高琛,韓萍萍,王彬彬,張倩,范麗娟,王歡,蒲廣,劉航,張總平,牛培培,周娟,黃瑞華,4,李平華,4,5*

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)養(yǎng)豬研究所,江蘇 南京 210095;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)淮安研究院,江蘇 淮安 223002;3.淮安市淮陰新淮種豬場,江蘇 淮安 223002;4.江蘇省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(生豬)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系集成創(chuàng)新中心,江蘇 南京 210095;5.淮安市南農(nóng)大新農(nóng)村發(fā)展研究有限公司,江蘇 淮安 223002)

肌肉滴水損失是評(píng)價(jià)豬肉品質(zhì)優(yōu)劣的重要指標(biāo)之一,較高的滴水損失會(huì)嚴(yán)重降低豬肉的營養(yǎng)價(jià)值,Savage等[1]研究指出豬肉中每損失1 mL的液體會(huì)有大約112 mg蛋白隨之流失。除此之外,肌肉滴水損失也是重要的商業(yè)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)。滴水損失過高導(dǎo)致肉質(zhì)變差、貨架期縮短,直接影響屠宰場的經(jīng)濟(jì)效益。我國是豬肉生產(chǎn)和消費(fèi)大國,然而我國冷鮮肉的汁液流失率平均比歐美發(fā)達(dá)國家高1%～2%[2],每年因豬肉滴水損失造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)數(shù)億元人民幣。如何改善豬肉品質(zhì),降低肌肉的滴水損失是生豬養(yǎng)殖和屠宰加工行業(yè)期望實(shí)現(xiàn)的重要目標(biāo),也是保證肉品加工業(yè)經(jīng)濟(jì)利益的理論基礎(chǔ)。蘇淮豬是由淮豬和大白豬雜交培育而成的新品種,其含有25%優(yōu)良肉質(zhì)的淮豬血緣和75%肉質(zhì)相對較差的大白豬血緣[3],因此其群體內(nèi)在豬肉的滴水損失上可能存在分離,但是目前關(guān)于蘇淮豬群體肌肉滴水損失的研究報(bào)道相對較少。

隨著基因組技術(shù)的發(fā)展,已有涉及豬的近700個(gè)不同性狀的29 685個(gè)數(shù)量性狀基因座(quantitative trait loci,QTL)被成功定位,其中與豬肉滴水損失性狀相關(guān)的QTL有1 087個(gè),與豬肉系水力(water holding capacity,WHC)相關(guān)的QTL有28個(gè)(PigQTLdb,https://www.animalgenome.org/cgi-bin/QTLdb/SS/index)。研究發(fā)現(xiàn)含有SAP結(jié)構(gòu)域(由33個(gè)氨基酸殘基形成的保守模板)的肌肉增強(qiáng)因子2激活基因(myocyte enhancer factor-2 activating motif and SAP domain containing transcriptional regulator,MAMSTR)、抵抗素基因(resistin,RETN)、蘭尼定受體基因(ryanodine receptor1,RYR1)、磷酸化酶激酶γ1基因(phosphorylase kinase gamma1,PHKG1)和一磷酸腺苷激活蛋白激酶γ3亞基基因(protein kinase AMP-activated non-catalytic subunit gamma3,PRKAG3)是影響滴水損失的候選基因[4-5]。韓雪蕾[6]在通城豬試驗(yàn)群體中發(fā)現(xiàn)MAMSTR基因的第4外顯子上rs337473375位點(diǎn)處存在C>T突變,該突變位點(diǎn)的多態(tài)性與豬肉滴水損失和WHC呈顯著關(guān)聯(lián),其中,CC型個(gè)體的滴水損失和WHC顯著高于TT型個(gè)體。RYR1基因又稱為鈣離子釋放通道基因或氟烷基因(HAL),該基因編碼區(qū)的突變(g.1843C>T)已被證實(shí)可引起豬應(yīng)激綜合征(porcine stress syndrome,PSS),加快水分丟失,導(dǎo)致PSE肉的產(chǎn)生[7]。Ma等[8]在杜洛克及其雜交群體中發(fā)現(xiàn)PHKG1基因可以影響肌肉糖原含量和糖酵解潛能可轉(zhuǎn)化為乳酸化合物的量(glycolytic potential,GP),并在其第9個(gè)內(nèi)含子中發(fā)現(xiàn)1個(gè)突變(g.8283C>A),該突變能夠降低磷酸化酶激酶的活性,導(dǎo)致糖酵解電位增加,加快pH值下降,從而增加肌肉中的滴水損失。Milan等[9]在漢普夏豬群體中發(fā)現(xiàn)PRKAG基因(也即RN基因)p.Arg200Gln突變在RN動(dòng)物中會(huì)顯著增加肌糖原含量,且相比于野生型動(dòng)物,RN動(dòng)物表現(xiàn)出更高的滴水損失。除了在漢普夏豬群體中發(fā)現(xiàn)了PRKAG基因的p.Arg200Gln位點(diǎn)突變外,在大白豬等其他品種豬的PRKAG3中還發(fā)現(xiàn)了新的等位基因,如p.Ile199Val,且該位點(diǎn)已被證實(shí)與豬肉的滴水損失有關(guān)[10]。RETN基因是Steppan等[11]發(fā)現(xiàn)的一種促進(jìn)胰島素抵抗的蛋白信號(hào)分子,它能削弱胰島素對細(xì)胞的刺激從而引起機(jī)體糖耐受量的降低。Otieno等[12]在巴克夏與大白豬雜交后代群體豬中發(fā)現(xiàn)RETN基因rs327132149位點(diǎn)與WHC、pH值等顯著相關(guān)。盡管已鑒定出較多與滴水損失相關(guān)的主效功能位點(diǎn)和候選功能位點(diǎn),但研究結(jié)果存在一定的群體特異性,且目前尚未見影響蘇淮豬肉滴水損失的候選基因或QTL的報(bào)道。

為鑒別影響蘇淮豬肌肉滴水損失的關(guān)鍵基因位點(diǎn),本研究選擇了RYR1基因g.1843C>T位點(diǎn)、PHKG1基因g.8283C>A位點(diǎn)、PRKAG3基因的p.Arg200Gln位點(diǎn)和p.Ile199Val位點(diǎn)等4個(gè)已知的影響豬肉滴水損失的主效基因位點(diǎn)和MAMSTR基因rs37473375位點(diǎn)、RETN基因rs327132149位點(diǎn)等2個(gè)已知的與豬肉滴水損失相關(guān)的候選基因位點(diǎn)作為影響蘇淮豬肉滴水損失的候選基因位點(diǎn),分析這6個(gè)位點(diǎn)在301頭純種蘇淮豬中的多態(tài)性及其與肌肉滴水損失的關(guān)聯(lián)性,為尋找與蘇淮豬肉滴水損失相關(guān)的分子標(biāo)記奠定基礎(chǔ),為蘇淮豬肉品質(zhì)的改善提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)在江蘇省淮安市淮陰種豬場內(nèi)篩選了301頭日齡相近(平均219.1 d)、相同飼養(yǎng)管理和營養(yǎng)條件下的健康育肥蘇淮豬,其中236頭閹公豬、65頭母豬。待這些豬飼養(yǎng)達(dá)到上市體重(80～90)kg后,分 3個(gè)批次運(yùn)輸至淮安市金源肉品加工中心,靜置12 h后,按現(xiàn)代化屠宰工藝進(jìn)行電麻致暈后屠宰。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集試驗(yàn)蘇淮豬經(jīng)電麻、頸部放血處死后,立即剪取豬只右耳耳樣組織,放入盛有1.5 mL 體積分?jǐn)?shù)為75%乙醇的2 mL離心管中,注明耳號(hào),-20 ℃保存;隨后燙毛,去頭、尾、蹄和內(nèi)臟(保留板油和腎臟),稱量每個(gè)個(gè)體的胴體重;采集左半胴體胸腰椎結(jié)合處背最長肌肌肉樣品約200 g,注明耳號(hào),置于含有冰袋的泡沫箱內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室,用于肌肉滴水損失的測定。

1.2.2 滴水損失表型測定參考中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部標(biāo)準(zhǔn)《豬肌肉品質(zhì)測定技術(shù)規(guī)范:NY/T 821—2004》,采用袋測定法測定背最長肌滴水損失。具體試驗(yàn)步驟如下:順著肌纖維走向取一塊長約 5 cm、寬約3 cm、厚約2 cm的背最長肌樣品,除去樣品表面肌膜;用分析天平稱量樣品的質(zhì)量(W1)并編號(hào)記錄;用干凈的細(xì)鐵絲勾住樣品的一端使樣品垂直懸吊于自封袋內(nèi),向袋內(nèi)充入氣體(肉樣不得與塑料袋接觸),扎緊口袋后吊掛置于4 ℃冰箱;24 h后,取出樣品,用吸水紙吸干樣品表面的水分,稱量并記錄掛后質(zhì)量(W2)。滴水損失計(jì)算公式:

滴水損失=(W1-W2)/W2×100%。

1.2.3 DNA提取及稀釋采用天根生物科技有限公司的基因組DNA提取試劑盒提取蘇淮豬耳組織的DNA,并用15 g·L-1的瓊脂糖凝膠電泳法檢測DNA的質(zhì)量。利用NanoDrop 2000分光光度計(jì)測定DNA原液的濃度。取DNA原液20 μL于1.5 mL離心管中,加入適量的超純水將原液稀釋到50 ng·μL-1,3 000 r·min-1離心后放入-20 ℃冰箱備用。

1.2.4 PCR擴(kuò)增利用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物,引物由南京擎科生物有限公司合成。引物序列見表1。PCR反應(yīng)體系(25 μL):1.1×T3 Super PCR Mix 22 μL,模板DNA 1 μL,上、下游引物各1 μL。PCR擴(kuò)增程序:98 ℃預(yù)變性2 min;98 ℃變性10 s,56～65 ℃退火10 s,72 ℃延伸10 s,共35個(gè)循環(huán);最后72 ℃延伸2 min,4 ℃保存。

表1 5個(gè)基因擴(kuò)增的引物序列Table 1 Primer sequence of 5 genes amplification

1.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析

利用Excel 2007整理每個(gè)個(gè)體的耳號(hào)、年齡、屠宰日齡、性別、屠宰批次、胴體重、滴水損失值以及系譜等信息,計(jì)算滴水損失的平均值、標(biāo)準(zhǔn)誤和變異系數(shù),并用卡方檢驗(yàn)來確定蘇淮豬群體在MAMSTR基因rs337473375位點(diǎn)、RETN基因rs327132149位點(diǎn)、RYR1基因g.1843C>T位點(diǎn)、PHKG1基因g.8283C>A位點(diǎn)和PRKAG3基因p.Ile199Val位點(diǎn)處是否符合哈代-溫伯格平衡。利用SAS 9.2軟件中一般線性模型(GLM)計(jì)算性別在滴水損失中的效應(yīng)值。

利用DNAMAN 9.0軟件對測序結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。采用SAS 9.2軟件中的混合線性模型分析各基因型與滴水損失之間的關(guān)聯(lián)性,然后采用Bonferroni方法進(jìn)行多重比較和校正。由于發(fā)現(xiàn)性別、批次、日齡與豬肉滴水損失顯著關(guān)聯(lián),計(jì)算中以性別和批次作為固定效應(yīng),日齡作為協(xié)變量,計(jì)算模型如下:

Yijkm=μ+Gi+Sj+Bm+Dk+Km+eijkm,

式中:Yijkm表示肌肉滴水損失測量值;μ為群體均值;Gi為第i個(gè)SNP的基因型固定效應(yīng);Sj為性別j的固定效應(yīng);Bm為批次m的固定效應(yīng);Dk是屠宰日齡為k的協(xié)變量;Km是基于系譜關(guān)系的多基因隨機(jī)效應(yīng);eijkm代表隨機(jī)殘差效應(yīng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘇淮豬試驗(yàn)群體肌肉滴水損失統(tǒng)計(jì)及性別的影響

如表2所示:本試驗(yàn)共統(tǒng)計(jì)了236頭閹公豬、65頭母豬,其肌肉滴水損失分別為1.97%和1.29%,變異系數(shù)分別是65.85%和65.82%;母豬群體滴水損失平均為1.29%,變異系數(shù)61.66%。整個(gè)試驗(yàn)群體中,蘇淮豬肌肉滴水損失平均為1.83%,群體變異系數(shù)67.88%,群體內(nèi)滴水損失性狀存在較大的差異。用SAS 9.2軟件中GLM分析發(fā)現(xiàn),性別對肌肉滴水損失有極顯著影響(P<0.01),性別可解釋肌肉滴水損失 6.48%的變異。母豬肌肉滴水損失極顯著低于閹公豬(P<0.01)。

表2 蘇淮豬肉滴水損失Table 2 The drip loss of Suhuai pigs

2.2 蘇淮豬候選基因位點(diǎn)遺傳多態(tài)性分布與卡方檢驗(yàn)

蘇淮豬MAMSTR基因rs337473375位點(diǎn)、RETN基因rs327132149位點(diǎn)、RYR1基因g.1843C>T位點(diǎn)、PHKG1基因g.8283C>A位點(diǎn)和PRKAG3基因p.Arg200Gln、p.Ile199Val位點(diǎn)多態(tài)性分布結(jié)果如表3所示。

表3 候選基因SNP位點(diǎn)的分布頻率Table 3 The distribution frequency of SNP for candidate genes

由表3可見:在該群體中MAMSTR基因rs337473375位點(diǎn)C、T等位基因頻率分別為0.661和0.339,CT型個(gè)體最多,其次是CC型,TT型個(gè)體最少;RETN基因rs327132149位點(diǎn)G、A等位基因頻率分別為0.032和0.968;RYR1基因g.1843C>T位點(diǎn)C、T等位基因的基因頻率分別是0.967和0.033,C等位基因占主導(dǎo),CC基因型最多,其次是CT型。在蘇淮豬群體中未發(fā)現(xiàn)PHKG1基因g.8283C>A位點(diǎn)遺傳多態(tài)性,但我們在該位點(diǎn)前一個(gè)堿基處發(fā)現(xiàn)新的突變r(jià)s697732005(A>G)位點(diǎn),該位點(diǎn)G、A等位基因頻率分別為0.264和0.736;未檢測到PRKAG3基因p.Arg200Gln位點(diǎn)處的多態(tài)性,但該基因p.Ile199Val位點(diǎn)有多態(tài)性,G、A等位基因頻率分別為0.834和0.166?？ǚ綑z驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PHKG1基因rs697732005位點(diǎn)顯著偏離哈代-溫伯格平衡,而MAMSTR基因rs337473375位點(diǎn)、RETN基因rs327132149位點(diǎn)、RYR1基因g.1843C>T位點(diǎn)和PRKAG3基因p.Ile199Val位點(diǎn)均符合哈代-溫伯格平衡。

2.3 蘇淮豬候選基因SNP位點(diǎn)與滴水損失的關(guān)聯(lián)性分析

如表4所示:關(guān)聯(lián)性分析和差異顯著性多重比較結(jié)果表明,MAMSTR基因rs337473375位點(diǎn)基因型與豬肉滴水損失極顯著關(guān)聯(lián)(P<0.01),CT型和CC型個(gè)體的滴水損失分別極顯著和顯著的低于TT型個(gè)體(P<0.01,P<0.05);RYR1基因g.1843C>T位點(diǎn)和PHKG1基因rs697732005位點(diǎn)基因型與豬肉滴水損失顯著關(guān)聯(lián)(P<0.05),RYR1基因的CC型個(gè)體滴水損失顯著低于CT型個(gè)體(P<0.05),而PHKG1基因的GG型個(gè)體的滴水損失顯著低于AG型個(gè)體(P<0.05)。PRKAG3基因p.Ile199Val位點(diǎn)基因型與豬肉滴水損失之間有顯著關(guān)聯(lián)的趨勢(P=0.070),而RETN基因rs327132149位點(diǎn)基因型與豬肉滴水損失之間沒有表現(xiàn)出顯著關(guān)聯(lián)性。

表4 候選基因多態(tài)位點(diǎn)基因型與滴水損失的關(guān)聯(lián)分析Table 4 Difference analysis of genotype of candidate genes with drip loss

3 討論

3.1 蘇淮豬育肥群體的肌肉滴水損失

滴水損失是肌肉纖維結(jié)構(gòu)、蛋白理化性質(zhì)變化的外在體現(xiàn),不同品種間肌肉滴水損失差異較大,且西方瘦肉型豬種滴水損失通常大于地方豬種。李華[13]研究發(fā)現(xiàn),萊蕪豬、魯萊黑豬和大白豬肌肉的滴水損失分別為0.69%、1.81%和2.87%,品種間差異極顯著。劉順德[14]報(bào)道,梅山豬、寧夏黑豬、長白豬、大白豬的滴水損失分別為1.27%、1.96%、2.87%和2.62%,長梅、大梅、長寧和大寧雜交豬的滴水損失分別為2.61%、2.55%、2.71%和2.64%,品種間差異顯著。萊蕪豬、梅山豬和寧夏黑豬均屬于我國地方豬種,其肌肉滴水損失都在2%以下,而長白豬、大白豬是西方引進(jìn)的瘦肉型豬種,其滴水損失均大于2%。魯萊黑豬、長梅豬、大梅豬、長寧豬以及大寧豬都屬于中國地方豬與西方豬的雜交品種,其肌肉滴水損失均介于各自的親本之間且更接近于父本。蘇淮豬是由淮豬和大白豬雜交培育而來的新品種,在本試驗(yàn)群體中,蘇淮豬肌肉滴水損失平均1.83%,接近大白豬的滴水損失2.28%[15],這與李華[13]和劉順德[14]的研究結(jié)果基本一致。有研究表明,遺傳因素可以解釋系水力等指標(biāo)20%左右的變異[16]。本試驗(yàn)群體中,蘇淮豬滴水損失變異系數(shù)高達(dá)67.88%,說明該群體在滴水損失性狀上不是很穩(wěn)定,這可能與控制該性狀的基因的分離有關(guān),后期還需加強(qiáng)選育。由此可見,通過遺傳選擇降低蘇淮豬肌肉滴水損失具有一定的理論基礎(chǔ)。

3.2 性別與滴水損失的相關(guān)性及影響

本試驗(yàn)結(jié)果顯示母豬的滴水損失極顯著低于閹割公豬。而楊杰等[17]測定了萊蕪豬和杜長大三元雜交豬的肌肉滴水損失,在性別之間未發(fā)現(xiàn)顯著差異;張宏博[18]也發(fā)現(xiàn)性別對商品豬肉滴水損失的影響不顯著。這種差異可能是由于滴水損失的測定方法不同造成的。前者用的是EZ-管測定法,而后者使用保鮮膜包裝,于2 ℃環(huán)境中放置了5 d后再進(jìn)行測定;而本試驗(yàn)采用的是袋測定法,在4 ℃環(huán)境中懸掛24 h后測定。Jeon等[19]報(bào)道,性別對肌纖維的生長發(fā)育有較大影響。因此,我們推測造成本試驗(yàn)公母豬之間滴水損失顯著差異的原因可能是性別影響了肌纖維的類型,從而影響了豬屠宰后糖酵解的速率,最終導(dǎo)致豬肉pH值不同所致。

3.3 蘇淮豬候選基因遺傳多態(tài)性及其與滴水損失性狀的關(guān)聯(lián)性分析

MAMSTR基因只在骨骼肌中特異性表達(dá),它可以激活生肌調(diào)節(jié)因子基因(myogenic regulatory factors,MRF)和成肌細(xì)胞決定基因1(myogenic differentiation1,MYOD1)從而提高骨骼肌基因的表達(dá)量[20-21]。韓雪蕾[6]研究發(fā)現(xiàn),MAMSTR基因第4外顯子上rs337473375位點(diǎn)處存在C>T突變,這一突變能夠使第156位氨基酸由絲氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楦彼?從而造成相應(yīng)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能的改變。同時(shí),他們在通城豬試驗(yàn)群體中發(fā)現(xiàn)該突變位點(diǎn)的多態(tài)性與豬肉滴水損失和WHC有著顯著關(guān)聯(lián)性,CC型個(gè)體的滴水損失和WHC顯著高于TT型個(gè)體[6]。在本試驗(yàn)中,基因MAMSTR的rs337473375位點(diǎn)多態(tài)性與豬肉滴水損失極顯著關(guān)聯(lián),CC型個(gè)體滴水損失顯著低于TT型個(gè)體。這與韓雪蕾[6]的研究正好相反。這種現(xiàn)象很可能是該位點(diǎn)不是影響滴水損失的因果突變位點(diǎn),僅僅是與影響滴水損失的因果突變位點(diǎn)連鎖的位點(diǎn),或在通城豬和蘇淮豬中存在不同的連鎖相。

RYR1基因又稱為鈣離子釋放通道基因或氟烷基因,是造成PSS的一個(gè)主效基因[22]。朱礪等[23]在新榮昌豬群體中發(fā)現(xiàn)RYR1基因1 843處(g.1843C>T)的C>T突變能影響新榮昌豬胴體及肉品質(zhì),且TT型個(gè)體的失水率顯著高于CC型和CT型個(gè)體。我們在蘇淮豬群體中也發(fā)現(xiàn)了該突變且該突變顯著影響了蘇淮豬肉的滴水損失,CC型個(gè)體豬肉滴水損失顯著低于CT型個(gè)體,CC型為優(yōu)勢基因型。在蘇淮豬試驗(yàn)群體中C等位基因頻率達(dá)到0.967,而T等位基因頻率只有0.033,這很有可能是因?yàn)镽YR1基因能夠影響應(yīng)激等經(jīng)濟(jì)性狀。育種人員在對蘇淮豬的選育過程中通過表型間接對該基因進(jìn)行了強(qiáng)烈的選擇;當(dāng)然也有可能是因?yàn)樘K淮豬育成的祖代個(gè)體的T等位基因頻率比較低。但是考慮到群體中仍然存在不利T等位基因,需要繼續(xù)利用分子標(biāo)記輔助手段來對蘇淮豬群體進(jìn)一步選擇,以準(zhǔn)確快速淘汰不利T等位基因。

PHKG1基因是影響機(jī)體糖代謝的一個(gè)關(guān)鍵基因[24]。王圓圓等[25]發(fā)現(xiàn)PHKG1基因的表達(dá)具有組織特異性,在背最長肌中的表達(dá)量最高。MA等[8]通過測序發(fā)現(xiàn)PHKG1基因9號(hào)內(nèi)含子的剪接受體位點(diǎn)處(g.8283)存在一個(gè)C>A突變,該突變能造成下游開放閱讀框中32 bp堿基片段的缺失,并導(dǎo)致終止密碼子的提前出現(xiàn)。該位點(diǎn)的突變能夠增加肌肉43%的糖酵解潛力,至少降低肌肉20%的WHC;他們還在蘇太豬群體中發(fā)現(xiàn)該突變位點(diǎn)AA基因型個(gè)體的滴水損失、pH下降速率以及肉色的a*值和b*值都極顯著高于CC型個(gè)體[8]。遺憾的是在蘇淮豬群體中g(shù).8283處并未發(fā)現(xiàn)C>A突變,但在該位點(diǎn)前一個(gè)堿基(rs697732005)處卻發(fā)現(xiàn)了A>G突變,這很有可能是由于品種差異造成的,暗示g.8283影響豬滴水損失存在群體異質(zhì)性。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,蘇淮豬群體PHKG1基因的rs697732005位點(diǎn)A>G突變與蘇淮豬肉滴水損失顯著關(guān)聯(lián),且GG型和AA型個(gè)體的滴水損失顯著低于AG型個(gè)體,而GG型與AA型個(gè)體間差異不顯著,這與傳統(tǒng)加性效應(yīng)的規(guī)律不相符,暗示PHKG1基因的rs697732005位點(diǎn)可能不是影響滴水損失的因果突變位點(diǎn),僅僅是與影響滴水損失的因果突變位點(diǎn)連鎖的位點(diǎn)。有待進(jìn)一步挖掘PHKG1基因上與滴水損失相關(guān)的關(guān)鍵因果位點(diǎn)?？ǚ綑z驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)PHKG1基因的rs697732005位點(diǎn)在蘇淮豬群體中極顯著偏離哈代-溫伯格平衡,說明在歷史選育的過程中該位點(diǎn)可能經(jīng)歷了定向選擇,也有可能是現(xiàn)有群體量偏小造成的。

PRKAG3基因是造成酸肉效應(yīng)的主效基因[26]。Milan等[9]在漢普夏豬中發(fā)現(xiàn)PRKAG3基因的遺傳密碼子發(fā)生p.Arg200Gln突變后,可導(dǎo)致肌肉糖原含量增加70%,最終降低豬肉WHC(高滴水損失)。Ryan等[27]報(bào)道,PRKAG3的p.Arg200Gln和p.Ile199Val突變能降低豬胴體終末pH值,增加豬肉的滴水損失。Barnes等[28]在小鼠上研究表明p.Ile199Val突變能夠降低PRKAG3基因的表達(dá)量,而李夢云等[29]研究發(fā)現(xiàn)PRKAG3基因表達(dá)量與豬肉滴水損失呈正相關(guān)。由此可見,PRKAG3基因?qū)ωi肉品質(zhì)的影響是十分復(fù)雜的。本試驗(yàn)擴(kuò)增了蘇淮豬群體包括第199和200密碼子在內(nèi)的DNA片段,通過測序發(fā)現(xiàn)蘇淮豬群體中不存在p.Arg200Gln突變,而含有p.Ile199Val突變,這與Milan等[9]研究發(fā)現(xiàn)p.Arg200Gln突變僅存在于漢普夏豬種中是一致的。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,PRKAG3基因p.Ile199Val位點(diǎn)多態(tài)性與蘇淮豬肉滴水損失有顯著關(guān)聯(lián)的趨勢,還有待進(jìn)一步增加群體驗(yàn)證。

在以前的報(bào)道中,對RETN基因的研究主要集中在脂肪沉積方面[30],本研究顯示該基因的rs327132149位點(diǎn)突變與豬肉滴水損失沒有顯著關(guān)聯(lián),這與前人報(bào)道的基本一致[31],進(jìn)一步說明該位點(diǎn)的突變可能不會(huì)影響豬肉的滴水損失。

蘇淮豬群體內(nèi)肌肉滴水損失變異較大,具有較大的選育改善空間。蘇淮母豬肌肉滴水損失極顯著低于閹公豬。MAMSTR基因rs337473375位點(diǎn)、RYR1基因g.1843C>T位點(diǎn)和PHKG1基因rs697732005位點(diǎn)是影響蘇淮豬肉滴水損失的候選基因重要突變位點(diǎn),可以作為降低蘇淮豬肉滴水損失的潛在分子標(biāo)記。