屈玉玲，王 晶，朱嘉暉，劉曉莉，翟學(xué)峰

卵巢透明細(xì)胞癌(ovarian clear cell carcinoma, OCCC)和卵巢子宮內(nèi)膜樣癌(ovarian endometrioid carcinoma, OEC)與子宮內(nèi)膜異位囊腫密切相關(guān)，被稱為子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)性卵巢癌(endometriosis-associated ovarian endometrioid carcinoma, EAOC)[1]。OCCC與常見的卵巢漿液性癌相比，其具有鉑類化療耐藥機(jī)制，常導(dǎo)致患者治療失敗，5年生存率明顯降低[2]。HNF-1β高表達(dá)于OCCC，且可能是聯(lián)系分泌中晚期內(nèi)膜、內(nèi)膜異位癥和OCCC的遺傳學(xué)紐帶[3-4]。同時(shí)，HNF-1β參與形成了OCCC的某些主要生物學(xué)特性，如癌細(xì)胞內(nèi)部的糖原累積、低細(xì)胞增殖及產(chǎn)生較強(qiáng)的抗凋亡和對(duì)化療藥物的耐藥性等[4]。骨橋蛋白(osteopontin, OPN)屬于分泌型糖激化磷酸蛋白，其介導(dǎo)的信號(hào)通路參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。OPN啟動(dòng)子區(qū)域具有HNF-1β功能性結(jié)合位點(diǎn)[5]，HNF-1β可能與OPN結(jié)合后參與內(nèi)膜異位癥癌變?yōu)橥该骷?xì)胞癌的過程，并維持腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為及化療耐藥。本實(shí)驗(yàn)初步探討HNF-1β與OPN在子宮內(nèi)膜異位癥及OCCC發(fā)生、發(fā)展中的作用及可能機(jī)制，為子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生及癌變?yōu)镺CCC尋找新的藥物靶點(diǎn)提供必要的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料收集2011～2019年寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院病理科存檔的24例OCCC，卵巢內(nèi)膜異位癥26例，增生期子宮內(nèi)膜24例，OEC 16例，分泌期子宮內(nèi)膜22例。112例患者均為女性，年齡19～72歲，平均49歲?；颊呔葱蟹?、化療，子宮內(nèi)膜標(biāo)本來源于子宮肌瘤切除術(shù)標(biāo)本。

1.2 免疫組化標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，5 μm厚切片，HE染色，顯微鏡下觀察。免疫組化染色采用EnVision兩步法，一抗HNF-1β、OPN均購自上海圣克魯斯公司。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)HNF-1β陽性定位于細(xì)胞核，OPN陽性定位于細(xì)胞質(zhì)，免疫組化染色以黃色或棕黃色顆粒為陽性，根據(jù)陽性染色細(xì)胞百分率和細(xì)胞著色強(qiáng)度進(jìn)行判斷[6-7]。根據(jù)細(xì)胞著色強(qiáng)度計(jì)分：無著色為0分；淡黃色為1分；淺褐色為2分；深褐色為3分。根據(jù)陽性細(xì)胞百分比計(jì)分：無陽性細(xì)胞為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。最后將兩項(xiàng)評(píng)分結(jié)果相乘：0分為陰性(-)，1～5分為弱陽性(+)，6～9分為中等陽性()，10～12分為強(qiáng)陽性()。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)表示；不符合正態(tài)分布計(jì)量資料用中位數(shù)(四分位數(shù))描述，組間比較用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)分析。兩個(gè)指標(biāo)間的相關(guān)性用Spearman相關(guān)性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HNF-1β在不同組織中的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示HNF-1β在OCCC組中的表達(dá)及中～高陽性率高于卵巢內(nèi)膜異位癥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HNF-1β在卵巢內(nèi)膜異位癥組中的表達(dá)及中～高陽性率高于增生期子宮內(nèi)膜組(P<0.05)；其在OEC組中的表達(dá)低于OCCC組(P<0.05，表1，圖1)。

2.2 OPN在不同組織中的表達(dá)OPN在OCCC組中的表達(dá)及中～高陽性率高于卵巢內(nèi)膜異位癥組(P<0.05)；OPN在卵巢內(nèi)膜異位癥組中的表達(dá)及中～高陽性率高于增生期子宮內(nèi)膜組(P<0.05)；其在OEC與OCCC組中的表達(dá)差異無顯著性(P>0.05，表1，圖2)。

2.3 OPN與HNF-1β的相關(guān)性本組經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，在增生期子宮內(nèi)膜、分泌期子宮內(nèi)膜、卵巢內(nèi)膜異位癥及OCCC中OPN與HNF-1β表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)；而在OEC中HNF-1β與OPN表達(dá)無顯著相關(guān)性(P>0.05，表2)。

3 討論

目前，HNF-1β已廣泛用于OCCC的鑒別診斷，敏感性約85.2%，特異性約76.5%[8]；本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其在OCCC中陽性率約100%。在OCCC發(fā)生前，卵巢內(nèi)膜異位癥的上皮細(xì)胞就已發(fā)生HNF-1β異常表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)中卵巢內(nèi)膜異位癥組的上皮細(xì)胞均有HNF-1β表達(dá)(排除個(gè)別無上皮細(xì)胞或上皮細(xì)胞過度萎縮的病例)，但大部分陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)，40%～70%的上皮細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核染色。部分文獻(xiàn)對(duì)不典型的卵巢內(nèi)膜異位癥單獨(dú)進(jìn)行分析，由于尚無明確的臨床病理診斷標(biāo)準(zhǔn)，且不能排除內(nèi)膜異位癥中長期炎癥及出血的刺激因素所致，本組并未區(qū)分此類型。另外，HNF-1β只有轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞核并與細(xì)胞核定位信號(hào)(nuclear localization signal)結(jié)合后才能發(fā)揮其功能[9]，這也是本組只計(jì)數(shù)HNF-1β細(xì)胞核染色為陽性的原因。Shen等[10]發(fā)現(xiàn)，卵巢內(nèi)膜異位癥上皮細(xì)胞過表達(dá)HNF-1β后，其形態(tài)增大、扁平并向OCCC的形態(tài)學(xué)方向發(fā)展。本組有部分病例的內(nèi)膜異位癥上皮細(xì)胞高表達(dá)HNF-1β，并出現(xiàn)OCCC腫瘤細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)，本組認(rèn)為維持HNF-1β高表達(dá)可能在內(nèi)膜異位癥癌變?yōu)镺CCC的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)[11]，HNF-1β與糖酵解活性相關(guān)(又稱為Warburg Effect),并參與化療耐藥機(jī)制中，下調(diào)OCCC中HNF-1β表達(dá)可顯著增加順鉑和紫杉醇的細(xì)胞毒性，提示其作為OCCC分子靶向治療的良好前景。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，OPN在增生期子宮內(nèi)膜內(nèi)弱表達(dá)或不表達(dá)，而在內(nèi)膜異位癥中表達(dá)顯著升高。卵巢內(nèi)膜異位癥的囊液因反復(fù)出血，高度富含鐵離子，在低氧含量及高氧化壓力的環(huán)境下，內(nèi)膜異位癥的上皮細(xì)胞通過高表達(dá)OPN激活細(xì)胞的自身保護(hù)系統(tǒng)[12-13]，從而能在這種惡劣的環(huán)境中存活下來，同時(shí)也為癌變的發(fā)生奠定基礎(chǔ)。OCCC中OPN高表達(dá)與患者順鉑耐藥的機(jī)制密切相關(guān)。Lu等[14]對(duì)肝癌順鉑耐藥機(jī)制進(jìn)行詳細(xì)的研究發(fā)現(xiàn)，OPN通過控制有氧糖酵解，抑制凋亡、促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移以及增加對(duì)順鉑的耐藥性。OPN的生物學(xué)功能提示其科學(xué)研究價(jià)值，以及其與HNF-1β聯(lián)合參與OCCC耐藥機(jī)制的可能性。

由于OPN啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)含HNF-1β功能性結(jié)合位點(diǎn)，HNF-1β被認(rèn)為是最有可能直接作用的靶基因[15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HNF-1β與OPN在子宮內(nèi)膜、卵巢內(nèi)膜異位癥及OCCC中呈高度正相關(guān)，兩者可能協(xié)同參與OCCC的癌變過程及其化療的耐藥。另外，在OEC中HNF-1β表達(dá)與OPN并無相關(guān)性，提示雖同為卵巢異位癥相關(guān)性卵巢癌，但兩者的癌變機(jī)制并不相同，與Kato等[15]的報(bào)道一致。

綜上所述，HNF-1β、OPN可能參與OCCC的發(fā)生、發(fā)展及其化療耐藥，且兩者關(guān)系密切。阻斷HNF-1β表達(dá)或與OPN的相互作用，可以為新型抗腫瘤藥物的研發(fā)提供新思路，有望成為OCCC新的治療靶點(diǎn)。