（遼寧省本溪市衛(wèi)生健康發(fā)展服務(wù)中心，遼寧 本溪 117000）

宮頸癌是惡性腫瘤之一，其主要發(fā)病原因?yàn)閔r-HPV感染導(dǎo)致宮頸組織逐漸惡化并形成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[1]。宮頸組織惡化發(fā)生原因有多種，宮頸腫瘤微環(huán)境變化是反映宮頸組織惡化的一種標(biāo)志，微環(huán)境中如浸潤大量炎性細(xì)胞，將導(dǎo)致腫瘤相關(guān)性炎癥，進(jìn)而惡性發(fā)展成為癌癥的，而癌癥發(fā)生、進(jìn)展和預(yù)后不良與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞有密不可分的關(guān)系[2-3]。巨噬細(xì)胞能夠從多個(gè)方面影響腫瘤組織的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的能力，它具有多個(gè)分子標(biāo)志物，包括CD163+、CD204+等[4-5]。本研究通過選取2012年1月至2015年1月在本中心治療的120例宮頸組織病變患者，收集患者組織臨床樣本，并檢測(cè)組織中CD163+巨噬細(xì)胞的表達(dá)水平，探討巨噬細(xì)胞與hr-HPV感染之間及宮頸組織惡化的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2015年1月在本中心治療的120例宮頸組織病變患者，收集患者組織臨床樣本，根據(jù)宮頸組織病變程度分為對(duì)照組（正常宮頸組織）20例，宮頸瘤變組50例，宮頸癌組50例，3組患者基本資料對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 3組患者基本資料對(duì)比

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：確診為hr-HPV感染患者；無其他重大器官疾病患者；無精神疾病，能獨(dú)立完成調(diào)研患者；患者臨床資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：孕婦與急性盆腔感染患者；接受過放射治療與化療等非手術(shù)治療患者；宮頸腺癌患者。

1.3 方法 免疫組織化學(xué)法：采用福爾馬林將組織標(biāo)本中固定，石蠟包埋，連續(xù)切片成5 μm厚。將切片脫蠟水化，加入3%過氧化氫-甲醇共同孵育30 min，以除去內(nèi)源性過氧化物酶活性。加入檸檬酸鹽緩沖液，放置于微波爐中微波15 min以進(jìn)行抗原修復(fù)。后加入10%山羊血清于37 ℃封閉容器中封閉1 h。以1∶200比例加入CD163+小鼠抗人單克隆抗體稀釋液一抗稀釋并置于4 ℃冰箱孵育過夜。取出切片加入二抗后置于37 ℃容器中孵育30 min。采用DAB顯色1 min，并用蘇木素復(fù)染。取出切片并采用酒精脫水后放入二甲苯中透明，最終將切片風(fēng)干并置于中性樹脂封片固定。

hr-HPV病毒載量檢測(cè)：采HC-Ⅱ HPV檢測(cè)試劑盒對(duì)標(biāo)本中hr-HPV病毒的DNA含量進(jìn)行檢測(cè)，單位為RLU/CO，其中RLU表示相對(duì)光單位，CO表示陽性對(duì)照臨界值。陽性表示RLU/CO比值大于等于1，陰性表示RLU/CO比值小于1。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 采用低倍鏡（×100）對(duì)巨噬細(xì)胞的細(xì)胞膜上篩選，選擇呈棕黃色的細(xì)胞最密集區(qū)域進(jìn)一步分析，巨噬細(xì)胞平均數(shù)量以高倍鏡（×400）下隨機(jī)選取個(gè)視野的巨噬細(xì)胞平均值為準(zhǔn)，根據(jù)棕黃色的細(xì)胞所占比例判定表達(dá)量并進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為0～3：以小于5%評(píng)為0分；5%～20%1分；20%～50%為2分；大于50%為3分，低水平表達(dá)分區(qū)為0～1分，高水平表達(dá)為2～3分。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（）來表示，行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組患者的巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)、hr-HPV感染率及病毒載量對(duì)比 對(duì)比3組患者巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)可知，宮頸瘤變組、宮頸癌組中患者巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)、hr-HPV感染率及hr-HP病毒載量顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 3組患者的巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)、hr-HPV感染率及病毒載量對(duì)比

2.2 hr-HPV陽性及陰性感染的巨噬細(xì)胞表達(dá)量對(duì)比 對(duì)比hr-HPV感染患者中陽性患者及陰性患者表達(dá)計(jì)數(shù)，可知陽性患者巨噬細(xì)胞表達(dá)顯著高于陰性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）

2.3 巨噬細(xì)胞數(shù)量與宮頸癌患者臨床資料相關(guān)性分析 分析50例患者巨噬細(xì)胞數(shù)量與臨床數(shù)據(jù)相關(guān)性可知，宮頸癌患者巨噬細(xì)胞數(shù)量與其FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 結(jié)論

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病及病死率不斷提升，且發(fā)病年齡逐步提前并呈現(xiàn)地區(qū)增長趨勢(shì)，已成為威脅女性健康甚至導(dǎo)致死亡的主要疾病[6-8]。hr-HPV感染是宮頸癌發(fā)病的重要因素，其主要致病原因?yàn)榫奘杉?xì)胞數(shù)量不斷增加轉(zhuǎn)移，進(jìn)而導(dǎo)致宮頸組織惡性轉(zhuǎn)化，最終發(fā)展成為宮頸癌[9]。

病毒感染能夠促進(jìn)機(jī)體組織惡化，其原因?yàn)椴《灸軌驅(qū)е卵仔约?xì)胞介質(zhì)募集到腫瘤微環(huán)境中參與腫瘤惡性病變過程[10-11]。多數(shù)研究表明，病毒感染能夠激活巨噬細(xì)胞，而本研究發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞在感染患者中能高表達(dá)，進(jìn)一步分析可知宮頸惡性轉(zhuǎn)化與巨噬細(xì)胞密切相關(guān)，且隨著宮頸惡性病變進(jìn)展其表達(dá)呈逐漸增高趨勢(shì)，表明巨噬細(xì)胞浸潤增多可能與宮頸惡性病變發(fā)展有關(guān)。其主要原因?yàn)椴《靖腥灸軌驈亩喾矫嬗绊懩[瘤發(fā)展，感染產(chǎn)生的炎性因子能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的能力，且能與相關(guān)的成纖維細(xì)胞及因子相互作用，從而降低免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤的監(jiān)視與清除等抑制作用，最終導(dǎo)致宮頸組織惡性病變，進(jìn)而發(fā)展成為宮頸癌癥。多數(shù)研究表明巨噬細(xì)胞數(shù)量的增加與患者臨床病理參數(shù)有著一定的相關(guān)性。本研究通過對(duì)比宮頸癌患者巨噬細(xì)胞與臨床相關(guān)資料的關(guān)聯(lián)性可知，F(xiàn)IGO分期及宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與巨噬細(xì)胞數(shù)量變化密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其主要原因?yàn)榛颊吣[瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞局部浸潤而產(chǎn)生不良細(xì)胞因子，能夠加速基質(zhì)降解酶分解進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移伴隨著腫瘤癌性淋巴管的形成，因此導(dǎo)致了宮頸組織的惡性轉(zhuǎn)化。宮頸癌分期進(jìn)展是宮頸癌患者治療失敗、復(fù)發(fā)與死亡的主要原因，其分期越高表明腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞表達(dá)越強(qiáng)，而腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增加，進(jìn)而引起宮頸組織惡性病變，最終形成宮頸癌癥。

綜上所述，巨噬細(xì)胞的表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及FIGO分期密切相關(guān)，其高表達(dá)能夠促進(jìn)宮頸組織hr-HPV感染，與宮頸組織惡性變的程度成正相關(guān)。