（江蘇洋河酒廠股份有限公司，江蘇宿遷 223800）

鄰苯二甲酸酯（Phthalates，PAEs）是一種常見的塑化劑，在包裝材料、塑料管道、塑料墊片等各類塑料制品中廣泛應(yīng)用，可通過(guò)呼吸道、消化道和皮膚等途徑進(jìn)入人體[1]，是一種環(huán)境激素類內(nèi)分泌干擾化合物，具有生殖毒性、發(fā)育毒性及致癌性[2]。白酒作為我國(guó)特有酒類，乙醇含量較高，是鄰苯二甲酸酯類塑化劑的良好“溶劑”，在白酒生產(chǎn)、運(yùn)輸及貯存過(guò)程中接觸到塑料制品均有可能引入污染，進(jìn)而促使PAEs 的遷移[3]。白酒質(zhì)量安全性依然是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。

PAEs 的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[4]、氣質(zhì)聯(lián)用法[5-6]、液相色譜法[7-8]等，目前，國(guó)內(nèi)對(duì)食品中PAEs 通用測(cè)定方法為氣質(zhì)聯(lián)用法，即國(guó)標(biāo)法[9]，但國(guó)標(biāo)法一方面前處理操作較繁瑣，需進(jìn)行稱量—加水—混勻—加正己烷—超聲—離心等，工作效率較低，對(duì)生產(chǎn)性企業(yè)適用性不夠；另一方面國(guó)標(biāo)法作為通用標(biāo)準(zhǔn)，試樣均需用正己烷萃取，采用正己烷萃取白酒試樣時(shí)，因白酒中乙醇含量較高，增大了PAEs 在水相中的溶解度，同時(shí)導(dǎo)致萃取劑正己烷大量溶解到水層，進(jìn)而導(dǎo)致萃取回收率顯著偏低[10-11]，白酒與其他食品試樣相比，基底相對(duì)干凈，具備了直接進(jìn)樣檢測(cè)的條件[7]，DBP 和DEHP 為白酒中兩種常見鄰苯二甲酸酯[12]，同時(shí)國(guó)家衛(wèi)生計(jì)委僅對(duì)DEHP和DBP的健康風(fēng)險(xiǎn)做了評(píng)價(jià)，含量分別在5.0 mg/kg和1.0 mg/kg以下時(shí)，處于可接受水平[13]，2種PAEs 對(duì)應(yīng)氘代物（D4-DBP 和D4-DEHP）性質(zhì)和在譜圖上保留時(shí)間滿足作為雙內(nèi)標(biāo)條件。與外標(biāo)法相比，內(nèi)標(biāo)法可以一定程度校準(zhǔn)基質(zhì)效應(yīng)，同時(shí)可降低重復(fù)進(jìn)樣和實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定性對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

基于以上背景，本實(shí)驗(yàn)以D4-DBP 和D4-DEHP 為內(nèi)標(biāo)，采用直接進(jìn)樣方式建立白酒中18 種鄰苯二甲酸酯檢測(cè)方法，并重點(diǎn)考察該方法檢出限、定量限及精密度，以期建立一種操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確快速且適合酒企開展塑化劑檢測(cè)的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

酒樣：市售品牌白酒。

儀器設(shè)備：GCMS-QP2010SE 氣相色譜質(zhì)譜儀，帶電子轟擊源（EI），日本島津；MS 3 basic 渦旋混勻器，德國(guó)艾卡。

試劑：16 種PAEs 標(biāo)準(zhǔn)品。鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、鄰苯二甲酸二正丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、鄰苯二甲酸二（4-甲基2-戊基）酯（BMPP）、鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、鄰苯二甲酸丁基芐基酯（BBP）、鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（DCHP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、鄰苯二甲酸二壬酯（DNP）、鄰苯二甲酸二苯酯（DPhP），甲醇體系混合液體標(biāo)準(zhǔn)品，濃度為1000 μg/mL，純度＞95%中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院；鄰苯二甲酸二烯丙酯（DAP）、鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）、氘代鄰苯二甲酸二正丁酯（D4-DBP）、氘代鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（D4-DEHP），純度＞95%，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；色譜無(wú)水乙醇，德國(guó)默克公司；一級(jí)水，實(shí)驗(yàn)室制備。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液配制

60 %（體積分?jǐn)?shù)）乙醇溶液的配制：準(zhǔn)確量取300 mL 無(wú)水乙醇移于500 mL 容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻備用。

鄰苯二甲酸二烯丙酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000 μg/mL）：準(zhǔn)確稱取鄰苯二甲酸二烯丙酯(DAP)0.100 g(精確到0.0001 g)于100 mL 容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并準(zhǔn)確配制成質(zhì)量濃度為1000 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

鄰苯二甲酸二異壬酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000 μg/mL）：準(zhǔn)確稱取鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）0.100 g(精確到0.0001 g)于100 mL 容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解準(zhǔn)確配制成質(zhì)量濃度為1000 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

17 種PAEs 標(biāo)準(zhǔn)中間液（10 μg/mL）：分別準(zhǔn)確移取16 種PAEs 標(biāo)準(zhǔn)品(1000 μg/mL)和鄰苯二甲酸二烯丙酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1000 μg/mL)各1 mL 至100 mL 容量瓶中加入無(wú)水乙醇并準(zhǔn)確定容至刻度。

2種氘代同位素內(nèi)標(biāo)使用溶液：準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移10 mg D4-鄰苯二甲酸二正丁酯（D4-DBP）和25 mg D4-鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酸（D4-DEHP）至100 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并準(zhǔn)確定容至刻度，得到100 μg/mL D4-DBP 和250 μg/mL D4-DEHP，然后取上述溶液1 mL 至10 mL 容量瓶，用60 %乙醇并準(zhǔn)確定容至刻度，得到10 μg/mL D4-DBP 和25 μg/mL D4-DEHP內(nèi)標(biāo)使用液。

18 種PAEs 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：準(zhǔn)確吸取17 種PAEs標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(10 μg/mL)和DINP(10 μg/mL)，用60%乙醇逐級(jí)稀釋，配制成17種濃度為0.0 μg/mL、0.02 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和濃度分別為0.0 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2 μg/mL、4.0 μg/mL、8.0 μg/mL、10.0 μg/mL 的DINP 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，加入雙內(nèi)標(biāo)使用液，臨用時(shí)配制。

1.2.2 儀器條件

氣相色譜條件：色譜柱：HP-5MS 石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）。進(jìn)樣口溫度：290 ℃。升溫程序：初始柱溫60 ℃，保持l min，以20 ℃/min 升溫至220 ℃，保持1 min，再以5 ℃/min升溫至280 ℃，保持2 min，最后以20 ℃/min升溫至300 ℃，不保持。載氣：氦氣（純度＞99.999%），流速：l mL/min。進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。進(jìn)樣量：0.6μL。

質(zhì)譜條件：電離方式：電子轟擊電離源(EI)。電離能量：70 eV。傳輸線溫度：280 ℃。

離子源溫度：230 ℃。監(jiān)測(cè)方式：選擇離子掃描模式（SIM）。溶劑延遲：7 min。

1.2.3 樣品處理

準(zhǔn)確量取5 mL 樣品至比色管，加入60 μL 內(nèi)標(biāo)使用液，混勻后，轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶，GC/MS 分析檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 18種鄰苯二甲酸酯色譜質(zhì)譜分析

在SACN 模式下，分別采集18 種PAEs 混標(biāo)溶液和內(nèi)標(biāo)混合溶液（D4-DBP 10 mg/L 和D4-DEHP 25 mg/L）全掃譜圖，對(duì)色譜圖進(jìn)行分析，得到18 種PAEs和2種內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜圖，盡量選擇響應(yīng)較高和質(zhì)量數(shù)較大的為定量離子，選擇2 個(gè)響應(yīng)和質(zhì)量數(shù)次之的為定性離子，同時(shí)確定各指標(biāo)保留時(shí)間，結(jié)果見表1。

表1 目標(biāo)化合物保留時(shí)間及特征離子

采用上述定性、定量離子，進(jìn)行SIM 模式掃描，得到18種PAEs總離子流色譜圖，見圖1。

由圖1 可知，18 種鄰苯二甲酸酯化合物標(biāo)準(zhǔn)品峰形和分離度均較好。

由于DINP峰多簇，呈現(xiàn)“五指峰”峰型，其出峰時(shí)間較寬，包裹DNOP，國(guó)標(biāo)方法均選149 m/z 為DNOP 和DINP 定量離子，本研究為避免DNOP 和DINP 定量時(shí)相互干擾，故選DINP 定量離子為293 m/z。

2.2 方法的線性范圍

圖1 18種PAEs標(biāo)準(zhǔn)品總離子流色譜圖

依據(jù)GB 5009.271 和樣品檢出情況，本實(shí)驗(yàn)選擇0.00 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L為17種鄰苯二甲酸酯濃度線性范圍，選擇0.0 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L、8.0 mg/L、10.0 mg/L 為DINP 標(biāo)準(zhǔn)濃度線性范圍，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)3 次，采集結(jié)果取平均值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到18 種PAEs 線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍，詳見表2。由表2 可知，在要求的線性范圍內(nèi)，18種PAEs 線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99，滿足分析要求。

2.3 方法檢出限和定量限

本試驗(yàn)采用基于響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差法確定本方法的檢出限和定量限，方法檢出限和方法定量限可分別用測(cè)定結(jié)果3δ/S 和10δ/S 進(jìn)行計(jì)算，其中δ為低濃度時(shí)測(cè)量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差，S 為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。向空白樣品中加標(biāo)樣，配制0.05 mg/L 濃度（17 種混標(biāo)）和0.50 mg/L（DINP）加標(biāo)樣品進(jìn)樣測(cè)試11 次，計(jì)算其測(cè)量結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差，進(jìn)而計(jì)算方法檢出限和定量限，結(jié)果見表3。

由表3 可知，18 種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的方法檢出限和定量限存在一定差異性，其中17 種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)（除DINP）的檢出限范圍在0.01～0.05 mg/L 之間，定量限范圍在0.03～0.17 mg/L之間，DINP 的方法檢出限和定量限分別為0.49 mg/L 和1.63 mg/L，均優(yōu)于國(guó)標(biāo)對(duì)定量限的要求，即DBP 定量限為0.30 mg/mL，DINP 定量限為9.0 mg/mL，除DBP 和DINP 之外其他16 種鄰苯二甲酸酯定量限均為0.50 mg/mL。

表4 18種PAEs的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和回收率

2.4 方法的精密度和回收率

隨機(jī)取一接近空白樣品，僅DMP 和DBP 有檢出，檢出值為0.01 mg/L，在樣品中分別添加兩種標(biāo)準(zhǔn)溶液的3 水平濃度，即17 種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.06 mg/L、0.20 mg/L、1.00 mg/L）和DINP 標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.50 mg/L、2.00 mg/L、6.00 mg/L），每個(gè)添加濃度重復(fù)測(cè)定6 次，計(jì)算RSD 值和回收率，結(jié)果見表4。

表5 質(zhì)控樣驗(yàn)證測(cè)定結(jié)果

由表4 可知，18 種鄰苯二甲酸酯的RSD 在0.44%～8.84%之間，說(shuō)明該分析方法的精密度較好，重現(xiàn)性良好；加標(biāo)回收率范圍在88.89 %～116.67 %之間，說(shuō)明該方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度較好，方法準(zhǔn)確可靠。

2.5 質(zhì)控樣驗(yàn)證

配制質(zhì)控樣，使得17 種鄰苯二甲酸酯濃度0.50 mg/L，DINP 濃度為5.00 mg/L，采用本檢測(cè)方法對(duì)配制質(zhì)控樣平行測(cè)定6 次，計(jì)算RSD 和相對(duì)誤差，以進(jìn)一步驗(yàn)證方法的可行性，結(jié)果見表5。

由表5 可知，質(zhì)控樣檢測(cè)結(jié)果RSD 在0.99%～4.97%范圍內(nèi)，均小于10%，同時(shí)相對(duì)誤差絕對(duì)值均在0.33 %～4.77 %范圍內(nèi)，均小于10 %，說(shuō)明該方法準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性均較好，能夠滿足檢測(cè)分析要求。

3 結(jié)論

本研究采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合雙內(nèi)標(biāo)定量法直接分析白酒中18 種PAEs。結(jié)果表明：采用D4-DBP 和D4-DEHP 雙內(nèi) 標(biāo)可 對(duì)18 種PAEs 的準(zhǔn)確定量；標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)均在0.99 以上，說(shuō)明線性良好；RSD 在0.44 %～8.84 %之間，加標(biāo)回收率在88.89%～116.67%之間，說(shuō)明該方法準(zhǔn)確可靠；除DINP 以外17 種PAEs 檢出限在0.01～0.05 mg/L之間，定量限在0.03～0.17 mg/L之間，DINP 的檢出限和定量限分別為0.49 mg/L 和1.63 mg/L，均優(yōu)于國(guó)標(biāo)對(duì)定量限的要求。以上可知，采用該方法檢測(cè)白酒中18種PAEs具有可行性。

本方法采用直接進(jìn)樣法，簡(jiǎn)化前處理流程，減少溶劑污染，提高分析效率，適于白酒中塑化劑的檢測(cè)分析，對(duì)白酒生產(chǎn)企業(yè)就塑化劑檢測(cè)提供一定參考價(jià)值。