劉葉，彭健，趙長(zhǎng)帥，孫興霞，亓?xí)詰c

(山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心，山東 濟(jì)南 250101)

交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠是基于透明質(zhì)酸鈉凝膠優(yōu)異的黏彈性、保濕性、生物相容性、可降解性等性能特性，通過(guò)添加一種或多種組合的化學(xué)交聯(lián)劑而獲得[1-4]。交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠更好的機(jī)械支撐性能和抗降解性能，同時(shí)也保留透明質(zhì)酸鈉凝膠良好的生物相容性，非免疫原性等優(yōu)勢(shì)，被廣泛應(yīng)用于組織工程、醫(yī)療美容領(lǐng)域(除皺、塑性以及面部年輕化等治療)[5-6]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球透明質(zhì)酸填充劑市場(chǎng)將以年復(fù)合增長(zhǎng)率12%的速度，從2016 年的17億美元增長(zhǎng)到2020年的27億美元[7]。

作為植入人體并在人體內(nèi)存在較長(zhǎng)時(shí)間的特殊醫(yī)療器械產(chǎn)品，交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠在其原料生產(chǎn)過(guò)程和交聯(lián)過(guò)程中都有可能引入各種對(duì)人體有害的微量重金屬[8-9]，因此交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中重金屬限量檢測(cè)是一項(xiàng)有重要安全意義的基礎(chǔ)檢測(cè)。目前我國(guó)醫(yī)藥行業(yè)對(duì)產(chǎn)品中重金屬限量的相關(guān)檢測(cè)主要依據(jù)《中國(guó)藥典》[10]進(jìn)行，《中國(guó)藥典》2015年版0821重金屬檢測(cè)法共3個(gè)檢測(cè)方法，第一法(硫代乙酰胺法)適用于供試品可不經(jīng)過(guò)有機(jī)破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查；第二法(熾灼殘?jiān)?是將供試品熾灼破壞后，加硝酸、硫酸加熱處理，使有機(jī)物分解、破壞完全后，再按硫代乙酰胺法進(jìn)行檢查，適用于在水、乙醇中難溶解的供試品的重金屬限量檢查；第三法(硫化鈉法)適用于供試品能溶于堿而不溶于酸(或在稀酸中生成沉淀)的重金屬限量檢查。本試驗(yàn)綜合考慮市售和在檢作為醫(yī)療器械產(chǎn)品使用的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠情況，選取兩類具有代表性的非含藥交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠產(chǎn)品和含藥交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠產(chǎn)品按照第三法(硫化鈉法)和第二法(熾灼殘?jiān)?進(jìn)行重金屬限量檢測(cè)，追蹤實(shí)驗(yàn)過(guò)程并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

1 試驗(yàn)部分

1.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液和試劑配制

1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的制備 鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取硝酸鉛0.159 9 g ,置1 000 mL量瓶中，加硝酸5 mL與水50 mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL相當(dāng)于100 μg 的Pb2+)。

鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密量取貯備液10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL相當(dāng)于10 μg 的Pb2+)。本液僅供當(dāng)日使用。配制與貯存用的玻璃容器均不得含鉛。

1.1.2 試劑配制 氫氧化鈉試液、硫化鈉試液、乙酸鹽緩沖液(pH 3.5)、 硫代乙酰胺試液、酚酞指示劑、氨試液均按照《中國(guó)藥典》2015年版配制。硝酸、硫酸、鹽酸均為分析純?cè)噭?/p>

1.2 樣品 樣品A 注射用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠 重金屬總量(以Pb2+計(jì))：應(yīng)不大于5 μg·g-1。

樣品B 含利多卡因注射用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠 重金屬總量(以Pb2+計(jì))：應(yīng)不大于5 μg·g-1。

1.3 試驗(yàn)器具及設(shè)備 電子天平、25 mL納氏比色管、移液管、坩堝、電熱爐、馬弗爐、水浴鍋。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 精確稱取樣品A 2.00 g置于1號(hào)管，樣品B 2.00 g置于2號(hào)管，精確移取鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL置于3號(hào)管中，3個(gè)納氏比色管中分別加氫氧化鈉試液5 mL，再分別加水至25 mL，搖勻，3管中分別加硫化鈉試液5滴，搖勻，置白紙上，自上向下透視，比較顏色深淺。

1.4.2 等待“1.4.1”項(xiàng)下反應(yīng)完成后，過(guò)濾1號(hào)管與2號(hào)管中的試驗(yàn)液，截留凝膠顆粒，將凝膠顆粒分別轉(zhuǎn)移至4號(hào)管和5號(hào)管，2個(gè)納氏比色管中分別加入鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，同時(shí)移取鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL置于6號(hào)管作為對(duì)照管，3個(gè)納氏比色管中分別加氫氧化鈉試液5 mL，再分別加水至25 mL，搖勻，3個(gè)納氏比色管中分別加硫化鈉試液5滴，搖勻，置白紙上，自上向下透視，比較顏色深淺。

1.4.3 精確稱取樣品A 2.00 g置于1號(hào)坩堝，樣品B 2.00 g置于2號(hào)坩堝，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5 mL，使恰濕潤(rùn)，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5 mL，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在550 ℃熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸2 mL，置水浴上蒸干后加水15 mL，滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯微粉紅色，再加醋酸鹽緩沖液(pH 3.5)2 mL,微熱溶解后，移置納氏比色管中，加水稀釋成25 mL分別作為7號(hào)管和8號(hào)管；將加入相同量硝酸和鹽酸的另一瓷坩堝置于水浴上使之蒸干后，另取一納氏比色管加醋酸鹽緩沖液(pH 3.5)2 mL與水15 mL,加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液1 mL(每1 mL相當(dāng)于10 μg 的Pb2+)，再用水稀釋成25 mL，作為9號(hào)管；再在三管中分別加硫代乙酰胺試液各2 mL，搖勻，放置2 min，同置白紙上，自上向下透視，進(jìn)行比色。

2 試驗(yàn)結(jié)果

表1 試驗(yàn)結(jié)果匯總表

3 結(jié)果分析

通過(guò)以上試驗(yàn)現(xiàn)象和產(chǎn)品本身特性有幾個(gè)部分值的討論：

圖1 交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠顆粒溶解情況(左1號(hào)管、右2號(hào)管)

3.1 目前對(duì)交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠重金屬限量的檢測(cè)，大多依據(jù)《YY/T 0962-2014 整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠》要求[11]，而《YY/T 0962-2014整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠》中對(duì)于重金屬限量檢測(cè)規(guī)定按照《中國(guó)藥典》2015年版0821重金屬檢測(cè)法中第三法進(jìn)行，如試驗(yàn)“1.4.1”項(xiàng)下所示，交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉為非水溶產(chǎn)品，加入氫氧化鈉試液、水、硫化鈉試液后，仍不會(huì)溶解，懸浮于水中，肉眼可見(jiàn)小顆粒，又由于其密度大于水，隨著時(shí)間的推移交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉顆粒會(huì)沉積在納氏比色管底部，形成明顯分層，晃動(dòng)納氏比色管又會(huì)形成懸浮于水中的肉眼可見(jiàn)小顆粒，因此無(wú)法達(dá)到完全的均一溶液進(jìn)行目視比色。

3.2 交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠是由透明質(zhì)酸原料加入一種或多種組合的化學(xué)交聯(lián)劑等經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)形成的最終產(chǎn)物，按照“1.4.1”項(xiàng)下試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，樣品未解交聯(lián)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，原理上硫化鈉試液只能和未交聯(lián)的透明質(zhì)酸鈉以及緩沖鹽體系中的重金屬進(jìn)行反應(yīng)，而凝膠顆粒內(nèi)部所含的重金屬無(wú)法與顯色劑反應(yīng)，實(shí)際上“1.4.1”項(xiàng)下試驗(yàn)未能體現(xiàn)樣品的重金屬總含量的檢測(cè)目的。

3.3 如試驗(yàn)“1.4.2”項(xiàng)下方法所進(jìn)行，通過(guò)過(guò)濾已經(jīng)完全反應(yīng)的未交聯(lián)的透明質(zhì)酸鈉凝膠以及緩沖鹽體系中的重金屬，截留交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠顆粒，通過(guò)加入一定量的重金屬標(biāo)準(zhǔn)溶液考察交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠顆粒對(duì)重金屬顯色反應(yīng)的影響，加標(biāo)試驗(yàn)顯示由于交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉顆粒的存在會(huì)產(chǎn)生散射作用，使鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液與硫化鈉的顯色反應(yīng)所呈現(xiàn)的顏色比正常狀態(tài)下兩者的顯色反應(yīng)所呈現(xiàn)的顏色淺，試驗(yàn)說(shuō)明由于交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠顆粒的存在致使反應(yīng)體系不能正確體現(xiàn)產(chǎn)品中的重金屬總含量的真實(shí)情況。

3.4 試驗(yàn)“1.4.3”項(xiàng)下通過(guò)消化處理交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，能全面考察產(chǎn)品中重金屬總量，既包括產(chǎn)品中游離透明質(zhì)酸鈉凝膠、緩沖鹽體系以及交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠顆粒內(nèi)的總金屬，又能避免交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠顆粒對(duì)顯色反應(yīng)的影響，在對(duì)含有鹽酸利多卡因的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，通過(guò)消化處理后，藥物也不會(huì)對(duì)該試驗(yàn)造成影響，說(shuō)明熾灼殘?jiān)ㄔ囼?yàn)適用性強(qiáng)，并且整個(gè)試驗(yàn)安全可控，建議企業(yè)可參考該方法進(jìn)行技術(shù)要求規(guī)定，以便更好地進(jìn)行產(chǎn)品檢測(cè)。