陳彬，管彬彬，石敏，蔣林惠，何薛純，陳煜

南通市食品藥品監(jiān)督檢驗中心（南通 226006）

近年來，由于有些農(nóng)戶缺乏合理的用藥知識，且受經(jīng)濟利益的驅(qū)動，存在獸藥亂用濫用以及不遵守休藥期等現(xiàn)象，導(dǎo)致動物農(nóng)產(chǎn)品中獸藥大量殘留；這不僅對消費者的健康產(chǎn)生潛在的巨大危害，動物的排泄物釋放入環(huán)境后對土壤、水體和大氣等生態(tài)環(huán)境也會造成污染，此外，因獸藥殘留引起的食品安全問題也會制約中國農(nóng)產(chǎn)品的出口貿(mào)易[1-2]。國內(nèi)外食用農(nóng)產(chǎn)品的獸藥殘留檢測方法主要有酶聯(lián)免疫法、分子印記技術(shù)、生物傳感器法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和夜相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等[3-8]，其中酶聯(lián)免疫法在檢測過程中存在藥物交叉反應(yīng)，適用范圍窄；分子印跡技術(shù)專一性過強，因此無法同時檢測多種藥物殘留；生物傳感器法成本高，且穩(wěn)定性需要進一步提高；液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)可以集高效分離和結(jié)構(gòu)鑒定于一體，是獸藥殘留檢測中最主要的確證分析手段。

中國獸藥殘留檢測方法存在的不足主要有對于非檢測項目藥物殘留篩查能力不足、檢測范圍窄、現(xiàn)有農(nóng)藥、獸藥殘留檢測方法多數(shù)僅能對規(guī)定的檢測藥物種類進行測定、無法對外源未知的農(nóng)藥、獸藥殘留進行篩查檢測、缺乏篩查能力等，使食品安全監(jiān)控存在隱患；對同一樣品的不同種類的農(nóng)藥、獸藥殘留檢測項目，需采用不同的前處理及檢測方法，難以體現(xiàn)產(chǎn)品整體特征，且費時費力，增加了檢測成本；傳統(tǒng)檢測方法提取凈化過程繁瑣、成本高，而且耗時費力，難以滿足大批量樣品測定的需求。因此，試驗開展基于QuEChERS與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的食用農(nóng)產(chǎn)品獸藥多殘留檢測技術(shù)研究，以期建立一套快速、準確、覆蓋面廣的食用農(nóng)產(chǎn)品中獸藥殘留的篩查方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

標(biāo)準品：強力霉素（純度99.1%）、土霉素（純度96.02%）、金霉素（純度99.5%）、四環(huán)素（純度94.23%）、克倫特羅（純度99.34%）、沙丁胺醇（純度99.92%）、萊克多巴胺（純度95.01%）、特布他林（純度96.70%）、氯霉素（純度99.24%）、氟苯尼考（純度99.90%）、甲砜霉素（純度99.43%）、孔雀石綠（純度91.0%）、隱性孔雀石綠（純度98.7%）、地西泮、甲硝唑（純度99.80%）、地美硝唑（純度99.64%）、洛硝噠唑（純度99.10%），羥基甲硝唑（純度99.4%）、羥甲基甲硝咪唑（純度99.5%）、地塞米松（純度99.18%）、恩諾沙星（純度99.9%）、環(huán)丙沙星（純度92.31%）、洛美沙星（純度99.42%）、培氟沙星（純度92.19%）、氧氟沙星（純度99.31%）、諾氟沙星（純度97.29%）、沙拉沙星（純度99.7%）、林可霉素（99.6%）、氯丙嗪（純度98.51%）、替米考星（純度80.71%）、尼卡巴嗪（純度98.79%）、五氯酚酸鈉（100 μg/mL，甲醇）、甲氧芐啶（純度99.9%）、磺胺嘧啶（純度99.7%）、磺胺甲基嘧啶（純度99.6%）、磺胺甲惡唑（純度99.7%）、磺胺二甲嘧啶（純度99.5%）、磺胺鄰二甲氧嘧啶（純度99.0%）、磺胺氯噠嗪（純度99.6%）、磺胺間二甲氧嘧啶（純度97.0%）、磺胺地索辛（純度99.4%）、磺胺喹沙啉，標(biāo)準品購自于德國Dr. Ehrenstorfer公司、上海安譜實驗科技股份有限公司、壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準物質(zhì)中心。

豬肉樣品（南通市市售）。

乙腈（色譜純，德國Merck公司）；甲醇（色譜純，德國Merck公司）；甲酸（分析純，阿拉丁試劑上海有限公司）；緩沖鹽包SBEQ-CA8802-B、SBEQ-CA8803-25（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）；超純水（Milli-Q Element超純水系統(tǒng)制備）。

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（Vanqusih-F+TSQ ALTIS，賽默飛世爾科技）；電子天平（BSA224S，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；氮吹濃縮儀（Xcelvap，美國Horizon）；離心機（MIKRO 220R，德國Hettich）；多管旋渦混合儀（VM-2500，廣東安勝儀器有限公司）。

1.2 標(biāo)準溶液的配制

分別稱取適量標(biāo)準品，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，分別得到母液質(zhì)量濃度約1 000 μg/mL的四環(huán)素類、地塞米松、喹諾酮類單標(biāo)標(biāo)準溶液和100 μg/mL的β-受體激動劑類、氯霉素類、孔雀石綠、地西泮、硝基咪唑類、林可霉素、氯丙嗪、替米考星、尼卡巴嗪和磺胺類單標(biāo)標(biāo)準溶液；用移液槍分別移取適量獸殘單標(biāo)母液，用甲醇水（1+1）溶解，制成獸殘混標(biāo)工作溶液，其中四環(huán)素類質(zhì)量濃度10 μg/mL，β-受體激動劑類、硝基咪唑類、喹諾酮類、磺胺類質(zhì)量濃度1 μg/mL，尼卡巴嗪質(zhì)量濃度0.4 μg/mL，其余質(zhì)量濃度0.2 μg/mL。

1.3 樣品前處理

取適量樣品，充分均勻，準確稱取2 g（精確至0.000 1 g）樣品于50 mL塑料離心管中，加入15 mL乙腈溶液，加入緩沖鹽包SBEQ-CA8802-B，渦旋混合5 min，超聲波提取10 min，以6 000 r/min離心5 min，吸取上清液至需要的凈化管，重復(fù)提取2次，合并2次提取液。上述提取步驟中的2次提取液按先后順序依次加入到凈化管中，旋渦混合5 min，以6 000 r/min離心5 min。取出凈化管中所有上清液，氮吹至近干。加入1 mL乙腈-水溶液（1∶1）溶解，渦旋混合1 min，過0.22 μm濾膜，供液相色譜-質(zhì)譜測定。

1.4 分析條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱，RP-C18，150 mm×2.1 mm×2.6 μm；流動相：A，水-0.1%甲酸；B，乙腈-0.1%甲酸；梯度洗脫如表1所示；柱溫30 ℃；流速0.3 mL/min；進樣體積5 μL。

表1 梯度洗脫

1.4.2 質(zhì)譜條件

噴霧電壓3 500 V（ESI+），2 500（ESI-）；鞘氣流量0.175 L/s；輔助氣流量0.025 L/s；吹掃擋錐氣流量0.005 L/s；蒸發(fā)溫度450 ℃；離子傳輸管溫度200℃；掃描循環(huán)時間1.2 s；碰撞氣壓0.2 Pa。

2 結(jié)果與分析

2.1 定性測定

參考相關(guān)標(biāo)準和文獻并結(jié)合儀器的實際情況，氯霉素類、尼卡巴嗪和五氯酚酸鈉采用負離子模式，其他均為正離子模式，利用TSQ TUNE軟件對定量離子、定性離子、透鏡電壓、碰撞能量進行優(yōu)化，42種獸藥的質(zhì)譜分析優(yōu)化參數(shù)如表1所示，42種獸殘混合標(biāo)準溶液的特征離子色譜圖如圖1所示。從表2和圖1中可以看出42種獸藥殘留的出峰時間在2.42～14.51 min之間，分離效果較好、離子干擾少。

2.2 定量測定

2.2.1 標(biāo)準曲線、線性范圍和檢出限

試驗方法采用豬肉空白基質(zhì)加標(biāo)的方式建立標(biāo)準曲線，以定量離子的峰面積Y為縱坐標(biāo)、相應(yīng)質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線，以信噪比大于3計算方法的檢出限，檢測結(jié)果見表3。42種獸藥在各自的線性范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.990 8～0.999 8，42種獸藥的檢出限在0.5～25 μg/kg。

2.2.2 準確度和精密度

稱取2 g空白豬肉樣品，添加42種獸藥的標(biāo)準溶液做加標(biāo)回收率試驗，前處理方式同1.3所述，每個水平做6個平行樣品。42種獸殘的添加水平、平均回收率和δRSD結(jié)果如表4所示。從表4中可以看出，42種獸藥在豬肉中的平均回收率75.1%～106.9%，δRSD5.3%～19.4%，符合GB/T 27404—2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》[9]的技術(shù)要求。

表2 42種獸殘的質(zhì)譜分析優(yōu)化參數(shù)

圖1 42種獸殘混合標(biāo)準溶液的特征離子色譜圖

表3 42種獸殘的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

接表3

表4 豬肉空白基質(zhì)中42種獸殘的加標(biāo)回收率和精密度

3 結(jié)論

主要針對豬肉中未知獸藥的殘留問題，建立基于QuEChERS與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的一種快速、高通量、準確的篩查方法，該方法的相關(guān)系數(shù)為0.990 8～0.999 8，檢出限在0.5～25 μg/kg之間；在豬肉空白基質(zhì)中進行檢出限水平加標(biāo)，回收率和精密度均滿足GB 27404要求；相比于傳統(tǒng)檢測方法，該方法前處理簡便快捷，且可同時處理多種農(nóng)藥獸藥項目，縮短檢驗周期，降低檢測成本，提高檢測效率，減少大量有機試劑的使用，屬于環(huán)境友好型檢測方法；可同時篩查多種獸藥殘留，提高食品安全監(jiān)控能力，降低監(jiān)控風(fēng)險，可用于市場監(jiān)管風(fēng)險監(jiān)測評估預(yù)警領(lǐng)域、食品安全保障的快速篩查、應(yīng)急事件處理的快速篩查等領(lǐng)域。