王萌

(駐馬店市中心醫(yī)院 血液內(nèi)科，河南 駐馬店 463000)

急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)為急性髓細(xì)胞白血病的特殊類型，是造血系統(tǒng)惡性疾病。流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示急性APL 發(fā)病率占髓細(xì)胞白血病的10%，多發(fā)于中青年群體，該病進(jìn)展迅速且早期死亡率高，所引發(fā)的嚴(yán)重出血及彌散性血管內(nèi)凝血是導(dǎo)致患者死亡率的主要原因[1]。加強(qiáng)對(duì)該病的快速診斷，是降低早期死亡率及改善患者預(yù)后的關(guān)鍵。同其他類型的髓細(xì)胞白血病相比，急性APL 具有獨(dú)特的免疫表型特點(diǎn)，借助于流式細(xì)胞術(shù)為基礎(chǔ)的免疫表型分析技術(shù)可準(zhǔn)確反映急性APL 細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，但并不能進(jìn)行急性APL 的準(zhǔn)確分型，多需借助分子生物學(xué)及遺傳學(xué)結(jié)果進(jìn)一步明確診斷[2]。本文就此探討免疫表型分析及分子遺傳學(xué)在急性APL 診斷中的應(yīng)用價(jià)值，總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取駐馬店市中心醫(yī)院2015年7月至2019年10月收治的急性APL 患者61 例，依照細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型劃分為M3a 型( 粗顆粒性)31 例，男17 例，女14 例，年齡19 ～42 歲，平均年齡(34.28±2.51)歲；M3b 型(細(xì)顆粒型)30 例，男16 例，女14 例，年齡20 ～43 歲，平均年齡(34.35±2.54) 歲；兩中亞型的急性APL 患者性別、年齡等一般資料比較無顯著差異(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；經(jīng)免疫表型分析及分子遺傳學(xué)診斷為急性APL；患者及家屬均知情并同意加入本次研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：出診時(shí)伴有顱內(nèi)出血或昏迷、抽出、顱神經(jīng)癱患者；合并其它惡性腫瘤疾病者；長(zhǎng)QT 綜合征病史者。

1.2 方法

1.2.1 免疫表型分析

無菌抽取新鮮骨髓，肝素抗凝處理，所用儀器為美國Coulter 公司生產(chǎn)的Epics XL 型流式細(xì)胞分析儀，免疫分析試劑盒購置于Immunotech 公司，進(jìn)行CD45、CD33、CD9、CD13、CD117、CD11、CD15 單克隆抗體檢測(cè)，細(xì)胞膜群表面抗原≥20%、胞內(nèi)抗原＞10%則判定為陽性。

1.2.2 分子遺傳學(xué)檢測(cè)

取肝素抗凝骨髓加入PRMI1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后，加入20% 小牛血清，收獲前加入秋水酰胺最終濃度0.04 μg/mL 終止分裂。收獲細(xì)胞后存儲(chǔ)于-20℃低溫保存，于37℃、50% 飽和濕度下滴片，借助熒光原位雜交技術(shù)分析測(cè)定。

1.3 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)61 例不同亞型的急性APL 患者Hb、RBC、BPC、WBC 血常規(guī)檢查結(jié)果；記錄61 例患者CD45、CD33、CD9、CD13、CD117、CD11、CD15 單克隆抗體陽性檢測(cè)結(jié)果及染色體核型異常檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 23.0 處理，±s表示變量數(shù)據(jù)，t檢驗(yàn)；%表示無序分類數(shù)據(jù)，χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種亞型的急性APL 患者血常規(guī)檢查結(jié)果比較

61 例急性APL 患者依照細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型劃分為M3a型( 粗顆粒性)31 例，M3b 型( 細(xì)顆粒型)30 例，兩種亞型患者Hb、RBC、BPC、WBC 檢查結(jié)果對(duì)比，差異顯著(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組亞型的急性APL患者血常規(guī)檢查結(jié)果比較(s x± )

2.2 61 例急性APL 患者免疫表型表達(dá)情況

61 例急性APL 患者免疫分型表達(dá)中，以CD45 抗原陽性檢出率最高，達(dá)91.80%(56/61)，其次分別為CD33、CD9、CD13、CD117、CD11、CD15， 其 中CD117、CD11、CD15，抗原陽性檢出率均不足50%。見表2。

表2 61例急性APL患者免疫表型表達(dá)情況

2.3 61 例患者分子遺傳學(xué)診斷結(jié)果

對(duì)61 例患者均進(jìn)行FISH 檢測(cè)，結(jié)果顯示54 例急性APL 患者特征性染色體核型異常，核型完全正常者7例，異常檢出率88.52%(54/61)。54 例異常核型中，41例表現(xiàn)為單純型t(15；17)(q22；q21)100% 易位，13例表現(xiàn)復(fù)雜型染色體核型異常。見表3。

表3 61例患者分子遺傳學(xué)診斷結(jié)果

3 討 論

急性APL 的發(fā)生同造血干細(xì)胞異常增殖有關(guān)，白細(xì)胞系造血干細(xì)胞突變后導(dǎo)致增殖及分化失控，異常原始細(xì)胞及幼稚細(xì)胞于造血組織中大量積累并釋放，浸潤(rùn)相關(guān)組織及器官后導(dǎo)致造血功能抑制[3]。急性APL 是髓細(xì)胞白血病的特殊亞型，特征表現(xiàn)以骨髓中多顆粒早幼粒細(xì)胞為主，亦是兇險(xiǎn)性最高的白血病亞型?；颊甙Y狀表現(xiàn)以出血、發(fā)熱、關(guān)節(jié)疼痛及感染為主，且多數(shù)患者伴有肝脾器官浸潤(rùn)[4]。

臨床研究表明免疫分型同急性APL 患者療效及預(yù)后存在一定關(guān)聯(lián)性，基于此可借助免疫表型分析進(jìn)行急性APL 的快速診斷[5]。借助于流式細(xì)胞測(cè)定法開展急性APL 診斷具有操作簡(jiǎn)單、所需標(biāo)本數(shù)量少的優(yōu)點(diǎn)，可快速獲取檢測(cè)結(jié)果，客觀提示髓細(xì)胞白血病的起源及分化發(fā)育情況，且對(duì)抗原表達(dá)紊亂情況的檢測(cè)，對(duì)急性APL患者的療效及預(yù)后判定亦具有同樣價(jià)值[6]。

分子遺傳學(xué)是對(duì)初診急性APL 患者進(jìn)一步明確診斷的重要方法，借助于染色體核型檢測(cè)可對(duì)傳統(tǒng)核型分析進(jìn)行重要補(bǔ)充[7]?；趯?duì)染色體核型異常情況的檢測(cè)，雖可對(duì)初診患者進(jìn)一步明確診斷提供分子遺傳學(xué)診斷依據(jù)參考，特異性的染色體t(15；17)(q22；q21) 易位，是目前臨床用于急性APL 細(xì)胞遺傳學(xué)診斷的標(biāo)志，但受到細(xì)胞培養(yǎng)、染色體制備等多因素影響，僅約70%～90%的APL 患者可檢查出t(15；17)(q22；q21) 易位[8]。鑒于其可能發(fā)生的染色體移位斷裂點(diǎn)變異情況，可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽性，故本次在分子遺傳學(xué)檢測(cè)中借助FISH 檢測(cè)提升檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。本次對(duì)61 例急性APL患者的分子遺傳學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，54 例(88.52%)患者表現(xiàn)為特征性染色體核型異常，41 例為t(15；17)(q22；q21)單純型易位，其余患者為復(fù)雜型染色體核型異常。

綜上所述，免疫表型分析、分子遺傳學(xué)檢測(cè)在急性APL 診斷中均具重要價(jià)值，免疫表型分析可作為急性APL患者的快速診斷方法，條件允許下進(jìn)行分子遺傳學(xué)檢測(cè)并借助染色體核型分析結(jié)果可進(jìn)一步明確診斷結(jié)果，提升急性APL 患者早期診斷準(zhǔn)確率，便于指導(dǎo)開展臨床治療工作。