李紅霞 湯景霖

1 河南省南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院輸血科 473000； 2 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院三全學(xué)院檢驗(yàn)系

新生兒溶血病(Hemolytic disease of newborn，HDN)是因母子血型不合導(dǎo)致的疾病，會(huì)導(dǎo)致貧血、黃疸等癥狀，影響患兒健康[1]。ABO血型不合HDN(ABO-HDN)的發(fā)病率較高，母親為O型血、患兒為A、B型血，輸血前需進(jìn)行血型檢測(cè)、溶血試驗(yàn)，避免使溶血反應(yīng)加重。微柱凝膠技術(shù)是較為先進(jìn)的紅細(xì)胞血型血清學(xué)技術(shù)，對(duì)ABO-HDN的診斷較準(zhǔn)確[2]。本文主要分析微柱凝膠技術(shù)在ABO血型不合新生兒溶血病診斷及輸血前檢驗(yàn)中的應(yīng)用。具體內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年4月—2019年5月就診于我院的60例ABO-HDN患兒，經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，按隨機(jī)數(shù)字表法分為2組，各30例。對(duì)照組男17例，女13例；體重2.85～3.73kg，平均體重(3.25±0.48)kg；日齡1～12d，平均日齡(5.27±1.50)d；根據(jù)《兒科急診醫(yī)學(xué)》[3]中HDN分型標(biāo)準(zhǔn)，重型5例，中型19例，輕型6例。研究組男16例，女14例；體重2.90～3.75kg，平均體重(3.55±0.45)kg；日齡1～11d，平均日齡(5.50±1.45)d；重型HDN為6例，中型18例，輕型6例。2組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可對(duì)比性。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《實(shí)用新生兒學(xué)》[4]中相關(guān)HDN診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均進(jìn)行輸血治療；③患兒家長(zhǎng)已簽知情同意書(shū)。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心臟病者；②存在藥敏過(guò)敏反應(yīng)；③存在其他遺傳性疾病者；④合并血液系統(tǒng)疾病者；⑤精神病家族史者。

1.3 方法 2組均使用微柱凝膠卡式專(zhuān)用離心機(jī)(長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司，TD-3A 型)、抗人球蛋白溶血三項(xiàng)檢測(cè)卡、酸放散試劑、FYQ 型孵育器均由長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.3.1 血型檢測(cè)：對(duì)照組行試管法檢驗(yàn)：抽取3ml靜脈血，制作1管紅細(xì)胞(濃度0.8%)懸液，再離心10min，離心速度3 000r/min后作1管血清，以鹽水試管法鑒定血型。研究組行微柱凝膠技術(shù)檢驗(yàn)：按照ABO血型抗原檢測(cè)卡(長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司)說(shuō)明書(shū)鑒定。抽取患兒2ml靜脈血，抗凝使用乙二胺四乙酸，離心3min，離心速度3 500r/min，再在1ml達(dá)亞美2號(hào)稀釋液中加入10μl壓積紅細(xì)胞制成紅細(xì)胞懸液(濃度1%)，無(wú)血塊、絮狀，于各孔中加入50μl懸液，常溫離心2min，離心速度900r/min，再離心5min，速度為1 500r/min，觀察檢測(cè)結(jié)果。

1.3.2 溶血試驗(yàn)：(1)游離抗體試驗(yàn)：對(duì)照組于A、B、O試管中加入2滴血清及對(duì)應(yīng)的1滴紅細(xì)胞懸液，于37℃水浴1h，如發(fā)生凝集，則有抗體，如無(wú)凝集發(fā)生，用生理鹽水洗滌后加入1滴廣譜抗IgG的抗人球蛋白血清，離心后如凝集，抗體則為陽(yáng)性。研究組在A、B、O試管中加入50μl紅細(xì)胞懸液(濃度0.8%)，25μl血清，于孵育器中處理15min后離心10min。(2)抗球蛋白試驗(yàn)：對(duì)照組在標(biāo)記的試管中加入1滴紅細(xì)胞懸液(濃度2%～5%)、1滴特異性抗人球蛋白血清，混勻后離心1min，查看離心結(jié)果。研究組在一張抗人球蛋白卡上標(biāo)記A、B、O三孔，并于其中加入紅細(xì)胞懸液50μl(濃度0.8%)，離心1min觀察結(jié)果。(3)抗體釋放試驗(yàn)：對(duì)照組于標(biāo)記A、B、O的試管中加入紅細(xì)胞懸液(3%～5%)和酶，水浴1h，溫度37℃，再用氯化鈉(0.9%)溶液洗滌3次，加入抗人球蛋白血清，離心處理后查看試驗(yàn)結(jié)果。研究組在一張抗人球蛋白卡上標(biāo)出A、B、O三孔，均注入紅細(xì)胞懸液(0.8%)，滴入放散液，孵育15min，離心處理。

1.4 評(píng)價(jià)指標(biāo) (1)參考《輸血治療學(xué)》[5]對(duì)ABO血型進(jìn)行診斷，比較2組的血型檢出率。(2)比較2組患兒的游離抗體試驗(yàn)、抗球蛋白試驗(yàn)、抗體釋放試驗(yàn)的陽(yáng)性率。若紅細(xì)胞凝聚則為陽(yáng)性，反之為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血型檢出率 對(duì)照組30例中有5例弱B抗原，3例弱A抗原未檢出；研究組30例中有1例弱B抗原未檢出。研究組的血型檢出率(96.67%)比對(duì)照組(73.33%)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.706，P=0.030<0.05)。

2.2 陽(yáng)性率 研究組游離抗體試驗(yàn)、抗球蛋白試驗(yàn)、抗體釋放試驗(yàn)的陽(yáng)性率均比對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 2組患兒溶血試驗(yàn)陽(yáng)性率對(duì)比[n(%)]

3 討論

HDN的病因在于胎兒遺傳了父方的血型抗原且母體中不存在此抗原，母體免疫球蛋白(IgG)抗體從胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血液中破壞其紅細(xì)胞，進(jìn)而使患者出現(xiàn)貧血、水腫、溶血、高膽紅素血癥等病癥，危害患兒健康[6-7]。治療ABO-HDN患兒多采用輸血方式，在輸血前需加強(qiáng)對(duì)患兒的相關(guān)血清學(xué)檢驗(yàn)。HDN患兒存在母源溶血性IgG抗體，游離于患兒的紅細(xì)胞及血清中，因此在對(duì)ABO-HDN患兒進(jìn)行早期診斷時(shí)需進(jìn)行游離抗體試驗(yàn)、抗球蛋白試驗(yàn)、抗體釋放試驗(yàn)，以便提高檢驗(yàn)準(zhǔn)確度，降低誤診的發(fā)生率[8-9]。

本文結(jié)果顯示，研究組的血型檢出率較高，且游離抗體試驗(yàn)、抗球蛋白試驗(yàn)、抗體釋放試驗(yàn)的陽(yáng)性率均比對(duì)照組高，說(shuō)明微柱凝膠技術(shù)對(duì)ABO-HDN的血型檢出率較高，可有效提高溶血三項(xiàng)試驗(yàn)陽(yáng)性率，促進(jìn)輸血治療的安全性。分析原因在于對(duì)照組使用的試管法應(yīng)用限制太多，如操作復(fù)制、耗時(shí)長(zhǎng)、需洗滌紅細(xì)胞、受操作者主觀影響、受離心時(shí)間、速度和重懸紅細(xì)胞濃度大小影響，容易出現(xiàn)漏診、誤診的情況，目前已逐漸被淘汰。而微柱凝膠技術(shù)具有標(biāo)本少、操作簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確度高的優(yōu)勢(shì)，受到醫(yī)護(hù)人員的青睞，被廣泛應(yīng)用于輸血前的血清學(xué)篩查中[10-11]。微柱凝膠技術(shù)是將符合檢測(cè)條件的稀釋液配成凝膠，灌注微管柱，利用其凝膠顆粒的分子篩作用，使紅細(xì)胞在離心時(shí)截留單個(gè)紅細(xì)胞，從而獲得凝集反應(yīng)結(jié)果。微柱凝膠技術(shù)的結(jié)果無(wú)須利用顯微鏡觀察，可直觀獲得，離心后處于凝膠底部為陰性，凝膠上中層為陽(yáng)性，且可重復(fù)操作，結(jié)果較準(zhǔn)確、穩(wěn)定。覃日吉等[12]也在相關(guān)研究中表明，微柱凝膠技術(shù)可準(zhǔn)確檢測(cè)ABO-HDN患兒的IgG抗體，尤其在游離抗體和抗體釋放試驗(yàn)中，更加標(biāo)準(zhǔn)化，檢測(cè)結(jié)果較穩(wěn)定，血型檢出率較高，保障了輸血治療安全性。但該種檢測(cè)方法也存在無(wú)法識(shí)別紅細(xì)胞不完全抗體、耗時(shí)較長(zhǎng)的缺點(diǎn)，具體有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，微柱凝膠技術(shù)對(duì)ABO-HDN的血型檢出率較高，可有效提高溶血三項(xiàng)試驗(yàn)陽(yáng)性率，促進(jìn)輸血治療的安全性。