胡 淇

湖南省寧鄉(xiāng)市人民醫(yī)院病理科 410600

宮頸癌屬女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤，侵襲性較強，易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，早期診斷及治療對患者預(yù)后改善具有重要意義。病理學(xué)研究表明，宮頸癌均由人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染引起，但僅少數(shù)HPV最終可發(fā)展至宮頸癌，提示致癌還需其他因子共同參與，探尋宮頸癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)生物學(xué)標志物仍是目前臨床研究的重點課題[1]。趨化因子CXC配體13(CXCL13)與胃癌、結(jié)、直腸癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，具有調(diào)節(jié)腫瘤細胞浸潤、促血管生成等作用[2]。雙特異性酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)激酶1b(Dyrk1b)在肺癌、卵巢癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤組織中均呈高表達狀態(tài)，在細胞周期及細胞凋亡過程中均發(fā)揮重要作用[3]。為探究上述兩種生物學(xué)標志物與宮頸癌發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系，本文將我院63例宮頸癌患者作為觀察對象，分析CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達與相關(guān)病理學(xué)參數(shù)關(guān)聯(lián)性?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月—2020年3月我院宮頸癌患者63例，其中年齡38～67歲，平均年齡(49.63±5.81)歲。均行宮頸癌根治術(shù)治療，術(shù)中取患者癌組織及癌旁正常宮頸組織標本(距癌變病灶邊緣1.5～2.0cm，術(shù)后經(jīng)組織病理學(xué)檢查確認未發(fā)生癌變)。

1.2 納入及排除標準 (1)納入標準：均經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)檢查確診為宮頸癌；術(shù)前無放療、化療、免疫、內(nèi)分泌相關(guān)治療史；均知情本研究并簽署同意書。(2)排除標準：合并其他惡性腫瘤；妊娠、哺乳期女性；所取組織標本無法正常行免疫組化檢查。

1.3 方法

1.3.1 組織標本CXCL13、Dyrk1b蛋白表達檢測：將手術(shù)切除的組織標本采用10%甲醇固定48h，石蠟包埋，以4μm厚度連續(xù)切片，經(jīng)烤片、室溫脫蠟、水化后，采用檸檬酸鹽液實施熱抗原修復(fù)，時間為2min，后采用PBS液反復(fù)沖洗3次，每次時間為5min，再于室溫下采用3%過氧化氫水浴10min，再以PBS液反復(fù)沖洗3次，每次時間為5min，加入50μl非免疫山羊血清(上海哈靈生物科技有限公司)封閉抗原，于37℃溫度下孵育15min后，去除山羊血清，加入鼠抗人CXCL13單克隆抗體(上海酶研生物科技有限公司，1∶50)及兔抗人Dyrk1b(武漢博士德生物工程有限公司，1∶100)單克隆抗體，室溫下孵育1h，以PBS液沖洗，室溫下水浴15min后，DAB顯色，顯色時間為4～5min，沖洗后采用蘇木精復(fù)染細胞核，梯度乙醇脫水，中性樹膠封片固定。

1.3.2 陽性表達判定標準：每張切片于高倍鏡下取5個視野，均實施染色程度評分及陽性細胞(細胞核或細胞質(zhì)中出現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色的細胞)百分比評分，兩項評分相加≥4分即為蛋白陽性表達。(1)染色程度評分：無染色記0分，淡黃色(輕度染色)記1分，棕黃色(中度染色)記2分，棕褐色(重度染色)記3分。(2)陽性細胞百分比評分：≤5%記0分，>5%～25%記1分，>25%～75%記2分，>75%為記3分。

1.4 觀察指標 (1)癌組織、癌旁正常宮頸組織中CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達率。(2)不同病理學(xué)參數(shù)(病灶直徑、腫瘤類型、分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度)癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達情況。(3)CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達與相關(guān)病理學(xué)參數(shù)關(guān)聯(lián)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 通過SPSS22.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以[n(%)]表示，行χ2檢驗，采用Spearman分析法進行相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織標本CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達率 癌組織CXCL13蛋白陽性表達率為65.08%(41/63)，Dyrk1b蛋白陽性表達率為80.95%(51/63)，均高于癌旁正常宮頸組織的0.00%(0/63)、14.29%(9/63)(χ21=60.777，P1<0.001；χ22=56.127，P2<0.001)。

2.2 不同病理學(xué)參數(shù)癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達情況 不同病灶直徑、分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達均有明顯差異(P<0.05)，不同腫瘤類型癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 不同病理學(xué)參數(shù)癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達情況[n(%)]

2.3 關(guān)聯(lián)性分析 經(jīng)Spearman分析得知，CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達與病灶直徑、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度呈正相關(guān)，與分化程度呈負相關(guān)(P<0.05)，見表2。

表2 關(guān)聯(lián)性分析

3 討論

既往臨床研究表明，趨化因子、信號傳導(dǎo)因子、轉(zhuǎn)錄因子等共同參與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移，探尋宮頸癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)因子對病情進展評估及預(yù)測預(yù)后均有重要意義[4]。

CXCL13屬趨化因子家族細胞因子，又稱B細胞趨化因子，具有調(diào)控炎癥細胞浸潤、抑制腫瘤細胞凋亡、促進血管新生及腫瘤細胞轉(zhuǎn)移等作用，是誘發(fā)惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因子[5]。相關(guān)研究指出，CX CL13抑制劑可有效作用于CXCR5/ERK信號通路，進而縮小腫瘤體積，由此分析CX CL13可通過活化相關(guān)信號通路促進腫瘤組織生長[6]。本研究結(jié)果顯示，CXCL13在宮頸癌組織中呈高表達狀態(tài)，且其陽性表達與腫瘤直徑、FIGO分期、腫瘤分化程度等多種病理學(xué)參數(shù)均呈明顯相關(guān)性，由此可見CXCL13在宮頸癌惡性進展中具有重要調(diào)控作用，可能與其促新生血管生成、促腫瘤細胞增殖活化的作用相關(guān)。

Dyrk1b蛋白屬絲氨酸/蘇氨酸激酶，在正常組織中一般不表達，但在多種惡性腫瘤中均呈過度表達[7]。相關(guān)臨床研究表明，Dyrk1b抑制劑可有效抑制宮頸癌細胞增殖及侵襲，具有誘導(dǎo)癌細胞凋亡作用，且敲除Dyrk1b基因后，癌細胞增殖分化相關(guān)蛋白的結(jié)構(gòu)及化學(xué)性質(zhì)可發(fā)生改變，因此認為，Dyrk1b蛋白可調(diào)控癌細胞增殖分化相關(guān)蛋白表達，進而促進癌細胞增殖與分化[8]。本文結(jié)果中，宮頸癌組織Dyrk1b蛋白陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，且其陽性表達可隨腫瘤增長、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度增加而升高，說明Dyrk1b蛋白可參與宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展，可能與其促癌細胞增殖、穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)等作用相關(guān)。

綜上可知，與癌旁正常組織比較，宮頸癌組織中CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達率較高，且其陽性表達與相關(guān)病理學(xué)參數(shù)呈明顯相關(guān)性，均是宮頸癌惡性進展中的重要因子。