物，5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'；U6 上游引物，5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物，5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。擴增條件：95℃預(yù)變性10 min，95 ℃、20 s，60 ℃、30 s，72 ℃、10 s，共40 個循環(huán)。采用2－ΔΔCt法計算miR-26a-5p 相對表達水平。

1.5 ELISA 法檢測各組細胞培養(yǎng)液上清中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平收集轉(zhuǎn)染后各組RA-FLSs 細胞培養(yǎng)液，采用ELISA 法檢測各組細胞培養(yǎng)液上清中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平，檢測步驟嚴格根據(jù)試劑盒說明書進行。

1.6 CCK-8 法檢測各組細胞增殖活性轉(zhuǎn)染后各組RA-FLSs 以每孔2×104個的密度接種于96 孔細胞培養(yǎng)板，在37 ℃、5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0、12、24、48 和72 h 后分別取出細胞，每孔中加10 μL CCK-8 溶液，繼續(xù)孵育2 h 后，然后在酶標儀450 nm 波長處檢測各孔細胞吸光度（A）值，以A 值表示細胞增殖活性。

1.7 Annexin Ⅴ-FITC/PI 檢測各組細胞凋亡率收集轉(zhuǎn)染后的各組RA-FLSs，按照Annexin Ⅴ-FITC/PI 雙染細胞凋亡試劑盒說明檢測細胞凋亡情況。首先使用預(yù)冷的PBS 緩沖液洗滌細胞2 次， 加1 mL 1×Binding Buffer 結(jié)合緩沖液，離心后去上清，加入500 μL Binding Buffer 結(jié)合緩沖液重懸細胞，接著分別加入10 μ L Annexin Ⅴ-FITC 與5 μ L PI，輕柔混勻后，室溫避光孵育30 min，采用流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率。

1.8 Hoechst 33342 染色觀察各組細胞凋亡情況收集轉(zhuǎn)染后的各組RA-FLSs，4%多聚甲醛固定，以0.5%Triton X-100 透化15 min，PBS 緩沖液洗滌，滴加5 mg·L－1Hoechst 33342 染色，室溫避光孵育30 min，PBS 緩沖液再次洗滌，細胞脫水后封片干燥，使用熒光顯微鏡下觀察細胞凋亡情況。

1.9 Western blotting 法檢測各組細胞中凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2 和JAK2/STAT3 通路相關(guān)蛋白表達水平在收集的轉(zhuǎn)染后各組RA-FLSs 中加入RIPA細胞裂解液進行細胞裂解，4 ℃、12 000 g 離心15 min 后收集上清液，采用BCA 蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度。每孔30 μg 蛋白上樣進行10%SDS-PAGE 電泳，將分離后蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，在5%脫脂奶粉中室溫封閉2 h，TBST 洗膜后，加入稀釋后的一抗，以GAPDH（1∶1 000）為內(nèi)參，4 ℃孵育過夜，次日TBST 洗膜，加入HRP 標記山羊抗兔IgG（1∶2 000）為二抗，室溫孵育2 h，TBST 洗膜后，滴加化學(xué)發(fā)光液ECL 顯色，凝膠成像系統(tǒng)中曝光，采用Image J 圖像分析軟件分析各條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參條帶灰度值的比值表示蛋白表達水平。

1.10 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。各組細胞中miR-26a-5p 表達水平，細胞培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平，細胞增殖活性，細胞凋亡率，各組細胞中Bax、Bcl-2、JAK2、p-JAK2 和STAT3 蛋白表達水平均符合正態(tài)分布，以±s 表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 RA-FLSs 形態(tài)表現(xiàn)采用細胞免疫熒光實驗檢測細胞表達情況，其中藍色為胞核，綠色為vimentin，結(jié)果顯示分離培養(yǎng)的細胞為RA-FLSs 細胞。見圖1。

圖1 光學(xué)顯微鏡下觀察RA-FLSs 形態(tài)（×100）Fig.1 Morphology of RA-FLSs observed under light microscope (×100)

2.2 各組RA-FLSs 中miR-26a-5p 表達水平與空白對照組和NC-mimic 組比較，miR-26a-5pmimic 組細胞中miR-26a-5p 表達水平明顯升高（P＜0.05）；與空白對照組和NC-inhibitor 組比較，miR-26a-5p inhibitor 組細胞中miR-26a-5p 表達水平明顯降低（P＜0.05）。見表1。

2.3 各組RA-FLSs 培養(yǎng)液中IL-1β、IL-6 和TNF-α水平與空白對照組和NC-mimic 組比較，miR-26a-5pmimic 組細胞培養(yǎng)液中IL-1β、IL-6 和TNF-α水平明顯降低（P＜0.05）；與空白對照組和NC-inhibitor 組 比 較，miR-26a-5p inhibitor 組 細 胞 培養(yǎng)液中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平明顯升高（P＜0.05）。見表1。

表1 各組RA-FLSs 中miR-26a-5p 表達水平和培養(yǎng)液中IL-1β、IL-6 及TNF-α 水平Tab. 1 Expression levels of miR-26a-5p mRNA in RA-FLSs and levels of IL-1β, IL-6 and TNF-α in culture fluid in various groups （n=3,±s）

表1 各組RA-FLSs 中miR-26a-5p 表達水平和培養(yǎng)液中IL-1β、IL-6 及TNF-α 水平Tab. 1 Expression levels of miR-26a-5p mRNA in RA-FLSs and levels of IL-1β, IL-6 and TNF-α in culture fluid in various groups （n=3,±s）

*P＜0.05 compared with blank control group；△P＜0.05 compared with NC-mimic group；#P＜0.05 compared with NC-inhibitor group.

Group Blank control NC-mimic miR-26a-5p mimic NC-inhibitor miR-26a-5p inhibitor FP TNF-α[ρB/ (ng·L-1)]274.56±26.39 273.12±27.08 228.25±19.23*△273.87±24.62 298.56±29.32*#72.372＜0.01 miR-26a-5p 1.00±0.00 0.99±0.01 3.84±0.24*△1.01±0.02 0.34±0.00*#92.097＜0.01 IL-1β[ρB/(ng·L-1)]15.53±1.64 15.36±1.39 11.87±1.05*△15.45±1.73 19.16±2.01*#132.724＜0.01 IL-6[ρB/ (ng·L-1)]92.21±4.17 92.18±3.97 72.56±3.45*△91.87±4.52 122.49±7.23*#87.193＜0.01

2.4 各組RA-FLSs 增殖活性與空白對照組和NC-mimic組比較，miR-26a-5pmimic 組RA-FLSs細胞轉(zhuǎn)染后24、48 和72 h 時增殖活性明顯降低（P＜0.05）；與空白對照組和NC-inhibitor 組比較，miR-26a-5p inhibitor 組RA-FLSs細胞轉(zhuǎn)染后24、48 和72 h 時增殖活性明顯升高（P＜0.05）；0 和12 h 各組間細胞增殖活性比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組RA-FLSs 增殖活性Tab.2 Proliferation activities of RA-FLSs in various groups （n=3,±s）

表2 各組RA-FLSs 增殖活性Tab.2 Proliferation activities of RA-FLSs in various groups （n=3,±s）

*P＜0.05 compared with blank control group；△P＜0.05 compared with NC-mimic group；#P＜0.05 compared with NCinhibitor group.

Group Proliferation activity 12 0.30±0.02 0.30±0.01 0.29±0.01 0.29±0.00 0.30±0.02 0.117 0.936 24 0.52±0.04 0.51±0.03 0.31±0.04*△0.52±0.03 0.69±0.04*#34.472＜0.01 48 0.64±0.05 0.63±0.04 0.38±0.02*△0.64±0.05 0.81±0.06*#50.452＜0.01 72 0.81±0.05 0.80±0.07 0.42±0.03*△0.80±0.06 0.98±0.10*#84.324＜0.01 Blank control NC-mimic miR-26a-5p mimic NC-inhibitor miR-26a-5p inhibitor FP(t/h) 0 0.24±0.01 0.23±0.02 0.23±0.00 0.24±0.02 0.23±0.01 0.203 0.912

2.5 各組RA-FLSs 凋亡率與空白對照組和NCmimic組比較，miR-26a-5pmimic 組RA-FLSs 細胞凋亡率明顯升高（P＜0.05）；與空白對照組和NCinhibitor 組比較，miR-26a-5p inhibitor 組RA-FLSs細胞凋亡率明顯降低（P＜0.05）。見圖2 和表3。

2.6 各組細胞凋亡形態(tài)空白對照組、NC-mimic組和NC-inhibitor 組RA-FLSs 細胞核外圍輪廓較清晰，有較少的細胞核濃縮和凋亡。miR-26a-5p mimic 組RA-FLSs 細胞核輪廓較模糊，出現(xiàn)較多濃縮和碎裂的藍色凋亡體，miR-26a-5p inhibitor 組RA-FLSs 細胞核外圍輪廓清晰，大小一致，無濃縮和凋亡現(xiàn)象。見圖3。

圖2 Annexin Ⅴ-FITC/PI 雙染法檢測各組RA-FLSs 細胞凋亡率Fig.2 Apoptotic rates of RA-FLSs in various groups detected by Annexin Ⅴ-FITC/PI double staining

表3 各組RA-FLSs 細胞凋亡率Tab.3 Apoptotic rates of RA-FLSs in various groups（n=3,±s,η/%）

表3 各組RA-FLSs 細胞凋亡率Tab.3 Apoptotic rates of RA-FLSs in various groups（n=3,±s,η/%）

*P＜0.05 compared with blank control group； △P＜0.05 compared with NC-mimic group；#P＜0.05 compared with NCinhibitor group.

Apoptotic rate 7.57±0.82 7.72±0.76 21.41±1.95*△8.69±0.76 4.20±0.32*#104.234＜0.01 Group Blank control NC-mimic miR-26a-5p mimic NC-inhibitor miR-26a-5p inhibitor FP

2.7 各組RA-FLSs 中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax 和JAK2/STAT3 通路相關(guān)蛋白表達水平與空白對照組和NC-mimic 組比較，miR-26a-5p mimic 組RA-FLSs 中Bcl-2、JAK2、p-JAK2、STAT3 和p-STAT3 蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05），Bax 蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05）；與空白對照 組 和NC-inhibitor 組比較，miR-26a-5p inhibitor 組RA-FLSs 中Bcl-2、 JAK2、 p-JAK2、 STAT3 和p-STAT3蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05），而Bax蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05）。見圖4 和表4。

3 討 論

近年來，盡管用于治療RA 的藥物在不斷研發(fā)，非藥物療法的技術(shù)也得到了提升，使得一些患者病情得到較好的控制，但仍有部分患者未得到規(guī)范且有效的治療或治療效果不佳，使得患者3 年內(nèi)致殘率達到80%左右［3］。造成RA 的主要原因是RA-FLSs 過度增殖，抑制RA-FLSs 細胞生物學(xué)行為并闡明其機制對于RA 治療意義重大。已有研究［11］表明：miRNA 通過介導(dǎo)相關(guān)的信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控RA-FLSs 的活性以及與RA 的發(fā)病機制有關(guān)的炎性介質(zhì)，從而參與RA 的進程。例如，miR-140-5p通過靶向TLR4 抑制RA-FLSs 的增殖以及炎性細胞 因 子IL-6 與IL-8 的 分泌［12］，miR-126 作 為RA 中PI3K/AKT 途徑的調(diào)節(jié)劑，介導(dǎo)其細胞凋亡和增殖［13］，miR-19 可通過靶向TLR2抑制炎癥因子的釋放，從而緩解RA 的炎癥環(huán)境［14］。本研究結(jié)果顯示：在RA-FLSs 中過表達miR-26a-5p 后，可抑制細胞增殖并促進凋亡，抑制miR-26a-5p 表達作用效果相反，提示miR-26a-5p 參與RA 的發(fā)病過程。

圖3 Hoechst 33342 染色檢測各組RA-FLSs 細胞凋亡（×200）Fig.3 Apoptosis of RA-FLSs in various groups detected by Hoechst 33342 staining(×200)

圖4 Western blotting 法檢測各組RA-FLSs 中Bcl-2、Bax 與JAK2/STAT3 通路相關(guān)蛋白表達電泳圖Fig.4 Electrophoregram of Bcl-2, Bax and JAK2/STAT3 pathway related proteins in RA-FLSs in various groups detected by Western blotting method

RA-FLSs 中高濃度炎癥介質(zhì)在RA 的發(fā)病中起重要作用。在促炎細胞因子的作用下，RA-FLSs可以產(chǎn)生趨化因子和基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）來促進炎癥反應(yīng)和骨破壞［15］。在本研究中，過表達miR-26a-5p 可抑制RA-FLSs 細胞中IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平，這為miR-26a-5p 在RA-FLSs 中抑制炎癥因子活性提供了依據(jù)。滑膜增生是RA 關(guān)鍵的病理生理特征，由RT-FLSs 增殖和死亡間失衡所導(dǎo)致［16-18］。本研究結(jié)果顯示：除抑制細胞促炎細胞因子外，過表達miR-26a-5p 還能夠抑制RA-FLSs 增殖的能力。

JAK2/STAT3 信號通路是重要的細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑，與多種腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)，并且參與介導(dǎo)生物體內(nèi)的炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細胞損傷和免疫功能調(diào)節(jié)等［19-20］。已有研究［21］表明：JAK/STAT 抑制劑可有效抑制RA 的發(fā)展，這提示JAK/STAT 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在關(guān)節(jié)疾病中起著重要作用。在本研究中，過表達miR-26a-5p 的RAFLSs 中JAK2、p-JAK2、STAT3 和p-STAT3 蛋白表達水平明顯降低，從而使JAK2/STAT3 信號通路失活，而在抑制miR-26a-5p 的RA-FLSs 中檢測結(jié)果與此相反。由此說明，miR-26a-5p 可能通過抑制JAK2/STAT3 信號通路阻礙RA 的進程。

綜上所述，miR-26a-5p 在RA 過程中發(fā)揮著重要作用，過表達miR-26a-5p 可抑制RA-FLSs 增殖，并促進細胞凋亡，其作用機制可能與調(diào)控JAK2/STAT3 信號通路的激活有關(guān)。本研究僅從體外細胞水平探討了miR-26a-5p 在RA-FLSs 中的作用，后續(xù)仍需在動物體內(nèi)加以驗證，并深入探索潛在分子機制，為RA 患者找到更有效的治療方法。

表4 各組RA-FLSs 中Bcl-2、Bax、JAK2、p-JAK2、STAT3 和p-STAT3 蛋白表達水平Tab.4 Expression levels of Bcl-2, Bax, JAK2, p-JAK2,STAT3 and p-STAT3 proteins in RA-FLSs in various groups（n=3,±s）

表4 各組RA-FLSs 中Bcl-2、Bax、JAK2、p-JAK2、STAT3 和p-STAT3 蛋白表達水平Tab.4 Expression levels of Bcl-2, Bax, JAK2, p-JAK2,STAT3 and p-STAT3 proteins in RA-FLSs in various groups（n=3,±s）

*P＜0.05 compared with blank control group；△P＜0.05 compared with NC-mimic group；#P＜0.05 compared with NC-inhibitor group.

Group Blank control NC-mimic miR-26a-5p mimic NC-inhibitor miR-26a-5p inhibitor FP p-STAT3 0.45±0.03 0.46±0.03 0.17±0.00*△0.45±0.02 0.70±0.05*#56.302＜0.01 Bcl-2 0.76±0.05 0.77±0.06 0.14±0.00*△0.77±0.04 2.01±0.13*#81.281＜0.01 Bax 0.37±0.01 0.38±0.02 0.72±0.05*△0.37±0.02 0.13±0.01*#68.027＜0.01 JAK2 0.51±0.03 0.52±0.05 0.21±0.00*△0.52±0.04 1.36±0.08*#120.338＜0.01 p-JAK2 1.15±0.04 1.19±0.07 0.79±0.05*△1.20±0.11 2.24±0.17*#79.092＜0.01 STAT3 0.79±0.06 0.80±0.05 0.20±0.01*△0.79±0.02 1.56±0.04*#87.877＜0.01