李向勇，粟玉剛，張 浪，陳大非，張衛(wèi)忠

（1.長(zhǎng)沙生態(tài)動(dòng)物園，湖南長(zhǎng)沙410118；2.長(zhǎng)沙市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法局,湖南長(zhǎng)沙410013）

聚維酮碘是一種廣譜、高效低毒的消毒藥物，對(duì)細(xì)菌、病毒和真菌均有良好殺滅作用，有明顯的殺瘤效力，國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道稀釋聚維酮碘可能通過(guò)抑制超氧化物歧化酶的活性從而抑制腫瘤生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[1-4]。聚維酮碘的劑型在獸醫(yī)上的應(yīng)用也有報(bào)道，如一種復(fù)方聚維酮碘凝膠有效碘穩(wěn)定性研究等等[5]。

無(wú)論是生活在野外的野生動(dòng)物，還是飼養(yǎng)在動(dòng)物園的圈養(yǎng)動(dòng)物，其所受的外傷都是危害動(dòng)物健康的一類疾病，如果不及時(shí)治療或采取相應(yīng)護(hù)理措施就會(huì)造成感染甚至危及生命[6]。為了探討聚維酮碘在野生動(dòng)物外傷上的應(yīng)用，將聚維酮碘與有機(jī)溶劑、乳化劑按一定比例借助機(jī)械力分散懸浮于另一種不相溶的液體中來(lái)形成的一個(gè)均相的分散體系。其藥物混懸液與油相和水相形成了一個(gè)緩釋劑藥物庫(kù)使藥物能長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)作用以達(dá)到預(yù)期效果，用藥次數(shù)少且藥效能持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間[7-9]。此次實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)了復(fù)方聚維酮碘油乳劑與聚維酮碘溶液的體外抑菌作用，為復(fù)方聚維酮碘油乳劑的進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

復(fù)方聚維酮碘油乳劑（自制）、聚維酮碘溶液（購(gòu)于鄭州六順化工產(chǎn)品有限公司）、TSA 培養(yǎng)基、LB 培養(yǎng)基、鏈球菌菌株、大腸桿菌菌株、金黃色葡萄球菌菌株、沙門(mén)氏菌菌株、TTC 顯色劑。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌計(jì)數(shù)

取保存于實(shí)驗(yàn)室-80℃的鏈球菌菌株、大腸桿菌菌株、金黃色葡萄球菌菌株、沙門(mén)氏菌菌株，待其融化后用接種環(huán)接種至培養(yǎng)皿中，放于37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。勾取長(zhǎng)出的菌落接種于5mL 液體培養(yǎng)基中，放于搖床中37℃、200rmp 培養(yǎng)12 小時(shí)。取1.5mL 滅菌離心管8 只編號(hào)1～8，各加入900μL 無(wú)菌水，吸取培養(yǎng)后的菌液100μL 加入到1 號(hào)管中吹打混勻，吸取1 號(hào)管液100μL 加入到2號(hào)管中吹打混勻，重復(fù)此操作直到8 號(hào)管。選取5、6、7、8 號(hào)管，吸取 100μL 液體加入固體培養(yǎng)基中均勻涂板，各濃度做3 個(gè)平行組，放于37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

1.2.2 最小抑菌濃度的測(cè)定

1.2.2.1 操作步驟

在細(xì)菌計(jì)數(shù)的基礎(chǔ)上將細(xì)菌數(shù)量稀釋至1×105cfu/mL～1×106cfu/mL。準(zhǔn)備無(wú)菌的玻璃試管24支，分為 A、B 兩組，每組 12 支編號(hào) 1～12，每個(gè)試管中加入0.5%的TTC 顯色劑5μL。A 組為復(fù)方聚維酮碘油乳劑，B 組為聚維酮碘溶液。將復(fù)方聚維酮碘油乳劑利用二倍稀釋法稀釋成 20g/L、10g/L、5g/L、2.5g/L、1.25g/L、0.625g/L、0.3125g/L 的濃度的受試液，在A 組試管中加入2mL 含兩倍濃度培養(yǎng)基的培養(yǎng)液，吸取稀釋后的受試液2mL 加入對(duì)應(yīng)的試管中，在A1-A10 號(hào)試管中接入0.1mL 的濃度約為 1×106cfu/mL 的菌液，A11 號(hào)試管加入 4mL 培養(yǎng)液和等量的菌液做陽(yáng)性對(duì)照，A12 號(hào)試管中只加培養(yǎng)液做陰性對(duì)照。聚維酮碘溶液用相同操作方法在B 組試管中進(jìn)行。將A、B 兩組試管放于37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

1.2.2.2 判斷方法

通過(guò)觀察，若A11 號(hào)試管變紅，表明陽(yáng)性對(duì)照組有細(xì)菌生長(zhǎng)；A12 號(hào)試管沒(méi)有變紅，表明陰性對(duì)照組沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)，則實(shí)驗(yàn)成立。A1-A10 試管中沒(méi)有變紅的編號(hào)數(shù)字最大試管所對(duì)應(yīng)的濃度即為該藥對(duì)鏈球菌的最小抑菌濃度（MIC）。

1.2.3 最小殺菌濃度的測(cè)定

1.2.3.1 操作步驟

在最小抑菌濃度的基礎(chǔ)上，選取該濃度及以前的各濃度試管，吸取100μL 試管液均勻涂板于TSA 固體培養(yǎng)基中。倒放于37℃生化培養(yǎng)箱中，24h后計(jì)數(shù)。

1.2.3.2 判斷方法

通過(guò)計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)，菌落總數(shù)小于或等于5 的培養(yǎng)板所對(duì)應(yīng)的試管中濃度最小的即為最小殺菌濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)得復(fù)方聚維酮碘油乳劑對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌和鏈球菌的MIC 依次為5g/L、10g/L、5g/L、1.25g/L；聚維酮碘溶液對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌和鏈球菌的MIC 依次為 2.5g/L、10g/L、10g/L、5g/L。復(fù)方聚維酮碘油乳劑對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌和鏈球菌的 MBC 依次為 5g/L、10g/L、5g/L、1.25g/L；聚維酮碘溶液對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌和鏈球菌的 MIC 依次為 2.5g/L、10g/L、10g/L、5g/L。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表1 所示。

表1 復(fù)方聚維酮碘油乳劑和聚維酮碘溶液的MIC、MBC 結(jié)果

2.2 結(jié)果分析

在MIC 和MBC 實(shí)驗(yàn)中因所用試劑為乳濁色，肉眼無(wú)法很直觀的看出細(xì)菌生長(zhǎng)狀況，遂采用TTC顯色劑的方法，利用嗜中溫性需氧菌在其新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的琥珀酸脫氫酶可以使無(wú)色的TTC 還原為紅色的TPF 的特性，在有細(xì)菌生長(zhǎng)的情況下會(huì)變?yōu)榧t色、無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)為無(wú)色的原理清晰地看出細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。將未變色的稀釋度最大的濃度判定為該藥物對(duì)相應(yīng)細(xì)菌的MIC 值。變紅色的試管在固體培養(yǎng)基上涂板后菌長(zhǎng)出來(lái)300 個(gè)以上的菌落，而未變紅的試管在固體培養(yǎng)基上涂板后菌沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)，根據(jù)這一結(jié)果，可知得到的MBC 值與MIC 值相同。

3 結(jié)論

復(fù)方聚維酮碘油乳劑對(duì)金黃色葡萄球菌、鏈球菌的抑制和殺滅作用均優(yōu)于聚維酮碘溶液，對(duì)大腸桿菌的抑制和殺滅作用要低于聚維酮碘溶液，對(duì)沙門(mén)氏菌的抑制和殺滅作用相同。此外，復(fù)方聚維酮碘油乳劑還含有龍血竭、樟腦、薄荷油等成分，使其對(duì)傷口具備止血、驅(qū)蚊等功效，這些藥物對(duì)聚維酮碘的抑菌作用帶來(lái)什么樣的影響需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。 □