肖萌，殷勇

(1.中國人民武裝警察部隊(duì)警官學(xué)院，四川 成都 610213；2.四川利爾作物科學(xué)有限公司，四川 成都 610000)

30%氯氟吡·滅·2甲微乳劑是一種新型除草劑，其中：氯氟吡氧乙酸異辛酯，化學(xué)名稱為4-氨基-3,5-二氯-6-氟-2-吡啶氧乙酸異辛酯，是一種選擇性內(nèi)吸傳導(dǎo)型苗后除草劑，在土壤中易降解，半衰期較短，可防除闊葉雜草[1-3]；滅草松化學(xué)名為3-異丙基-(1H)-苯駢-2,1,3-噻二嗪-4-酮-2,2-二氧化物，是一種觸殺型及內(nèi)吸性除草劑，可防治闊葉雜草和莎草科雜草[4-6]；2甲4氯化學(xué)名為2-甲基-4-氯苯氧乙酸，是一種選擇性內(nèi)吸傳導(dǎo)激素型除草劑，可防治闊葉雜草[7]。經(jīng)藥效試驗(yàn)證明，氟氯吡氧乙酸異辛酯，滅草松和2甲4氯三者復(fù)配可擴(kuò)大除草譜，提高除草效果[8]。

目前，氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松和2甲4氯單劑的分析方法已有報(bào)道[9-14]，而在復(fù)配制劑中，對這3種化合物同時(shí)分析的方法尚未見報(bào)道。筆者建立了一種高效液相色譜分析方法，可以對30%氯氟吡氧乙酸異辛酯·滅草松·2甲4氯微乳劑中3種有效成分同時(shí)進(jìn)行定量分析。該法也適用氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松和2甲4氯原藥及制劑的分析。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 試劑與儀器

甲醇，色譜純，Sigma-Aldrich公司；磷酸，分析純，成都科龍化工試劑廠；新蒸二次蒸餾水；氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%)，沈陽化工研究院；滅草松標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%)，沈陽化工研究院；2甲4氯標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%)，沈陽化工研究院；30%氯氟吡氧乙酸異辛酯·滅草松·2甲4氯微乳劑，四川利爾作物科學(xué)有限公司。

Agilent 1260高效液相色譜儀，具二極管陣列檢測器(DAD檢測器)；Agilent 1260色譜數(shù)據(jù)處理工作站：版本C. 01. 07. SR2[255]，Hypersil BDS C18不銹鋼柱色譜柱(250 mm×4.6 mm，內(nèi)裝5 μm C18填充物)，濾膜孔徑0.45 μm，25 μL微量進(jìn)樣器，超聲波清洗器。

1.2 色譜條件

采用梯度洗脫，洗脫條件見表1所示。

表1 梯度洗脫條件

柱溫25 ℃；檢測波長0 min為255 nm，7 min改變波長為235 nm；進(jìn)樣體積5 μL；保留時(shí)間：滅草松5.78 min、2甲4氯10.31 min、氯氟吡氧乙酸異辛酯22.29 min。標(biāo)樣及試樣的高效液相色譜見圖1。

圖1 標(biāo)樣及試樣的高效液相色譜

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取氯氟吡氧乙酯異辛酯標(biāo)樣0.05 g(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度后，搖勻備用。稱取滅草松標(biāo)樣0.11 g和2甲4氯標(biāo)樣0.03 g(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，移取10 mL上述氯氟吡氧乙酯異辛酯標(biāo)樣溶液于此容量瓶中，將其用甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，用超聲波清洗器超聲5 min，后脫氣3 min，用0.45 μm濾膜過濾，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取30%氯氟吡氧乙酸異辛酯·2甲4氯·滅草松微乳劑0.5 g(精確至0.000 2 g)至50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，搖勻，用超聲波清洗器超聲5 min，后脫氣3 min，用0.45 μm濾膜過濾，備用，作為測定氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松和2甲4氯的試樣。

1.3.3 測定方法

在液相色譜條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)測定數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針峰面積的重復(fù)性，直到相鄰兩針氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松和2甲4氯的峰面積相對變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液—試樣溶液—試樣溶液—標(biāo)樣溶液的順序分別進(jìn)行測定。

1.3.4 計(jì)算方法

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松和2甲4氯峰面積分別進(jìn)行平均，兩次平行測定結(jié)果相對偏差不大于2%時(shí)，結(jié)果取其平均值。按式(1)計(jì)算各物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(X1)。

(1)

式中：A1是標(biāo)樣峰面積的平均值；A2是試樣峰面積的平均值；ms是標(biāo)樣的質(zhì)量；mx是試樣質(zhì)量；p是標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動相

根據(jù)氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松和2甲4氯的理化性質(zhì)，對比其在甲醇和乙腈的溶解度，選擇甲醇作為溶劑。為了得到更好的峰形和分離效果，在選擇流動相時(shí)，對甲醇和水、乙腈和水按不同的比例在色譜柱上進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn)。

分別用純水、0.1%磷酸水溶液和0.2%磷酸水溶液作水相(甲醇作有機(jī)相)，對30%氯氟吡氧乙酸異辛酯·2甲4氯·滅草松微乳劑進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)用純水作水相時(shí)，3種有效成分無法分離開，峰形很差，重現(xiàn)性差；當(dāng)用0.1%磷酸水溶液或0.2%磷酸水溶液作水相時(shí)，3種有效成分分離度好，并且都能進(jìn)行分析測定；考慮到常規(guī)色譜柱使用的pH值范圍是2.0～8.0，如果因pH值使用不當(dāng)，很難將色譜柱恢復(fù)，0.2%磷酸水溶液的pH值為2.02，已為色譜柱使用的下限，因此選擇0.1%磷酸水溶液作水相。

用乙腈作有機(jī)相時(shí)，30%氯氟吡氧乙酸異辛酯·2甲4氯·滅草松微乳劑中滅草松和2甲4氯的峰形拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，并且峰面積相差太大，測定結(jié)果不準(zhǔn)確；而用甲醇作有機(jī)相時(shí)，3種有效成分峰形好、分離度高，能滿足分析測定的要求(圖2)。最終確定流動相為甲醇+水(0.1%磷酸水溶液)，當(dāng)流速控制在1.0 mL/min時(shí)，各有效成分峰形對稱，分離度均大于1.5，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間短。

圖2 甲醇作有機(jī)相時(shí)的液相色譜

2.1.2 洗脫程序

由于3種有效成分極性差別較大，無法用等度洗脫對30%氯氟吡氧乙酸異辛酯·2甲4氯·滅草松微乳劑進(jìn)行分離測定，因此選用梯度洗脫的方法，體積比分別為60∶40、60∶40、65∶35、95∶5、95∶5、60∶40、60∶40。

2.1.3 色譜柱

選擇常規(guī)的BDS柱進(jìn)行分離測定，經(jīng)驗(yàn)證，主峰與雜質(zhì)峰的分離度都大于1.5，實(shí)現(xiàn)了完全分離；主峰的拖尾因子在0.5～2.5之間；理論塔板數(shù)高，柱效好。

2.1.4 檢測波長

分別配制一定濃度的有效成分的標(biāo)準(zhǔn)溶液，向高效液相色譜儀中注入相同量(5 μL)，比較在不同波長下有效成分的峰面積；通過DAD檢測器在190～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描,結(jié)果見圖3。由圖3可見，氯氟吡氧乙酸異辛酯在220～240 nm范圍內(nèi)有較大吸收，滅草松在200～225 nm范圍內(nèi)有較大吸收，2甲4氯在220～270 nm范圍內(nèi)有較大吸收?？紤]制劑中助劑對吸收的影響，以及樣品中3組分的峰高及峰面積要盡量接近，確保測量的準(zhǔn)確，最終選定0 min檢測波長為255 nm，7 min改變波長為235 nm。

圖3 3種有效成分的紫外吸收光譜

2.2 方法的線性相關(guān)性

配制不同濃度的氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松和2甲4氯標(biāo)準(zhǔn)溶液，在色譜條件下每個濃度的樣品重復(fù)進(jìn)樣2次，并且相鄰兩針的峰面積相對偏差小于1%，取其峰面積平均值。以3種有效成分的質(zhì)量為橫坐標(biāo)、峰面積值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，氯氟吡氧乙酸異辛酯的質(zhì)量為0.02～0.16 g時(shí)(其中質(zhì)量濃度為80～640 mg/L)，具有良好的線性范圍，線性回歸方程為y=28 199x+3.240 2，R2為0.999 9；滅草松的質(zhì)量為0.05～0.20 g時(shí)(其中質(zhì)量濃度為1 000～4 000 mg/L)，具有良好的線性范圍，線性回歸方程為：y=76 773x+611.53，R2為0.999 0；2甲4氯的質(zhì)量為0.015～0.06 g時(shí)(其中質(zhì)量濃度為300～1 200 mg/L)，具有良好的線性范圍，線性回歸方程為：y=121 057x+195.47，R2為0.999 2。

2.3 方法的精密度測定

從同一份30%氯氟吡氧乙酸異辛酯·滅草松·2甲4氯微乳劑中準(zhǔn)確稱取5個試樣進(jìn)行分析測定，計(jì)算氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松和2甲4氯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.02，0.10和0.03，變異系數(shù)分別為0.49%，0.45%和0.45%(表2)。

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度測定

采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在測得質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松、2甲4氯試樣中分別加入不同量的氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松、2甲4氯標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行分析測定，結(jié)果見表3。由表3可見，氯氟吡氧乙酸異辛酯的平均回收率為99.5%、滅草松的平均回收率為100.0%、2甲4氯的平均回收率為100.3%。

表2 方法的精密度

表3 方法的準(zhǔn)確度

3 結(jié) 論

建立了30%氯氟吡氧乙酸異辛酯·滅草松·2甲4氯微乳劑的高效液相色譜分析方法。選擇甲醇和0.1%磷酸水溶液作為流動相，采用梯度洗脫程序。該法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度、線性關(guān)系良好，適用于復(fù)配制劑中氯氟吡氧乙酸異辛酯、滅草松和2甲4氯的分析檢測，是產(chǎn)品質(zhì)量控制和應(yīng)用研究中較為理想的分析方法，同時(shí)也為農(nóng)藥制劑的分析方法開發(fā)提供借鑒及思路。