呂桂芳 張春 林建源 林楓 張代場(chǎng)

【關(guān)鍵詞】 脫-γ-羧基凝血酶原 殼多糖酶3樣蛋白1 甲胎蛋白 肝細(xì)胞癌

[Abstract] Objective： To investigate the significance of the combined detection of serum dec-γ-carboxylic prothrombin （DCP）， chitosan enzyme 3-like protein 1 （CHI3L1） and alpha-fetoprotein （AFP） on improving the early diagnosis of hepatocellular carcinoma. Method： A total of 30 patients with early hepatocellular carcinoma admitted to our hospital from June 2014 to May 2016 were selected as hepatocellular carcinoma group， and 30 patients with hepatitis B cirrhosis were selected as cirrhosis group. During the same period， 30 healthy subjects who came to our hospital for physical examination were selected as healthy control group. AFP content was detected by electrochemiluminescence assay， DCP and CHI3L1 content were detected by enzyme linked immunosorbent assay， the above indicators among three groups were compared. Result： Serum DCP， CHI3L1 and AFP levels in hepatocellular carcinoma group were significantly higher than those in cirrhosis group and healthy control group， the differences were statistically significant （P<0.01）. The positive rates of along and three combined tests of serum DCP， CHI3L1 and AFP in hepatocellular carcinoma group were higher than those in cirrhosis group and healthy control group （P<0.01）. The positive rate of the three combined tests was the highest in hepatocellular carcinoma group. Conclusion： Combined detection of DCP， CHI3L1 and AFP can be used as an important indicator for the diagnosis of early hepatocellular carcinoma， and provide a basis for the discovery and treatment of early hepatocellular carcinoma.

[Key words] Dec-γ-carboxylic prothrombin Chitosan enzyme 3-like protein 1 Alpha-fetoprotein Hepatocellular carcinoma

First-author’s address： Mindong Hospital Affiliated to Fujian Medical University， Fu’an 350000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.18.038

肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma， HCC）是全世界第六位常見的癌癥，同時(shí)也是癌癥死亡的第二大常見原因[1]。大約每年有50萬(wàn)新增診斷的肝細(xì)胞癌患者，其中超過50%在中國(guó)。大部分患者由于其早期無(wú)明顯癥狀，往往到醫(yī)院就診時(shí)已經(jīng)處于肝細(xì)胞癌中晚期，失去進(jìn)一步手術(shù)機(jī)會(huì)，其5年生存率不足5%。數(shù)據(jù)顯示，早期肝癌的病人在應(yīng)用外科手術(shù)、肝移植或射頻消融等綜合治療后，5年生存率可達(dá)70%，而進(jìn)展的肝細(xì)胞癌患者，中位生存率少于1年[2]。如何早期發(fā)現(xiàn)和診斷肝細(xì)胞癌是提高患者療效和延長(zhǎng)生存率的重要研究課題。血清生物標(biāo)志物由于其采樣及檢查簡(jiǎn)便，被認(rèn)為是理想的早期診斷指標(biāo)[3]。迄今為止，AFP仍然是診斷HCC最主要的標(biāo)志物，其在診斷、判斷療效、估計(jì)預(yù)后、預(yù)防復(fù)發(fā)中有一定的作用。但是單靠AFP不能診斷所有的HCC，易造成假陰性和假陽(yáng)性。這就給醫(yī)務(wù)工作者提出了更高的要求，需要將現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)志物更加合理地運(yùn)用于肝細(xì)胞癌的早期診斷，或是探究更高靈敏度、特異性、實(shí)用性的檢驗(yàn)手段來(lái)提高HCC的早期診斷率，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年6月-2016年5月在本院住院的早期肝細(xì)胞癌患者30例為肝細(xì)胞癌組，納入標(biāo)準(zhǔn)：HBsAg均為陽(yáng)性，初次檢查發(fā)現(xiàn)肝腫瘤、腫瘤直徑<3 cm，入組前未進(jìn)行任何治療（包括外科手術(shù)、介入治療及其他綜合治療）;均符合2009年我國(guó)《原發(fā)性肝癌規(guī)范化診治的專家共識(shí)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：基礎(chǔ)情況較差，合并心腦肺疾病，無(wú)法耐受手術(shù)治療。選取同期在本院治療的30例乙肝肝硬化患者為肝硬化組。納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：酒精性肝硬化或其他病因?qū)е碌母斡不?。同期選擇來(lái)本院體檢的30名健康者為健康對(duì)照組。該項(xiàng)研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并取得患者及家屬知情同意。

1.2 方法 三組患者檢測(cè)均采集清晨空腹靜脈血5 mL，室溫放置1 h，3 500 r/min離心10 min，分離后的血清于-70 ℃冰箱保存待測(cè)，所有檢測(cè)標(biāo)本無(wú)溶血現(xiàn)象。AFP檢測(cè)采用貝克曼DXI800化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑，記錄測(cè)定值，并與參考值比較;DCP、CHI3L1檢測(cè)均采用ELISA法，往預(yù)先包被人DCP、CHI3L1捕獲抗體的包被微孔中，一次加入標(biāo)本，標(biāo)準(zhǔn)品，HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫浴并徹底洗滌，用底物TMB顯示，TMB在過氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化為最終黃色，顏色深淺和樣品中的DCP、CHI3L1正相關(guān)，用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。對(duì)待檢測(cè)受試者血清進(jìn)行檢測(cè)，記錄測(cè)定值，并與參考值比較：分別以AFP>20 ng/mL、DCP>40 mAU/mL、CHI3L1>79 pg/mL為陽(yáng)性結(jié)果;當(dāng)三者同時(shí)檢測(cè)，若其中出現(xiàn)一項(xiàng)陽(yáng)性時(shí)就被認(rèn)為聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性。ELISA試劑盒均購(gòu)買于上海生工生物工程有限公司，所有操作均按說(shuō)明書嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3 觀察指標(biāo) 比較三組血清DCP、CHI3L1、AFP含量;觀察單項(xiàng)標(biāo)志物檢測(cè)及三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)在各組中的陽(yáng)性檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，兩組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析;計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組的一般資料比較 肝細(xì)胞癌組男19例，女11例;年齡31～72歲，平均（53.4±6.2）歲。肝硬化組男20例，女10例;28～69歲，平均（52.6±5.8）歲。健康對(duì)照組男18名，女12名;年齡21～74歲，平均（51.5±6.1）歲。三組性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組血清中DCP、CHI3L1、AFP含量檢測(cè)結(jié)果比較 肝細(xì)胞癌組患者血清DCP、CHI3L1、AFP水平均明顯高于肝硬化組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見表1。

2.3 單項(xiàng)標(biāo)志物檢測(cè)及三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)在各組中的陽(yáng)性檢出率比較 肝細(xì)胞癌組患者血清DCP、CHI3L1、AFP單項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性率及三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率均高于肝硬化組和健康對(duì)照組（P<0.01）。肝細(xì)胞癌組中三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性檢出率最高。見表2。

3 討論

在肝硬化患者中肝細(xì)胞癌是其主要的死亡原因，肝細(xì)胞癌是我國(guó)常見腫瘤之一，也是世界上第三大主要和癌癥相關(guān)死亡原因[5-6]，其具有發(fā)病率高、腫瘤惡性程度高、侵襲力強(qiáng)、早期無(wú)明顯癥狀，發(fā)現(xiàn)困難等特點(diǎn)，多數(shù)患者被診斷出時(shí)已處于中晚期，預(yù)后不佳，嚴(yán)重影響我國(guó)人民健康和生命[7]。目前，臨床工作中以篩查HCC主要使用血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP），但發(fā)現(xiàn)AFP在診斷HCC時(shí)敏感性和特異性不足，郝銳等[8]報(bào)道顯示，AFP敏感度和特異度分別為56.9%和 83.3%;易造成假陰性和假陽(yáng)性，需結(jié)合超聲、CT、MRI等影像技術(shù)才可以達(dá)到早期診斷。因此對(duì)HCC進(jìn)行準(zhǔn)確、靈敏的早期診斷是提高患者遠(yuǎn)期療效及存活率的關(guān)鍵。脫-γ-異常凝血酶原（Des-gamma-carboxyprothrombin，DCP），又稱為維生素K缺乏或拮抗劑Ⅱ誘導(dǎo)的蛋白（PIVKA Ⅱ），是一種異常的凝血酶原，多種腫瘤中，特別是在 HCC 的惡性增殖過程中起著重要作用[9]。它在肝細(xì)胞癌患者的血清中明顯升高，在早期肝癌中也有一定升高，而在健康受試者的血清中幾乎檢測(cè)不到[10]。一項(xiàng)Ⅱ期臨床研究顯示，在肝炎、肝硬化和HCC人群中，診斷HCC的敏感性和特異性分別為89%和95%，可作為AFP的診斷補(bǔ)充。在該項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞癌組患者血清中DCP的陽(yáng)性率達(dá)86.7%，明顯高于肝硬化組26.7%及健康對(duì)照組0[11]。

殼多糖酶3樣蛋白1（chitinase 3-like 1，CHI3L1），又名幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1，編碼 CHI3L1的基因位于小鼠和人類的1號(hào)染色體上[12]。CHI3L1 是最近發(fā)現(xiàn)的一種由中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等分泌。既往研究表明，CHI3L1蛋白水平與肝癌、肺癌、胃癌和乳腺癌等多種腫瘤相關(guān)[13]。至今為止，CHI3L1參與HCC的腫瘤惡性生物學(xué)行為的詳細(xì)機(jī)制尚未完全闡明[14]。有研究報(bào)道CHI3L1在HCC患者腫瘤組織中異常增高[15]，并且與腫瘤組織中血管內(nèi)皮生成正相關(guān)[16]，并與多種腫瘤的預(yù)后相關(guān)，尤其同HCC預(yù)后評(píng)估有關(guān)。

目前對(duì)選擇兩種或兩種以上腫瘤標(biāo)志物同步進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)是提高相關(guān)腫瘤診斷的方法，特別是對(duì)于肝細(xì)胞癌診斷陽(yáng)性率有著重要意義[17-18]。本研究選擇通過AFP聯(lián)合DCP、CHI3L1三個(gè)標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，肝細(xì)胞癌組各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均高于肝硬化組及健康對(duì)照組，與各標(biāo)記物單獨(dú)檢測(cè)比較，AFP聯(lián)合CHI3L1及DCP三項(xiàng)標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)可以明顯提高肝細(xì)胞癌的診斷陽(yáng)性率，有效降低了早期肝細(xì)胞癌漏診的可能。

綜上所述，DCP、CHI3L1及AFP三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)，具有靈敏度高、特異性好，同時(shí)由于它采血量少，操作簡(jiǎn)便，便于廣大基層醫(yī)院展開檢測(cè)，有利于肝細(xì)胞癌的早期篩查。因此，DCP、CHI3L1及AFP三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)提高肝細(xì)胞癌早期診斷率具有重要意義，但要最終確診肝癌，仍需要結(jié)合影像學(xué)及病理學(xué)檢查等相關(guān)資料，避免誤診。

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（收稿日期：2020-09-03） （本文編輯：姬思雨）