○楊惠宇 潘發(fā)林

能力驗(yàn)證是通過各實(shí)驗(yàn)室之間的比對，來對一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的能力進(jìn)行考核。能力驗(yàn)證是檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢測水平的有效手段，也是保證實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系得到有效改進(jìn)的措施之一，有利于實(shí)驗(yàn)室自我完善，它不僅體現(xiàn)檢測人員的技術(shù)水平，更是實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)?zāi)芰Φ囊环N體現(xiàn)。為了提高實(shí)驗(yàn)室檢測能力，在做好實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的同時(shí)，我實(shí)驗(yàn)室自2016年通過硝基呋喃類代謝物檢測認(rèn)證后每年都積極參加農(nóng)業(yè)農(nóng)村局組織的能力驗(yàn)證。單位需要在樣品簽收后96 h之內(nèi)完成檢測工作并上報(bào)結(jié)果，報(bào)告需附稱樣記錄、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制記錄、譜圖以及標(biāo)準(zhǔn)曲線等，回收率在70%-120%之間判定結(jié)果為滿意。

1 準(zhǔn)備工作

1.1 實(shí)驗(yàn)人員

檢測人員在檢測前要做好個(gè)人防護(hù)，按照檢測方法要求準(zhǔn)備相應(yīng)的檢測試劑、器皿、儀器設(shè)備等，并按照標(biāo)準(zhǔn)方法配制試劑、標(biāo)注溶液等。檢測人員要充分了解實(shí)驗(yàn)原理、熟悉實(shí)驗(yàn)步驟、能夠正確處理實(shí)驗(yàn)中每個(gè)環(huán)節(jié)，將操作誤差降到最低，使整個(gè)檢測過程的質(zhì)量有所保障。

1.2 環(huán)境條件要求

在實(shí)驗(yàn)之前將實(shí)驗(yàn)室溫度調(diào)節(jié)到適宜溫度，實(shí)驗(yàn)前處理室以及儀器室的溫度應(yīng)控制在22-25℃。

1.3 準(zhǔn)備器皿

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中將要用到的器皿，配制溶液時(shí)要使用經(jīng)過檢定計(jì)量合格的移液器或器皿，所有器皿在使用之前需要驗(yàn)證是否漏液，新的器皿用純水清洗，用過的器皿用甲醇清洗，確保沒有殘留；必要的時(shí)候用甲醇等試劑超聲清洗。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

檢查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書，確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否在有效期內(nèi)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度以及分子量進(jìn)行換算。將8種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按照標(biāo)準(zhǔn)的要求進(jìn)行配置，分別配置成濃度為100μg/mL的同位素內(nèi)標(biāo)溶液，以及濃度為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液待用，4℃條件下保存期為180天。難溶的物質(zhì)可通過超聲幫助溶解。將同位素內(nèi)標(biāo)溶液和標(biāo)準(zhǔn)儲備液分別用純水逐級稀釋成濃度為10 ng/mL和100 ng/mL的工作溶液。稀釋時(shí)徐將儲備液放置至室溫，觀察是否有晶體析出，如果有晶體析出需要重新?lián)u勻至溶解后再進(jìn)行稀釋。

1.5 所需藥品及配制

鹽酸溶液：0.2 mol/L；

二硝基苯甲醛（2-NBA衍生化試劑）：0.05 mol/L；

乙酸銨溶液：0.002 mol/L；

二甲基亞砜（國產(chǎn)）、磷酸氫二鉀（國產(chǎn)）、甲酸、乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、乙酸乙酯（色譜純）等。

1.6 儀器條件優(yōu)化

儀器設(shè)備的準(zhǔn)確性是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵性因素之一，對實(shí)驗(yàn)中所需的儀器設(shè)備進(jìn)行核查，確認(rèn)儀器檢定校準(zhǔn)是否在有效期內(nèi)，是否能夠滿足實(shí)驗(yàn)要求，可通過新配置的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行驗(yàn)證，確保準(zhǔn)確無誤。若新配置的標(biāo)準(zhǔn)溶液靈敏度不夠高，需要優(yōu)化儀器和檢測條件，可更換色譜柱、清洗離子源等，且控制液質(zhì)室溫度為22-25℃?？商崆皩x器優(yōu)化到最佳狀態(tài)待用。

1.7 質(zhì)控樣品制備與練習(xí)

按照檢測方法提前準(zhǔn)備質(zhì)控樣品，將陰性控制樣品（空白樣品）中加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)冷凍過夜，可作為回收率試驗(yàn)、平行試驗(yàn)練習(xí)樣品。按照作業(yè)指導(dǎo)書要求將質(zhì)控樣品作為待測樣品進(jìn)行前處理練習(xí)，并上機(jī)檢測，進(jìn)一步熟練檢測步驟。

2 樣品處理

2.1 核驗(yàn)樣品

檢查樣品編號是否正確，確認(rèn)樣品是否有效，如考核樣品呈完全解凍狀態(tài)或者運(yùn)輸時(shí)間超過72 h則為無效樣品，需安排重新領(lǐng)取樣品。有效樣品需要立即開展實(shí)驗(yàn)，不可放置過夜。樣品操作過程中盡量避光。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

本實(shí)驗(yàn)選擇六個(gè)濃度點(diǎn)，分別為0.25、0.5、1、2.5、5、10 ng/mL，由于硝基呋喃類代謝物的標(biāo)準(zhǔn)曲線需要進(jìn)行衍生化處理，因此標(biāo)注曲線與待測樣品同時(shí)進(jìn)行前處理。

2.3 樣品衍生化

待樣品自然解凍后，按照能力驗(yàn)證文件要求，稱取3個(gè)平行待測樣品和空白樣品，檢測過程試劑空白和樣品空白需同步進(jìn)行。質(zhì)控樣品可選擇空白樣品加標(biāo)，添加濃度一般為2-5倍定量限，也可選擇購買已知濃度的質(zhì)控樣品，同時(shí)確保質(zhì)控樣品和待測樣品在相同條件下進(jìn)行前處理，保證操作步驟的一致性，將誤差降到最低。分別稱取2.00 g空白樣品于50 mL離心管中備用。首先加入50 μL同位素混合內(nèi)標(biāo)工作液，渦旋混合器混合50 s，再加入5 mL鹽酸溶液，300 μL二硝基苯甲醛溶液，渦旋混合器混合50 s，然后置于超聲清洗儀中超聲2 h，水溫控制在35℃左右，以上操作過程盡量避光操作。超聲結(jié)束后將樣品置于搖床中，溫度設(shè)置為37℃，恒溫震蕩17h。

2.4 樣品前處理

取出樣品，冷卻至室溫，首先加入磷酸氫二鉀溶液調(diào)pH值到7.4（±0.2），再加入4 mL乙酸乙酯，渦旋混勻60 s，4 000 r/min離心5 min，重復(fù)提取一次，合并上清液直接過Prime HLB固相萃取小柱，收集濾液至10 mL離心管中，38℃水浴氮?dú)獯蹈?。?zhǔn)確加入1 mL甲醇（20%）-水溶液，渦旋混勻60 s，如果樣品油脂過多，可用低溫高速離心機(jī)13 000 r/min離心10 min，取下層溶液過0.22 μm濾膜，準(zhǔn)備上機(jī)檢測。

2.5 上機(jī)檢測

本方法采用ACQUITY UPLC?BEH C 18柱；柱溫：35℃；流動(dòng)相：A為2 mol/L乙酸銨水溶液，B為甲醇溶液；流速為0.3 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL。

ESI正離子化模式；儀器型號：Waters Xevo TQS；離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)檢測（MRM）；錐孔電壓：40 V；毛細(xì)管電壓：0.9 kV；脫溶劑氣溫度：50℃。

3 結(jié)果分析

首先檢查譜圖，看是否有積分不準(zhǔn)確的情況，在積分準(zhǔn)確的情況下通過對質(zhì)控樣品回收率的分析，判斷此次實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量控制情況，通過對質(zhì)控樣品的分析，判斷此次能力驗(yàn)證的結(jié)果偏高還是偏低。其次比較試劑空白和樣品空白譜圖，判斷是否在操作過程中有雜質(zhì)引入以及基質(zhì)干擾。最后仔細(xì)分析待測樣品的數(shù)據(jù)以及譜圖，判斷三個(gè)平行樣品之間重復(fù)性是否良好，計(jì)算質(zhì)控RSD以及品行待測樣品RSD并上報(bào)結(jié)果。根據(jù)能力驗(yàn)證文件要求及時(shí)在網(wǎng)站上報(bào)數(shù)據(jù)，并郵寄原始記錄等，原始記錄要求手寫并簽字。檢測結(jié)果見下表。

2020年水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物能力驗(yàn)證情況(ND表示未檢出)

4 能力驗(yàn)證體會

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，養(yǎng)殖面積的擴(kuò)大，水產(chǎn)品的質(zhì)量安全問題日益凸顯，食品安全問題成為老百姓越來越關(guān)注的問題。作為檢測機(jī)構(gòu)，提高檢測能力、熟練掌握檢測方法、保證檢測質(zhì)量是關(guān)鍵。只有提高檢測機(jī)構(gòu)的檢測能力，才能更有效的保障水產(chǎn)品的質(zhì)量安全。而能力驗(yàn)證結(jié)果是實(shí)驗(yàn)室管理水平和檢測人員檢驗(yàn)?zāi)芰Φ木C合體現(xiàn)，積極參加能力驗(yàn)證對實(shí)驗(yàn)室技術(shù)水平、檢驗(yàn)人員的操作水平都有一定程度的提高。通過對能力驗(yàn)證結(jié)果的分析，可發(fā)現(xiàn)自身與其他實(shí)驗(yàn)室之間的差距與不足，以及實(shí)驗(yàn)室在技術(shù)管理上的缺陷，從而保證實(shí)驗(yàn)室與其他檢測結(jié)構(gòu)檢測能力持平。能力驗(yàn)證結(jié)果為滿意，在一定程度上增強(qiáng)了檢測人員的信心，進(jìn)一步提高了本實(shí)驗(yàn)室出具數(shù)據(jù)的可信度。對于水產(chǎn)品硝基呋喃類代謝物能力驗(yàn)證掌握前處理方法和上機(jī)操作是關(guān)鍵，要加強(qiáng)檢測人員的技術(shù)水平，從實(shí)驗(yàn)前期開始準(zhǔn)備，把能力驗(yàn)證作為實(shí)驗(yàn)室的基本要求，只有檢測水平提高了，監(jiān)管水平才會提高，水產(chǎn)品的質(zhì)量安全才會得到保障，我們的檢測才是有意義的。

（通聯(lián)：130033，吉林省長春市水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心）