段文超 馬禹昕 王亞玲 孟祥慧

1牡丹江醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系 157000；2牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院皮膚科 157000

通信作者：孟祥慧，Email：xianghui777@163.com

皮膚惡性黑色素瘤是由表皮基底部黑色素細(xì)胞惡變形成，是一種具有高侵襲性的高度惡性腫瘤，因其外形與黑色素痣相似，早期不易被發(fā)現(xiàn)，隨著病情進(jìn)展至中晚期，疾病易發(fā)生轉(zhuǎn)移，增加治療難度，復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差［1-2］。炎性反應(yīng)和腫瘤血管生成在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、侵襲中具有重要作用。白介素-17（interleukin-17，IL-17）具有強(qiáng)大的促炎癥反應(yīng)功能，能夠介導(dǎo)維持炎癥反應(yīng)，參與腫瘤微環(huán)境的構(gòu)成，與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展關(guān)系密切［3］。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是內(nèi)皮細(xì)胞特異性分裂原和血管滲透因子，貫穿于血管生成的整個(gè)過程，其能夠作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，經(jīng)結(jié)合血管內(nèi)皮生長因子受體促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖，在對重實(shí)體瘤中呈高表達(dá)，并與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移、血管密度、臨床預(yù)后關(guān)系密切［4-5］。本研究分析皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17、VEGF 表達(dá)及與腫瘤組織微血管密度（microvessel density，MVD）的相關(guān)性，為臨床治療提供新的思路，信息如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇于2017 年1 月至2020 年5 月擬在本院行手術(shù)治療的90 例皮膚惡性黑色素瘤患者為觀察組，男56 例，女34 例；年齡范圍41～68 歲，年齡（58.65±4.26）歲；TNM 分期：Ⅳa 期64 例，Ⅳb 期26 例。選擇同期就診本院的90 例普通色素痣患者為對照組，男53 例，女37 例；年齡范圍40～70 歲，年齡（57.48±4.15）歲。兩組一般資料相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) （1）納入標(biāo)準(zhǔn)：皮膚惡性黑色素瘤符合《皮膚性病學(xué)》［6］中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理檢查確診；對照組僅為單純普通色素痣；入組前未接受激光、藥物、放射等治療；自愿加入本次研究，簽署知情同意書。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：肝腎等重要臟器嚴(yán)重不全；自身免疫性疾??；精神疾患；血液系統(tǒng)疾病；凝血功能異常。

1.3 方法 （1）IL-17、VEGF 檢測。分別采集兩組患者空腹靜脈血5 ml，離心10 min，3 000 r/min，獲取上清液，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）測定血清IL-17、VEGF，儀器為680 型酶標(biāo)儀（美國伯樂公司），試劑盒購自上海廣銳生物科技有限公司。（2）MVD。觀察組術(shù)中取腫瘤活檢組織和周圍正常組織，福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度為4 μm，HE 染色，使用免疫組化法檢測，上海長島生物技術(shù)有限公司的CIY 34 單克隆抗體染色，以棕黃色或棕色染色為陽性細(xì)胞。用Weidner 法計(jì)數(shù)微血管密度，即40 倍低倍鏡下觀察腫瘤組織邊緣間質(zhì)血管密度最大區(qū)域，200倍高倍鏡下計(jì)數(shù)4個(gè)視野，取最大值即為MVD。

1.4 觀察指標(biāo) （1）對比兩組血清IL-17、VEGF 表達(dá)差異。（2）分析觀察組中血清IL-17、VEGF 表達(dá)與MVD 的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0 軟件分析數(shù)據(jù)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示計(jì)量資料，用t檢驗(yàn)；以n（%）表示計(jì)數(shù)資料，用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Pearson 分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清IL-17、VEGF 比較 觀察組IL-17、VEGF 水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.001），見表1。

表1 兩組血清IL-17、VEGF比較（ ± s，pg/ml）

表1 兩組血清IL-17、VEGF比較（ ± s，pg/ml）

組別對照組觀察組t值P值例數(shù)90 90 IL-17 17.40±5.58 118.75±25.96 36.210＜0.001 VEGF 168.21±30.69 470.37±37.95 58.733＜0.001

2.2 觀察組中血清IL-17、VEGF 表達(dá)與MVD 的相關(guān)性 皮膚惡性黑色素瘤組織中MVD 計(jì)數(shù)為（36.72±6.45），高于正常組織的（2.88±0.57），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝49.580，P＜0.001）。皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17、VEGF表達(dá)與MVD計(jì)數(shù)呈正相關(guān)（均P＜0.05），見表2。

表2 觀察組中血清IL-17、VEGF表達(dá)與MVD的相關(guān)性

3 討論

皮膚惡性黑色素瘤起源于是神經(jīng)嵴黑色素細(xì)胞，早期在原發(fā)灶周圍呈放射狀生長，中晚期與皮層方向垂直呈浸潤性生長，一旦侵犯周圍淋巴管或血管，易誘發(fā)淋巴道、血道轉(zhuǎn)移［7］。皮膚惡性黑色素瘤早期主要臨床表現(xiàn)為痣發(fā)生惡性變化或色素斑點(diǎn)，如短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)破潰、增大、顏色改變等，發(fā)生率約占惡性黑色素瘤的90%，具有惡性程度高、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高、預(yù)后差等特點(diǎn)，死亡率和惡性程度位居皮膚惡性腫瘤首位［8-9］。腫瘤血管生成是腫瘤發(fā)生、進(jìn)展的重要環(huán)節(jié)，其能經(jīng)誘發(fā)宿主微血管生成，建立血管出芽方式和擴(kuò)大腫瘤自身微血管網(wǎng)，為腫瘤生長提供氧氣、營養(yǎng)。

VEGF是由腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等合成的多功能糖蛋白，能夠作用于血管內(nèi)皮表面的VEGF 受體，使其發(fā)生酪氨酸殘基磷酸化、二聚體化、抗凋亡、激活與促有絲分裂等發(fā)揮作用［10-11］。VEGF 能刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞移行和增殖，使血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂增加，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移，增加血管通透性和重塑細(xì)胞外機(jī)制，促進(jìn)病理性血管生成［12-13］。本研究中，觀察組VEGF 水平高于對照組，提示VEGF 參與皮膚惡性黑色素瘤發(fā)生。VEGF 能通過以下幾點(diǎn)作用機(jī)制發(fā)揮促進(jìn)腫瘤血管生成作用：①誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞分泌多種蛋白酶及其組織因子，對細(xì)胞外基質(zhì)降解，介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，促進(jìn)新生血管形成；②內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)整合素-1 及其配體，對內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)移、浸潤起到介導(dǎo)作用。VEGF 能夠經(jīng)與其酪氨酸激酶VEGFR-2（Flk-1/KDR）和VEGFR-1（Flt-1）受體相互作用，增加微血管滲透性，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、游走，與腫瘤生長、轉(zhuǎn)移或浸潤關(guān)系密切。

IL-17屬于促炎因子，具有較強(qiáng)的促血管生成因子和誘導(dǎo)促炎因子能力，能通過作用于成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)血管生成發(fā)揮促進(jìn)腫瘤生長作用。本研究中，觀察組IL-17 水平高于對照組，提示皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17呈高表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17、VEGF 表達(dá)與MVD 計(jì)數(shù)呈正相關(guān)，提示IL-17、VEGF在腫瘤血管生成中起到重要作用。IL-17能促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞、纖維細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分泌PGE2、VEGF 等促血管生成因子和高表達(dá)細(xì)胞間粘附分子，經(jīng)IL-17-VEGF 通路，刺激轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）-β 等促血管生成因子產(chǎn)生，促進(jìn)腫瘤血管生成［14-15］。IL-17 能通過結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面受體，上調(diào)VEGF 表達(dá)，誘發(fā)炎性因子表達(dá)，使腫瘤炎性反應(yīng)進(jìn)一步加重，或促進(jìn)腫瘤發(fā)生、進(jìn)展。

綜上所述，皮膚惡性黑色素瘤血清IL-17、VEGF呈高表達(dá)，水平高低與MVD呈正相關(guān)，參與腫瘤血管生成。

利益沖突：作者已申明文章無相關(guān)利益沖突。