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        牛黃及其代用品摻雜偽品的鑒別

        2021-03-27 04:23:13
        光明中醫(yī) 2021年4期
        關(guān)鍵詞:牛黃培育

        杜 娟

        牛黃源于牛科動(dòng)物牛的膽管或膽囊中的結(jié)石,是一種病理產(chǎn)物[1]。天然牛黃稀少而價(jià)格較高,針對(duì)這一現(xiàn)狀,我國科研工作者研制出牛黃代用品:人工牛黃、體內(nèi)培植牛黃、體外培育牛黃等,并已收錄于2015年版《中華人民共和國藥典》[1]。牛黃代用品價(jià)格相對(duì)低廉,可以更大程度上滿足日漸增高的市場(chǎng)需求。但牛黃藥材市場(chǎng)中時(shí)常發(fā)生牛黃代用品摻偽問題,此種情況嚴(yán)重降低牛黃的質(zhì)量,直接影響臨床用藥的安全性與有效性[2]。(牛黃Bovis Calculus、牛Bos taurus domesticus Gemlin)

        1 牛黃及代用品種類

        1.1 天然牛黃現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為天然牛黃是因?yàn)楦文懠不家鸬?。其主要成分有膽色素類、膽汁?包括游離型和結(jié)合型膽汁酸)、脂肪酸、膽固醇、氨基酸、卵磷脂等。天然牛黃在我國按照產(chǎn)地不同可分為東牛黃、西黃、蘇牛黃、京牛黃,其中京牛黃和蘇牛黃多為膽紅素-膽固醇結(jié)石,東牛黃多為膽紅素結(jié)石。

        1.2 人工牛黃依照天然牛黃的主要成分表,將膽紅素、?;撬?、豬去氧膽酸、牛膽粉、膽固醇、磷酸三鈣、硫酸鎂等與淀粉混合,制成人工牛黃。

        1.3 體內(nèi)培植牛黃20世紀(jì)70年代我國成功研制出體內(nèi)培植牛黃。經(jīng)外科手術(shù)的方式,將致黃因子(特定異物)植入活牛膽中,并注射一種菌液,能促進(jìn)牛黃的產(chǎn)生。主要由膽紅素鈣、膽汁酸類、蛋白質(zhì)、氨基酸以及微量元素等組成。因與天然牛黃的形成環(huán)境大體相同,有研究指出二者含有成分、理化性質(zhì)和藥理作用等無明顯差異。但由于遭受醫(yī)學(xué)倫理質(zhì)疑,且周期長、成本高,未能在市場(chǎng)上廣泛流通,也未被《中華人民共和國藥典》收錄。

        1.4 體外培育牛黃20世紀(jì)70年代我國因生物工程技術(shù)快速發(fā)展,成功研制出體外培育牛黃,模擬體內(nèi)天然牛黃形成的原理和環(huán)境,通過物理生化方法使牛膽汁生成牛膽紅素鈣結(jié)石[3]。其化學(xué)成分、理化性質(zhì)及藥理作用與天然牛黃大體相似。

        2 牛黃及其代用品的鑒別

        2.1 性狀鑒別天然牛黃的物理性狀特點(diǎn)是表面鮮棕黃色、質(zhì)地松脆、蛋黃完整、斷面紋路細(xì)膩清晰。人工培植牛黃是通過外科手術(shù)的方法在活體牛的膽囊內(nèi)留置致黃因子,進(jìn)而生成牛黃。人工培植牛黃質(zhì)地松而輕,呈土黃色,為疏松的粉末,味苦微甜,入口后無清涼感,氣略腥而微清香。天然牛黃與人工牛黃的性味、色澤、理化特性、藥效成分之間無明顯差異[4]。人工牛黃是牛膽汁酸、膽紅素與無機(jī)鹽(硫酸鎂、硫酸亞鐵和磷酸三鈣)、膽固醇、淀粉等原料混合而成。人工牛黃顯金黃色或淺棕黃色,質(zhì)輕,大多為疏松粉末,也有因制法不同而呈方形或球形,水溶后可染指甲為黃色,味苦而微甜,入口后無清涼,感氣略腥而微清香[5]。

        2.2 薄層鑒別相關(guān)研究指出[6],牛黃中含量最高的是膽紅素,其次為膽汁酸、膽酸、去氧膽酸、膽汁酸鹽、膽固醇等,還含有微量元素、類肽的平滑肌收縮成分、胡蘿卜素類物質(zhì)、氨基酸。人工培植牛黃與天然牛黃在膽汁酸、膽酸的含量有差異[7]。葉蓓蓓[8]以膽酸提取樣品,使用薄層掃描法測(cè)定了膽汁酸的含量,與天然牛黃進(jìn)行區(qū)分。還有研究者認(rèn)為牛黃質(zhì)量控制的最佳方法是利用薄層掃描儀對(duì)不同濃度的膽酸薄層指紋圖譜進(jìn)行掃描,并測(cè)定膽酸的含量,得出膽酸的指紋特征圖譜。薄層色譜建立的指紋特征圖譜能準(zhǔn)確、快速地進(jìn)行含量測(cè)定,可用于人工牛黃中膽酸的定量分析研究。薄層鑒別方法操作簡單,但是鑒別準(zhǔn)確度不高。

        2.3 重氮化比色法和水性溶劑法由于形成環(huán)境、培育方法等因素的不同,天然牛黃與人工培育牛黃在膽紅素的含量上可能有差異。膽紅素的傳統(tǒng)測(cè)定方法有水性溶劑法和重氮化比色法。重氮化比色法測(cè)定膽紅素含量是在520 nm波長處測(cè)定膽紅素與重氮化試劑發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)生成的偶氮染料的吸光度。水性溶劑法通過添加反應(yīng)促進(jìn)劑測(cè)膽紅素的溶解度,以得到更加準(zhǔn)確的膽紅素含量測(cè)定值[9]。

        2.4 高效液相色譜法高效液相色譜法具有準(zhǔn)確度與重現(xiàn)性較高的特點(diǎn),能較好地控制牛黃及其代用品的質(zhì)量。夏晶等[10]使用高效液相-紫外吸收法比對(duì)天然牛黃和體外培育牛黃中膽紅素的含量,發(fā)現(xiàn)體外培育牛黃中沒有游離膽紅素而天然牛黃中有少量游離膽紅素;體外培育牛黃中結(jié)合膽紅素的含量較高而牛黃中以共價(jià)膽紅素為主,以此可明顯鑒別牛黃及其代用品。但是高效液相-紫外吸收法操作比較繁瑣,影響因素較多,鑒別準(zhǔn)確度不高。與高效液相-紫外吸收法不同,高效液相-蒸發(fā)光散射法是一種質(zhì)量型通用檢測(cè)器,對(duì)牛黃中無紫外吸收的膽汁酸分析檢測(cè)顯示出了極大的優(yōu)越性。李珂等[11]對(duì)10批天然牛黃和10批體外培育牛黃使用高效液相-蒸發(fā)光散射法測(cè)定膽固醇含量,并進(jìn)行比對(duì),發(fā)現(xiàn)可能因產(chǎn)地、來源等不同,牛黃與體外培育牛黃中膽固醇的含量有差異,且體外培育牛黃因制備工藝穩(wěn)定其膽固醇含量差異較小。牛黃中膽汁酸種類復(fù)雜,且一部分膽汁酸含量很低,不容易檢測(cè)得到,高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)選擇性和靈敏度高,可以較好地分離牛黃中的膽汁酸成分。雷凱等[12]通過三重四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器法測(cè)定牛黃及代用品中的多種膽汁酸和膽紅素成分的含量,發(fā)現(xiàn)培育牛黃和牛黃中結(jié)合型膽汁酸的含量比例存在明顯差異,且豬去氧膽酸是人工牛黃獨(dú)特的成分。

        2.5 近紅外光譜法近紅外光譜能夠反映樣品中化學(xué)成分的全貌,研究對(duì)象的分類通過結(jié)合模式識(shí)別技術(shù)實(shí)現(xiàn)。目前已經(jīng)有一些研究將近紅外光譜法應(yīng)用于牛黃及其代用品的鑒別上。陽志云等[13]的人工牛黃的真?zhèn)舞b別模型是基于歐氏距離建立。艾莉等[14]運(yùn)用聚類分析分別分析人工牛黃的正品與偽品,發(fā)現(xiàn)正品與偽品牛黃各聚為一類,2類之間的界限明顯。偽品人工牛黃可通過近紅外光譜分析技術(shù)進(jìn)行鑒別,與理化方法鑒別結(jié)果一致,并且具有無損、快速、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。牛黃及其偽品的近紅外光譜原始吸收模式相似,吸收峰位置和相對(duì)強(qiáng)度不同是其主要差別。不同種類牛黃樣品的化學(xué)組成可以通過近紅外光譜進(jìn)行反映。光譜的相似性導(dǎo)致天然牛黃的鑒別必須依靠化學(xué)模式識(shí)別方法在光譜數(shù)據(jù)中提取相關(guān)化學(xué)信息才能實(shí)現(xiàn)。徐璐等[15]將基于偏小二乘回歸的類模型方法應(yīng)用于天然牛黃、人工牛黃摻偽品的鑒別分類上,準(zhǔn)確度高達(dá)100%。聶黎行等[16]比較天然牛黃、人工牛黃和體外培育牛黃的近紅外漫反射光譜差異,利用主成分分析法觀察不同樣品主成分空間分布,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其主成分空間分布明顯不同,天然牛黃、體外培育牛黃和人工牛黃各自單獨(dú)聚為一類,預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率高達(dá)100%。近紅外光譜技術(shù)無樣品破壞,無人為主觀因素的影響,無環(huán)境污染,不消耗化學(xué)試劑,牛黃等貴細(xì)中藥的分析與鑒別尤其適用。而傳統(tǒng)感官指標(biāo)數(shù)字化、準(zhǔn)確、快速、簡便、客觀等是引入模式識(shí)別技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)。

        2.6 氨基酸自動(dòng)分析儀法張啟明等[17]測(cè)定并分析牛黃及代用品中含有的氨基酸,發(fā)現(xiàn)培植牛黃中的氨基酸總量明顯多于天然牛黃(天然牛黃中游離氨基酸只有萬分之幾至千分之幾)。

        3 小結(jié)與展望

        牛黃及其代用品化學(xué)成分復(fù)雜,經(jīng)過查閱與總結(jié)文獻(xiàn),人工牛黃中含有豬去氧膽酸和少量游離膽紅素,這點(diǎn)與天然牛黃、體外培育牛黃、體內(nèi)培育牛黃相區(qū)別。牛黃中結(jié)合膽紅素比例明顯偏低,牛黃中的共價(jià)膽紅素顯著高于體外培育牛黃,而且體外培育牛黃不含有游離膽紅素,鑒別牛黃及其代用品可通過不同類型的膽紅素含量比例進(jìn)行。因藥材市場(chǎng)上牛黃摻偽技術(shù)逐步增強(qiáng),僅僅測(cè)定膽汁酸、膽紅素等成分的含量差異不能準(zhǔn)確鑒別與區(qū)分在牛黃正品中摻入其他代用品。找到牛黃和體外培育牛黃各自的專屬性意義特征成分,隨之建立專屬性檢測(cè),能使牛黃類中藥材成藥摻偽造假問題得到有效解決。目前這類多指標(biāo)檢測(cè)、指紋圖譜檢測(cè)研究相對(duì)較少,亟待研究者進(jìn)一步深入探討。

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