益西拉姆 楊春艷 羅珍

（西藏藏醫(yī)藥大學(xué)，西藏 拉薩 850000）

呼吸道感染是日常生活中的常見(jiàn)病、多發(fā)病，有多發(fā)性、普遍性、易感性的發(fā)病特征。上呼吸道感染有70%～80%由病毒引起，另有20%～30%的上感由細(xì)菌引起。目前治療上呼吸道感染主要有抗菌藥物、抗病毒藥物。七味螃蟹甲由高山螃蟹甲、高山辣根菜、訶子、天竺黃、甘草、檀香、丁香七味藥材組成。具有抗菌，抗炎、抗病毒、解熱、鎮(zhèn)咳祛痰等藥理作用，對(duì)上呼吸道感染也有一定療效。臨床用藥效果顯著，但由于兒童用藥不便，用藥劑量大等缺陷，應(yīng)用范圍存在一定的局限性。故本課題針對(duì)藏藥七味螃蟹甲在臨床經(jīng)驗(yàn)方基礎(chǔ)上不斷完善提取工藝和劑型改進(jìn)進(jìn)行研究。

高山螃蟹甲中含有氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)、酚類有機(jī)酸、黃酮、香豆素、蒽醌、三萜、甾體、皂苷等成分［1］。早期藥理研究表明，高山螃蟹甲中皂苷可能是鎮(zhèn)咳祛痰的有效成分。趙斌對(duì)藏藥螃蟹甲的鎮(zhèn)咳祛痰平喘作用的有效成分進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，藏藥螃蟹甲的乙酸乙酯部位、正丁醇部位均有較好的鎮(zhèn)咳祛痰平喘作用。也有研究表明螃蟹甲的乙酸乙酯部位和正丁醇部位均有較好的鎮(zhèn)痛抗炎作用。螃蟹甲的塊根進(jìn)行水提和醇提后的提取物對(duì)耐亞胺培南銅綠假單胞菌、葡萄球菌都有明顯的抗菌作用［2］。因此采用水提法提取螃蟹甲中的主要有效成分。

高山辣根菜是藏藥治療咳嗽的主要藥材之一?！恫蒯t(yī)卷》記載高山辣根菜具有清熱、養(yǎng)肺、止咳、退燒、滋補(bǔ)元?dú)獾墓πВ饕糜诜螣峒胺尾∫鸬目人?、咳血、肺水腫、氣管炎、發(fā)熱等的治療［3］。高山辣根菜用水提取后提取物對(duì)濃氨水、二氧化硫刺激引起的小鼠咳嗽有抑制作用，對(duì)枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽也有抑制作用，也能抑制二甲苯、角叉菜膠誘發(fā)的急性炎癥［4］。說(shuō)明高山辣根菜水提物對(duì)止咳及抗炎具有一定的作用。

訶子在我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥及少數(shù)名族藥用史中具有很高的藥用價(jià)值，享有“藏藥之王”之美譽(yù)?，F(xiàn)代天然藥物化學(xué)及藥理學(xué)研究表明，訶子主要藥效組分為鞣質(zhì)酚酸類、三萜類、黃酮類及多糖等，具有抗氧化、抗糖尿病、抗病原微生物、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、治療阿爾茲海默病及鎮(zhèn)咳等多種藥理作用［5］。其中鞣質(zhì)酚酸類是其最重要的一大類成分。根據(jù)成分分析可采用水提法取其有效成分。

甘草屬于三萜類化合物，其通過(guò)分離可以得到生物堿以及多糖等成分，具有較強(qiáng)的抗炎、抗病毒?？咕茸饔茫?］。甘草次酸對(duì)中樞鎮(zhèn)咳具有顯著的作用，通過(guò)水提法提取甘草中的主要有效成分總皂苷及總黃酮，提高藥效。

天竺黃具有清熱豁痰，涼心定驚的功效。用于熱病神昏，中風(fēng)痰迷，小兒痰熱驚癇、抽搐、夜啼。檀香揮發(fā)油具有抑菌作用。丁香中含有丁香酚、丁香酚乙酸乙酯、石竹烯等揮發(fā)性成分以及山奈酚、鼠李素等黃酮類成分，具有抗氧化、抗菌、抗炎、解熱、抗病毒等廣泛的藥理活性，丁香乙醇提取液具有良好的體外抗菌作用，毒副作用低。此次天竺黃、丁香、檀香打粉，過(guò)100目篩，粉末直接入藥。

天竺黃具有清熱豁痰，涼心定驚的功效。用于熱病神昏，中風(fēng)痰迷，小兒痰熱驚癇、抽搐、夜啼。檀香揮發(fā)油具有抑菌作用。丁香中含有丁香酚、丁香酚乙酸乙酯、石竹烯等揮發(fā)性成分以及山奈酚、鼠李素等黃酮類成分，具有抗氧化、抗菌、抗炎、解熱、抗病毒等廣泛的藥理活性，丁香乙醇提取液具有良好的體外抗菌作用，毒副作用低。此次天竺黃、丁香、檀香打粉，過(guò)100目篩，粉末直接入藥。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

DK-8D 電熱恒溫水浴鍋（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）；AL204-lC 電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；DZF-6053 真空干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）；藥篩（上虞市銀河測(cè)試儀器廠）。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

高山螃蟹甲、高山辣根、訶子、天竺黃、甘草、檀香、丁香七味藥材；矯味劑；糊精(成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號(hào):2020041301)；可溶性淀粉（成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號(hào):2020030501）；無(wú)水乙醇(成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號(hào):2020022102)均為藥用規(guī)格。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 方法

按照制劑組方配比，稱取高山螃蟹甲20g、高山辣根菜10g、訶子10g、甘草10g 四味藥材為1 劑，共9 劑，按表1 和表2 進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)提取，濾過(guò)，濾液合并，濃縮至一定體積（相對(duì)密度1.1～1.2,），置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，在80℃干燥2h，置干燥器中冷卻2h，稱重，計(jì)算浸膏得率。

四種藏藥材有效組分提取工藝以L9(33)正交試驗(yàn)的篩選，以溶劑量及煎煮次數(shù)和煎煮時(shí)間三因素為考察因素，用來(lái)確定制劑組方中有效藥用成分最佳提取工藝。考察指標(biāo)為提取率。

正交試驗(yàn)優(yōu)選煎煮提取工藝。表1 為試驗(yàn)因素，表2 為正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果，表3 為正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析。

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

表2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案表

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析表

2.2 制粒工藝

2.2.1 處方

處方1：高山螃蟹甲、高山辣根菜、訶子、甘草提取物5g，檀香6g，丁香10g,天竺黃10g細(xì)粉。

處方2：高山螃蟹甲細(xì)粉20g、高山辣根菜細(xì)粉10g、訶子細(xì)粉10g、甘草細(xì)粉10g、檀香6g、丁香10g、天竺黃10g細(xì)粉。

2.2.2 制備。將四味藥材提取液濃縮至流浸膏（相對(duì)密度1.1～1.2），加人檀香6g，丁香10g,天竺黃10g 和適量可溶性淀粉、淀粉漿，16目不銹鋼篩制粒，65℃干燥。將草莓味香精溶于乙醇噴灑在干燥顆粒表面。整粒，包裝。

將七味藥材按處方比例粉碎，過(guò)100目篩，加入不同濃度的乙醇制軟材，過(guò)，16目不銹鋼篩制粒，65℃干燥。將草莓味香精溶于乙醇噴灑在干燥顆粒表面。整粒，包裝。

對(duì)顆粒的粒度、水分、溶化性、成型率、松緊程度、口感等指標(biāo)，確定最適的配比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 七位螃蟹甲顆粒制粒工藝試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)果分析

正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)是研究多因素多水平試驗(yàn)的科學(xué)方法。本次試驗(yàn)是采用3 因素、3 水平正交試驗(yàn)的方法優(yōu)化提取工藝條件，采用多重試驗(yàn)的方法制定顆粒劑的制粒工藝。因此，本次實(shí)驗(yàn)我們?cè)嚥捎谜辉O(shè)計(jì)方法進(jìn)行七味螃蟹甲顆粒劑提取工藝的篩選。經(jīng)方差分析，對(duì)四味藥材的提取率，煎煮次數(shù)具有顯著性影響；煎煮時(shí)間的影響不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；溶劑量具有顯著性影響。煎煮次數(shù)的影響大于溶劑量大于煎煮時(shí)間。煎煮次數(shù)為三次時(shí)，效果最好?？梢?jiàn)最佳提取工藝為：A3B2C3，即煎煮次數(shù)3 次，時(shí)間1 小時(shí)，溶劑量為8。

圖1 方差分析過(guò)程

在制粒工藝的實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)6 次實(shí)驗(yàn)對(duì)比，處方1輔料中可溶性淀粉10g，10%淀粉漿8ml，所得顆粒各方面指標(biāo)良好，故選用該比例制粒。處方2 選用60%乙醇做為潤(rùn)濕劑，所得顆粒各方面指標(biāo)良好。質(zhì)量檢驗(yàn)均符合規(guī)定，說(shuō)明所制定的制粒工藝穩(wěn)定可靠。本處方由于藥材本身含糖量較高，不需要加入矯味劑口感適宜。

采用原藥材粉末按照組方制劑配方濕法制粒與四味藥材提取加三味藥材粉末直接入藥進(jìn)行濕法制粒兩種方式獲得七味螃蟹甲顆粒劑，為進(jìn)一步研究藥效奠定基礎(chǔ)。