牟 聰，王東凱

（1. 沈陽藥科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016；2. 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 泰州225321）

激光粒度測試法是應(yīng)用較為廣泛、測試速度快、測試范圍廣的粒徑測試方法，測試方法可以分為干法和濕法 2 種。干法是以氣體（一般為空氣或惰性氣體）為分散介質(zhì)，利用紊流分散原理，能夠使樣品顆粒得到充分分散，通過文丘里技術(shù)將干粉與氣體均勻混合并從測量區(qū)噴過，被分散的樣品再導(dǎo)入光路系統(tǒng)中進(jìn)行測試。濕法是以液體（一般為水或有機(jī)溶劑）為介質(zhì)進(jìn)行分散，通過循環(huán)分散系統(tǒng)將樣品與液體均勻混合并輸送到測量區(qū)經(jīng)過光路系統(tǒng)，計(jì)算出粒徑分布。濕法常用的液體介質(zhì)有水、乙醇、己烷、異辛烷等。因?yàn)榻橘|(zhì)不可重復(fù)利用性使得除了水之外的液體造價(jià)均高, 并且濕法操作相對繁瑣。干法操作中僅需控制氣壓大小、進(jìn)料速度、顆粒遮光度等即可準(zhǔn)確測量出顆粒的粒徑分布[1]。

根據(jù)藥物在體外的溶解性和腸道滲透性的高低將藥物分為四類：BCS 分類 Ⅰ 型（高水溶性/高滲透性藥物）、Ⅱ 型（低水溶性/高滲透性藥物）、Ⅲ 型（高水溶性/低滲透性藥物）、Ⅳ 型（低水溶性/低滲透性藥物）[2]。對于溶解性為易溶或者微溶的原料藥，不能用水介質(zhì)（溶解、水化、團(tuán)聚）進(jìn)行濕法粒度測試，有的雖可用有機(jī)溶劑做介質(zhì)進(jìn)行濕法粒度測試，但有毒有污染成本又高。所以，對上述這種原料藥進(jìn)行粒度測試時(shí)，干法優(yōu)于濕法。隨著醫(yī)藥工業(yè)的飛速發(fā)展 , 特別是制劑劑型種類的不斷增多，為滿足制劑質(zhì)量的要求，對生產(chǎn)制劑所用原料藥的粒度分析檢測，要求越來越高[3]。

枸櫞酸托法替布（tofacitinib citrate）是美國輝瑞制藥公司研發(fā)的一種 Janus 關(guān)聯(lián)激酶（Janus associated kinase, JAK）抑制劑，用于治療氨甲喋呤反應(yīng)不足或不耐受的中度至重度類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，原研產(chǎn)品于 2012 年 11 月 6 日首次獲 FDA 批準(zhǔn)上市，商品名為 XELJANZ，可聯(lián)合甲氨蝶呤用于治療腫瘤壞死因子抑制劑應(yīng)答不足的活動(dòng)性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[4-6]，上市劑型為片劑，規(guī)格5 mg。本文作者以易溶性藥物枸櫞酸托法替布（BCSⅢ 類）為例，對激光粒度儀干法測試在原料藥粒徑分析中的應(yīng)用進(jìn)行了深入研究，建立原料藥粒度測定方法并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證；在處方研究中，測定多批制劑所用原料藥粒徑大小，積累原料藥粒徑對制劑影響的數(shù)據(jù)。

1 儀器與材料

HELOS/RODOS 干法粒度儀（德國新帕泰克公司），VIBRI/ASPIROS 干法進(jìn)樣器（德國新帕泰克公司），CQX25-12 超聲波清洗機(jī)（上海必能超聲有限公司）。

枸櫞酸托法替布（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)江蘇海慈生物藥業(yè)有限公司，批號 17041601，含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于99.0%）。

2 方法與結(jié)果

2.1 粒度測定方法選擇

依據(jù)《中華人民共和國藥典》（2015 年版）四部通則測定粒度方法中的第三法[7]，分別嘗試使用濕法和干法測定枸櫞酸托法替布原料藥粒徑，以選擇合適的方法。枸櫞酸托法替布在水中微溶，在甲醇中極易溶解，在乙腈、丙酮和乙醇中幾乎不溶。采用濕法測定枸櫞酸托法替布原料藥粒徑時(shí)，嘗試用純化水和不同濃度乙醇做分散劑，均出現(xiàn)分散體系不穩(wěn)定，遮光度快速下降的現(xiàn)象，無法準(zhǔn)確測定樣品粒徑。枸櫞酸托法替布原料藥無吸濕性，且干法測定不需要提前分散樣品，既簡單又方便，因此選用干法作為測定枸櫞酸托法替布原料藥粒徑的方法。

2.2 方法學(xué)考察

對儀器分散壓力、震動(dòng)進(jìn)樣速度、光學(xué)濃度、樣品出口狹縫寬度等進(jìn)行考察，并對最終確定參數(shù)后的方法進(jìn)行重復(fù)性和精密度試驗(yàn)。

2.2.1 分散壓力的選擇

初步選擇光學(xué)濃度在 5%～10% 范圍內(nèi)，振動(dòng)進(jìn)樣速率為 70%，樣品出口狹縫寬度 2 mm，設(shè)置不同的分散壓力 0.5×105、1.0×105、1.5×105、2.0×105和 2.5×105Pa，平行取枸櫞酸托法替布原料藥 6 份，分別檢測 6 次（n=6）并計(jì)算 RSD，繪制粒度分布圖，結(jié)果見表 1 和圖 1。

Table 1 Investigation results of dispersion pressure (n=6)表 1 分散壓力考察結(jié)果（n=6）

Fig. 1 Particle size distribution state diagrams of different dispersion pressures圖 1 各分散壓力條件下顆粒分布狀態(tài)圖

由結(jié)果可知，分散壓力小于 1.0×105Pa 時(shí)，粒度分布為非正態(tài)分布，顆粒分散狀態(tài)不好，有團(tuán)聚現(xiàn)象；當(dāng)分散壓力 1.5×105、2.0×105和 2.5×105Pa 變化時(shí)，粒度分布圖形態(tài)良好，顆粒分散狀態(tài)良好，分散壓力為 2.0×105Pa 各粒度區(qū)間 RSD 值較小，測定條件更穩(wěn)定。綜上，選擇 2.0×105Pa 作為粒度測定方法的分散壓力。

2.2.2 振動(dòng)進(jìn)樣速率的選擇

同“2.2.1”項(xiàng)下取樣品測量并設(shè)置相關(guān)儀器參數(shù)，根據(jù)“2.2.1”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置樣品分散壓力為 2.0×105Pa，設(shè)置振動(dòng)進(jìn)樣速率 50%、70% 和 90%，結(jié)果見表 2。

Table 2 Investigation results of injection rate (n=6)表 2 振動(dòng)進(jìn)樣速率考察結(jié)果（n=6）

由表 2 結(jié)果可知，不同進(jìn)樣速率條件下 RSD 值均符合要求，進(jìn)樣速率為 50% 時(shí)進(jìn)樣器振動(dòng)槽上殘留樣品較多，會造成樣品的浪費(fèi)。進(jìn)樣速率為 70% 時(shí)，各粒度條件下的 RSD 值最小且符合要求。

2.2.3 光學(xué)濃度的選擇

同“2.2.2”項(xiàng)下取樣品測量并設(shè)置相關(guān)儀器參數(shù)，根據(jù)“2.2.2”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置樣品振動(dòng)進(jìn)樣速率為 70%，比較光學(xué)濃度在 1%～5% 和 5%～10% 之間的粒度分布，結(jié)果見表 3。

Table 3 Investigation results of concentrations of the optical vibration (n=6)表 3 光學(xué)濃度考察結(jié)果（n=6）

兩個(gè)光學(xué)濃度范圍內(nèi)的測定結(jié)果的 RSD 值均符合要求，光學(xué)濃度對粒徑測定影響不大，因此選擇光學(xué)濃度 ≤10%。

2.2.4 樣品出口狹縫寬度的選擇

同“2.2.3”項(xiàng)下取樣品測量并設(shè)置相關(guān)儀器參數(shù)，設(shè)置樣品出口的狹縫寬度為 2、6 和 10 mm分別進(jìn)樣，結(jié)果見表 4。

Table 4 Investigation results of slit width inspection (n=6)表 4 狹縫寬度考察結(jié)果（n=6）

由結(jié)果可知進(jìn)樣口狹縫寬度對測定結(jié)果影響較小。由于測定用的枸櫞酸托法替布粒度小且無大團(tuán)塊（粒度小于 10 μm），測定時(shí)用量較?。?0 mg 左右），2 mm 狹縫寬度足夠測量用量原料藥順利通過。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

根據(jù)方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果，最終確定枸櫞酸托法替布原料藥粒徑干法測定方法：分散壓力 2.0×105Pa、振動(dòng)進(jìn)樣速率 70%、光學(xué)濃度 ≤10%、狹縫寬度 2 mm。實(shí)驗(yàn)員 1 和實(shí)驗(yàn)員 2 分別在不同日期平行取枸櫞酸托法替布原料藥 6 份，每人平行測量 6 次并計(jì)算 RSD，結(jié)果見表 5。

Table 5 Results of precision experiments (n=12)表 5 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (n=12)

重復(fù)性和中間精密度 12 個(gè)樣品測定結(jié)果 X10、X50和 X90的 RSD 值分別 1.24%、0.91%和 0.52%，均符合要求，說明方法的精密度良好。

2.2.6 原料藥的顯微觀察

在顯微鏡下觀察原料藥粒經(jīng)分布情況，具體結(jié)果見圖 2。

Fig. 2 Observation diagram of API under microscope圖 2 原料藥在顯微鏡下觀察圖

由圖 2 結(jié)果可知，在顯微鏡下觀察的原料藥粒度情況與激光散射法測定枸櫞酸托法替布原料藥粒徑結(jié)果基本相同。

3 討論

本研究經(jīng)過一系列試驗(yàn)，建立了干法激光散射法測定原料藥粒徑的方法。我們對所建立的粒度測定方法進(jìn)行了相關(guān)參數(shù)研究及方法學(xué)驗(yàn)證，試驗(yàn)結(jié)果表明該方法操作簡便、準(zhǔn)確、快速，適用于藥品研發(fā)生產(chǎn)中原料藥粒度分布的測定，同時(shí)為易溶和略溶的原料藥測定粒度提供了新的方法和思路。目前，國內(nèi)尚未見有枸櫞酸托法替布原料藥粒度測定方法的文獻(xiàn)報(bào)道。本文作者運(yùn)用激光散射原理，以枸櫞酸托法替布原料藥為例，用干法測定粒度，與濕法相比，該方法操作更簡單，不需要使用分散介質(zhì)。本文作者建立的干法激光散射法重復(fù)性好、精密度高，易于操作，適用各種溶解性（特別是略溶或易溶）的原料藥粒徑測定，已成功應(yīng)用于實(shí)際研發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)量控制中。

原料藥粒度測定方法的建立，有助于在處方篩選前先篩選出合理的原料藥粒徑，可以在一定程度上簡化處方篩選過程，進(jìn)一步完善了原料藥粒徑的研究，使自制品與原研上市品達(dá)到溶出行為的一致[8]。