侯蒙

B細(xì)胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)常見的一種類型，近年來該病患病率不斷增加，且具有侵襲性生物學(xué)特征，嚴(yán)重危害患者生命安全，因此早期準(zhǔn)確診斷疾病具有重要意義[1-2]。近年來研究發(fā)現(xiàn)免疫組化法結(jié)合淋巴結(jié)活檢在診斷疾病上取得良好價(jià)值，且隨著流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用，不僅使免疫學(xué)檢測實(shí)現(xiàn)了定量分析，更是擴(kuò)展了研究細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)各種功能性抗原的應(yīng)用空間。Bcl-2、CyclinD1是B細(xì)胞淋巴瘤中2種重要蛋白[3-4]。鑒于此，本資料將探討流式細(xì)胞術(shù)檢測Bcl-2、CyclinD1在B細(xì)胞淋巴瘤中的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2016年5月—2018年9月收治的B細(xì)胞淋巴瘤患者80例為試驗(yàn)組，其中男46例，女34例；年齡26～70(47.26±3.55)歲；惡性程度分類：惰性38例、侵襲性26例、高侵襲性16例。另外選取同期健康體檢的80例健康者作為對照組，其中男50例，女30例；年齡25～70(45.68±3.62)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：試驗(yàn)組患者均經(jīng)免疫組化檢查或淋巴結(jié)活檢確診為B細(xì)胞淋巴瘤；無血液系統(tǒng)疾?。凰袇⑴c人員均自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤疾??；伴有全身嚴(yán)重感染、妊娠哺乳期女性。2組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可對比性。本資料經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 取2組入選者清晨空腹肘靜脈血3 mL，肝素抗凝，4 h內(nèi)處理標(biāo)本，外科手術(shù)剝離淋巴結(jié)，送病理檢查。(1)淋巴結(jié)組織細(xì)胞懸液制備：使用勻漿器研磨勻漿淋巴結(jié)組織，經(jīng)尼龍網(wǎng)過濾制成細(xì)胞懸液，采用PBS低速離心5 min，洗滌2次，細(xì)胞懸液備用。(2)單個核細(xì)胞制備：將生理鹽水與標(biāo)本中全血按1∶1比例混勻，緩慢轉(zhuǎn)移到淋巴細(xì)胞分離液上，2 000 r/min離心15 min，取淋巴細(xì)胞層和淋巴細(xì)胞分離液層，加入PBS，洗滌離心，細(xì)胞沉淀為單個核細(xì)胞；(3)流式細(xì)胞術(shù)：Bcl-2位于細(xì)胞膜內(nèi)，CyclinD1位于細(xì)胞核內(nèi)，標(biāo)記細(xì)胞管，加入抗體混勻后，避光孵育、離心洗滌，于熒光顯微鏡下明確抗體標(biāo)記，隨后采用FC500 型流式細(xì)胞儀和分析軟件系統(tǒng)，采用四色直接免疫熒光法標(biāo)記細(xì)胞抗原，采用多參數(shù)流式術(shù)測定Bcl-2和CyclinD1水平。

1.3 觀察指標(biāo) 比較2組及B細(xì)胞淋巴瘤不同惡性程度CyclinD1、Bcl-2水平，并分析CyclinD1、Bcl-2水平與B細(xì)胞淋巴瘤的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 2組患者CyclinD1、Bcl-2水平比較 試驗(yàn)組CyclinD1、Bcl-2水平高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 不同惡性程度B細(xì)胞淋巴瘤患者CyclinD1、Bcl-2水平比較 不同惡性程度中，高侵襲性CyclinD1、Bcl-2水平最高，其次是侵襲性，惰性最低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 2組患者CyclinD1及Bcl-2水平比較

表2 不同惡性程度B細(xì)胞淋巴瘤患者CyclinD1及Bcl-2水平比較

2.3 相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析顯示，CyclinD1、Bcl-2與B淋巴細(xì)胞淋巴瘤呈正相關(guān)(r>0，P<0.05)。見表3。

表3 CyclinD1、Bcl-2與B淋巴細(xì)胞淋巴瘤的相關(guān)性

3 討論

非霍奇金淋巴瘤是臨床常見的一種惡性腫瘤，可分為T/NK細(xì)胞型和B細(xì)胞型2類，其中B細(xì)胞淋巴瘤是最為常見的一種，占70%左右，臨床具有較高患病率、致死率，成為危害患者生命安全重要病因之一。依據(jù)其病變程度可分為惰性、侵襲性和高度侵襲性淋巴瘤3大類，而有研究指出，不同病變程度的治療方案、原則及療程不同，因此，臨床早期準(zhǔn)確診斷疾病尤為重要[5]。

近年來隨著臨床醫(yī)學(xué)不斷的探尋，發(fā)現(xiàn)免疫組化法結(jié)合淋巴結(jié)活檢在B細(xì)胞淋巴瘤診斷中獲取較高應(yīng)用價(jià)值，Cyclin D是一調(diào)控G1/S期限制點(diǎn)的蛋白家族，主要由染色體11q13上的CCND1基因編碼組成，在細(xì)胞增殖分化中起到重要調(diào)控作用，臨床實(shí)驗(yàn)表明，Cyclin D1可作用于細(xì)胞周期G1期限制點(diǎn)，高水平的Cyclin D1可縮短G1期時間，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展。且有研究證實(shí)，Cyclin D是一種與腫瘤有直接關(guān)系的細(xì)胞周期蛋白，在肝癌、食管癌、乳腺癌、B細(xì)胞淋巴瘤等多種腫瘤中均有基因擴(kuò)增及過度表達(dá)[6-7]，故臨床可將其作為診斷鑒別B細(xì)胞淋巴瘤一種重要指標(biāo)。Bcl-2蛋白是一種原癌基因，可分為兩大類，一類是抗凋亡蛋白，一類是促凋亡蛋白，Bcl-2主要作用位點(diǎn)在線粒體膜上。臨床研究發(fā)現(xiàn)，Bcl-2基因本身無增殖作用，也無促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化作用，但可以在神經(jīng)營養(yǎng)因子存在或無生長因子時延長細(xì)胞存活時間，從而增加病毒感染和細(xì)胞染色體畸變機(jī)會，導(dǎo)致腫瘤形成和細(xì)胞惡變。且經(jīng)臨床研究證實(shí)，在多種惡性腫瘤中均有Bcl-2表達(dá)升高[8]，故臨床可將其視為診斷B細(xì)胞淋巴瘤一項(xiàng)敏感指標(biāo)。近年來隨著流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用，能夠?qū)崿F(xiàn)傳統(tǒng)免疫學(xué)的定量分析，同時可為細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)各種功能抗原擴(kuò)張無限應(yīng)用空間。本資料結(jié)果顯示，試驗(yàn)組CyclinD1、Bcl-2水平均較對照組高，不同惡性程度中，高侵襲性CyclinD1、Bcl-2水平最高，其次是侵襲性，惰性最低，且經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，CyclinD1、Bcl-2與B淋巴細(xì)胞淋巴瘤惡性程度呈正相關(guān)，由此可見，流式細(xì)胞術(shù)檢測CyclinD1、Bcl-2可為臨床診斷鑒別B細(xì)胞淋巴瘤提供重要依據(jù)。

綜上所述，流式細(xì)胞術(shù)檢測CyclinD1、Bcl-2在診斷B細(xì)胞淋巴瘤中具有重要價(jià)值，其水平與病變惡性程度呈正相關(guān)。