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        術(shù)前超聲造影和術(shù)中快速冰凍病理切片診斷VETC癌巢型肝細(xì)胞癌的價(jià)值及患者手術(shù)方式選擇研究

        2021-04-07 08:04:28楊建榮鐘敬濤劉天奇杜陽(yáng)春韋所蘇唐耘天黃永塔董小鋒
        關(guān)鍵詞:病理切片冰凍內(nèi)皮細(xì)胞

        楊建榮,鐘敬濤,劉天奇,杜陽(yáng)春,韋所蘇,殷 舞,凌 冰,唐耘天,黃永塔,董小鋒

        我國(guó)肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的新發(fā)患者及死亡患者均占全球的50.00%左右[1]。HCC患者5年的總體生存率為14.1%,由于HCC早期無(wú)明顯癥狀,多數(shù)患者首診時(shí)已處于中晚期,失去了外科手術(shù)機(jī)會(huì),而手術(shù)患者術(shù)后5年的復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率亦高達(dá)50%~70%[2]。目前,盡管術(shù)后有分子靶向、免疫、化療等多種治療手段,但不同HCC患者因腫瘤亞型差異,對(duì)治療反應(yīng)不同,部分接受治療的患者甚至出現(xiàn)進(jìn)展加速現(xiàn)象[3]。因此,進(jìn)行更加精細(xì)化的分型,制定個(gè)體化的診療方案,是減少HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)鍵[3]。有研究[4]發(fā)現(xiàn),HCC中的內(nèi)皮細(xì)胞除了在形態(tài)學(xué)上構(gòu)成管狀血管給腫瘤輸送營(yíng)養(yǎng)和氧氣外,還可以將HCC細(xì)胞包繞成球形細(xì)胞團(tuán),形成血管包繞腫瘤細(xì)胞巢(vessels encapsulated tumor clusters,VETC)癌巢型HCC。VETC癌巢型HCC有其獨(dú)特的生物學(xué)特征,且生存預(yù)后更差[4]。本研究將對(duì)VETC癌巢型HCC的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)、術(shù)前超聲診斷標(biāo)準(zhǔn)、術(shù)中冰凍診斷標(biāo)準(zhǔn)及手術(shù)方式選擇進(jìn)行探討,現(xiàn)報(bào)告如下。

        1 資料與方法

        1.1資料來(lái)源 廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院肝膽胰脾外科、山東省腫瘤防治研究院[山東省腫瘤醫(yī)院/山東第一醫(yī)科大學(xué)(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)]肝膽外科2013-10~2018-10行手術(shù)切除且經(jīng)常規(guī)病理證實(shí)為HCC的164例患者,其中男130例,女34例,年齡32~72(51±6.7)歲,腫瘤分期T1/T2期101例,T3/T4期63例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)超聲造影檢查資料完整;(2)首次外科手術(shù)患者;(3)常規(guī)病理免疫組化指標(biāo)中包含CD34血管染色,資料完備。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)術(shù)前接受經(jīng)肝動(dòng)脈化療栓塞(transarterial chemoembolization,TACE)介入治療者;(2)術(shù)前接受射頻、微波治療者;(3)術(shù)前接受免疫及靶向治療者。

        1.2資料收集 通過(guò)醫(yī)院病歷系統(tǒng)收集患者的臨床資料,包括年齡、性別、超聲檢查、術(shù)中快速冰凍病理切片(HE染色切片)結(jié)果、術(shù)后常規(guī)病理檢查結(jié)果、手術(shù)記錄等。手術(shù)方式分為解剖性肝切除(包括標(biāo)準(zhǔn)的肝段切除、肝葉切除)和非解剖性肝切除兩種類(lèi)型。全部患者均隨訪(fǎng)至術(shù)后2年,記錄HCC復(fù)發(fā)情況。

        1.3超聲造影診斷標(biāo)準(zhǔn) 癌巢型HCC與非癌巢型HCC超聲造影判讀標(biāo)準(zhǔn)按照本課題組前期研究標(biāo)準(zhǔn)[4]:(1)VETC癌巢型HCC,超聲造影動(dòng)脈充盈期表現(xiàn)為腫瘤周邊的環(huán)狀高增強(qiáng),后呈裂隙狀、條索狀逐漸向中央填充,直至造影劑達(dá)到峰值;(2)非VETC癌巢型HCC,超聲造影動(dòng)脈充盈期表現(xiàn)為腫瘤周邊及內(nèi)部多個(gè)點(diǎn)狀造影劑的同時(shí)顯示,后呈大片狀、彌漫性快速充盈,造影劑達(dá)高峰后表現(xiàn)為更強(qiáng)的充盈相。超聲造影結(jié)果由超聲科2名副主任醫(yī)師判斷,遇到結(jié)果不一致時(shí)請(qǐng)第三名具有高級(jí)職稱(chēng)的超聲科醫(yī)師復(fù)核。所有參與研究的超聲科醫(yī)師對(duì)標(biāo)本的CD34血管染色結(jié)果及是否為VETC癌巢型HCC患者均不知情。

        1.4病理診斷標(biāo)準(zhǔn)

        1.4.1 根據(jù)CD34血管染色結(jié)果,VETC癌巢型HCC最終診斷按照本課題組前期研究標(biāo)準(zhǔn)[4]:(1)VETC癌巢型HCC,CD34血管染色典型表現(xiàn)為球狀血管內(nèi)皮細(xì)胞包繞的HCC細(xì)胞團(tuán),形成血管包繞的腫瘤細(xì)胞簇(VETC癌巢結(jié)構(gòu));(2)非癌巢型HCC,CD34血管染色表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞未包繞HCC細(xì)胞,僅形成條索狀的血管。

        1.4.2 根據(jù)術(shù)中快速冰凍病理切片(HE染色切片)結(jié)果,VETC癌巢型HCC預(yù)測(cè)診斷按照本課題組前期研究標(biāo)準(zhǔn)[4]:(1)VETC癌巢型HCC,單層扁平細(xì)胞將肝癌細(xì)胞包裹成球體,球體最大徑大小不一,球體內(nèi)由HCC細(xì)胞聚集而成,球體內(nèi)部無(wú)血管,球體之間的裂隙內(nèi)含紅細(xì)胞;(2)非VETC癌巢型HCC,肝癌細(xì)胞條索狀、梁狀、假腺樣排列,癌細(xì)胞周?chē)鸁o(wú)扁平細(xì)胞包繞。HE染色切片(冰凍切片)的判讀結(jié)果由病理科的2名副主任醫(yī)師作出,遇到結(jié)果不一致時(shí)請(qǐng)第三名具有高級(jí)職稱(chēng)的病理科醫(yī)師復(fù)核。所有參與研究的病理科醫(yī)師對(duì)標(biāo)本的CD34血管染色結(jié)果及是否為VETC癌巢型HCC患者均不知情。

        1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(百分率)[n(%)]表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。一致性分析采用Kappa檢驗(yàn),Kappa值>0.8表示一致性高,0.60

        2 結(jié)果

        2.1164例HCC患者術(shù)后常規(guī)病理檢查結(jié)果 164例HCC患者中,VETC癌巢型占40.24%(66/164),表現(xiàn)為球狀血管內(nèi)皮細(xì)胞包繞的HCC細(xì)胞團(tuán)(見(jiàn)圖1??)。非癌巢型占59.76%(98/164),表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞未包繞HCC細(xì)胞,而僅形成傳統(tǒng)的管狀血管(見(jiàn)圖1??)。

        ??VETC癌巢型HCC CD34染色;??非癌巢型HCC CD34染色。白箭頭示VETC癌巢;紅箭頭示VETC癌巢間血流間隙;黑箭頭示管狀血管

        2.2164例HCC患者術(shù)后標(biāo)本CD34血管免疫組化檢查結(jié)果 66例VETC癌巢型HCC患者中有30.30%(20/66)在癌旁組織中發(fā)現(xiàn)了癌巢(見(jiàn)圖2??)。98例非癌巢型HCC患者中僅10.20%(10/98)在癌旁組織中發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞(見(jiàn)圖2??)。VETC癌巢型HCC患者癌旁轉(zhuǎn)移率顯著高于非癌巢型HCC患者(χ2=10.659,P=0.001),提示癌巢型HCC更易發(fā)生癌旁及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

        ??VETC癌巢型HCC及癌旁組織CD34血管染色;??非癌巢型HCC及癌旁組織CD34血管染色。白箭頭示癌旁癌巢;紅色虛線(xiàn)示腫瘤邊界

        2.3164例HCC患者術(shù)后隨訪(fǎng)結(jié)果 經(jīng)2年隨訪(fǎng),VETC癌巢型HCC患者失訪(fǎng)2例,死于其他疾病2例,腫瘤相關(guān)性死亡2例,納入統(tǒng)計(jì)60例;非癌巢型HCC患者失訪(fǎng)6例,死于其他疾病3例,腫瘤相關(guān)性死亡5例,納入統(tǒng)計(jì)84例。VETC癌巢型HCC患者術(shù)后2年的復(fù)發(fā)率為53.33%(32/60),非癌巢型HCC患者術(shù)后2年的復(fù)發(fā)率為36.90%(31/84)。對(duì)于VETC癌巢型HCC患者,解剖性肝切除患者術(shù)后2年復(fù)發(fā)率顯著低于非解剖性肝切除患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

        表1 VETC癌巢型HCC患者不同手術(shù)方式術(shù)后2年復(fù)發(fā)情況比較[n(%)]

        2.4164例HCC患者術(shù)前超聲造影檢查與術(shù)后常規(guī)病理檢查結(jié)果比較 以術(shù)后常規(guī)病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),術(shù)前超聲造影診斷VETC癌巢型HCC的靈敏度為81.82%,特異度為91.84%,準(zhǔn)確率為87.80%。Kappa一致性分析結(jié)果顯示,術(shù)前超聲造影檢查與術(shù)后常規(guī)病理檢查結(jié)果一致性較高(Kappa=0.744,P=0.000)。見(jiàn)表2。

        表2 164例HCC患者術(shù)前超聲造影檢查與術(shù)后常規(guī)病理檢查結(jié)果比較(n)

        2.5164例HCC患者術(shù)中快速冰凍病理切片與術(shù)后常規(guī)病理檢查結(jié)果比較 VETC癌巢型HCC術(shù)中冰凍病理表現(xiàn)為扁平細(xì)胞包繞的肝癌細(xì)胞團(tuán);非癌巢性HCC無(wú)扁平細(xì)胞包繞的肝癌細(xì)胞團(tuán)(見(jiàn)圖3)。以術(shù)后常規(guī)病理檢查為金標(biāo)準(zhǔn),術(shù)中快速冰凍病理切片診斷VETC癌巢型HCC的靈敏度為93.94%,特異度為91.84%,準(zhǔn)確率為92.68%。Kappa一致性分析結(jié)果顯示,術(shù)中快速冰凍病理切片結(jié)果與術(shù)后常規(guī)病理結(jié)果一致性高(Kappa=0.849,P=0.000)。見(jiàn)表3。

        ??VETC癌巢型HCC術(shù)中快速冰凍切片;??非癌巢型HCC術(shù)中快速冰凍切片。紅箭頭示扁平細(xì)胞;白箭頭示HCC細(xì)胞

        表3 164例HCC患者術(shù)中快速冰凍病理切片與術(shù)后常規(guī)病理檢查結(jié)果比較(n)

        3 討論

        3.1本研究顯示,術(shù)前超聲造影檢查和術(shù)中快速冰凍病理切片診斷VETC癌巢型HCC具有較高的靈敏度和特異度。超聲造影是繼實(shí)時(shí)二維超聲、多普勒成像后超聲領(lǐng)域的又一重大技術(shù)革命,隨著超聲造影劑的不斷更新,其已經(jīng)成為肝癌患者的重要影像學(xué)檢查,與CT、MRI比較,具有操作方便、無(wú)輻射、費(fèi)用低及可多次重復(fù)的優(yōu)點(diǎn)[5,6]。本研究中超聲造影診斷VETC癌巢型HCC的靈敏度為81.82%,特異度為91.84%,結(jié)果提示肝臟超聲造影在肝癌精準(zhǔn)分型中具有更加重要的意義。術(shù)中快速冰凍病理切片可在手術(shù)期間快速出片,是術(shù)中判斷肝腫瘤良惡性的病理指標(biāo),課題組制定的VETC癌巢型肝癌冰凍切片診斷標(biāo)準(zhǔn)判斷VETC癌巢型HCC,其靈敏度為93.94%,特異度為91.84%,可指導(dǎo)手術(shù)方式的選擇,是對(duì)HE冰凍切片單純?cè)\斷良惡性結(jié)果的進(jìn)一步挖掘,達(dá)到更大限度為臨床服務(wù)的目的[7]。

        3.2VETC癌巢型HCC分型是以?xún)?nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)為基礎(chǔ)的,既往認(rèn)為內(nèi)皮細(xì)胞的主要功能為形成血管,為腫瘤提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣[8]。而深入的研究[9,10]認(rèn)為內(nèi)皮細(xì)胞可參與腫瘤多種功能的形成,包括通過(guò)自身收縮促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移,通過(guò)免疫抑制促進(jìn)轉(zhuǎn)移后腫瘤細(xì)胞的存活。內(nèi)皮干細(xì)胞通過(guò)快速形成新生血管促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移等[9,11],而在VETC癌巢型HCC中,內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)形成癌巢促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移,進(jìn)一步豐富了內(nèi)皮細(xì)胞的功能[4]。因有內(nèi)皮細(xì)胞的包裹和保護(hù),VETC癌巢型HCC更易發(fā)生癌旁轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

        3.3HCC術(shù)后的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移嚴(yán)重影響了患者的預(yù)后,定期復(fù)查,對(duì)復(fù)發(fā)灶實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早治療、早處理,是延長(zhǎng)患者生存期及改善生活質(zhì)量的關(guān)鍵[12]。VETC癌巢型HCC患者術(shù)后2年的復(fù)發(fā)率高達(dá)53.33%,而非癌巢型HCC患者術(shù)后2年的復(fù)發(fā)率為36.90%,提示癌巢型HCC患者術(shù)后需縮短復(fù)查間隔,尤其是術(shù)后2年內(nèi),建議每月復(fù)查超聲,如有必要可追加CT和MRI檢查[13,14]。

        3.4本研究發(fā)現(xiàn)解剖性肝切除可有效降低VETC癌巢型HCC患者術(shù)后2年的復(fù)發(fā)率。術(shù)前或術(shù)中診斷患者是否為癌巢型HCC并行解剖性肝切除是降低此類(lèi)患者復(fù)發(fā)的關(guān)鍵[3,14,15]。VETC癌巢型肝癌所在肝段的門(mén)脈小血管中可見(jiàn)大量由內(nèi)皮細(xì)胞包裹的、整團(tuán)的轉(zhuǎn)移癌巢,且癌巢以團(tuán)巢的形式侵入血管,其轉(zhuǎn)移效率明顯高于以單細(xì)胞轉(zhuǎn)移為主的非癌巢型肝癌,這提示VETC癌巢型HCC行解剖性肝切除的必要性[16]。本研究制定的VETC癌巢型HCC術(shù)前超聲造影、術(shù)中冰凍診斷標(biāo)準(zhǔn),可有效對(duì)癌巢型HCC進(jìn)行診斷。VETC癌巢型HCC對(duì)索拉菲尼、侖伐替尼等分子靶向藥物敏感,對(duì)于不能手術(shù)的中晚期HCC患者,如超聲造影提示為VETC癌巢型HCC,提示其為靶向藥物的敏感人群,可考慮行藥物靶向治療,實(shí)現(xiàn)了對(duì)HCC人群的提前篩選,避免醫(yī)療資源的浪費(fèi),減輕患者負(fù)擔(dān),實(shí)現(xiàn)個(gè)體化診療[3,17]。

        綜上所述,依據(jù)術(shù)前超聲造影、術(shù)中快速冰凍病理切片有助于VETC癌巢型HCC診斷,實(shí)現(xiàn)更加精細(xì)的分型,有利于個(gè)體化診療方案的選擇,改善患者預(yù)后。

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