李培勇

[摘要] 目的 探究生殖支原體對男性精液參數的影響。 方法 選擇2018年4月至2020年4月在本院進行不育癥治療的患者160例作為研究對象。全部患者均采集精液樣本，使用核酸擴增技術檢測精液樣本中有無生殖支原體感染，同時利用計算機系統(tǒng)分析全部精液樣本參數，通過Shorr染色技術觀察精子形態(tài)，并對精漿中γ-L-谷氨酰轉肽酶活性、果糖、α-葡糖苷酶以及鋅水平進行檢測。觀察全部患者中生殖支原體陽性感染例數及陰性例數，比較陽性感染者與陰性者的一般資料;比較生殖支原體陽性感染者與陰性者精漿指標及精液樣本參數。 結果 160例患者中，生殖支原體檢測顯示陽性感染者80例、陰性者80例，陽性感染組與陰性組患者在年齡及不育時間方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;兩組患者γ-L-谷氨酰轉肽酶、果糖、α-葡糖苷酶及鋅水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;陽性感染組患者精液量、精子濃度、精子活力及形態(tài)正常精子水平均低于陰性組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 結論 生殖支原體感染可降低精液量、精子濃度、精子活力及形態(tài)正常精子水平，因此需在診斷后及時采取有效措施進行治療。

[關鍵詞] 精液參數;生殖支原體;不育癥;核酸擴增技術;精液量

[中圖分類號] R697? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）03-0104-04

The influence of Mycoplasma Genitalium on semen parameters

LI Peiyong

Department of Reproductive Andrology， the First Affiliated Hospital of Xiamen University， Xiamen? ?361000， China

[Abstract] Objective To explore the influence of Mycoplasma Genitalium on semen parameters in males. Methods A total of 160 patients receiving treatment for infertility in our hospital were selected as study samples， and the study duration was from April 2018 to April 2020. Semen samples were collected from all the patients， and were detected by nucleic acid amplification technology for the presence of Mycoplasma Genitalium infection， and were analyzed by computer system for their parameters. Spermatozoa morphology was observed by Shorr staining， and γ-L-glutamyl transpeptidase activity， fructose， α-glucosidase， and zinc levels in seminal plasma were detected. The number of positive mycoplasma genitalium infections and that of negative Mycoplasma Genitalium infections in all patients were observed and the general data of positive and negative infections were compared; seminal plasma indexes and semen parameters were compared between positive and negative patients with Mycoplasma Genitalium. Results Of the 160 patients， 80 were tested positive and 80 were tested negative， and there was no significant difference in age and infertility time between the positive infection group and the negative group（P>0.05）. There was no significant difference in γ-L-glutamyl transpeptidase， fructose， α-glucosidase and zinc between the two groups（P>0.05）; the semen volume， sperm concentration， sperm motility and level of morphologically normal sperm of patients in the positive group were lower than those in the negative group， with significant differences（P<0.05）. Conclusion Mycoplasma Gentiformis infection reduces the semen volume， sperm concentration， sperm motility and level of morphologically normal sperm. Therefore， effective treatment should be given in time after diagnosis.

[Key words] Semen parameters; Mycoplasma Genitalium; Infertility; Nucleic acid amplification technology; Volume of semen

不育癥指正常育齡期夫婦正常性生活1年或更長時間，未采取避孕措施出現未生育的情況[1]。臨床有研究顯示，已婚夫婦出現不育癥者占15%[2]，并且男性不育癥發(fā)病率達到30%。隨著臨床對不育癥研究的不斷深入，發(fā)現生殖道感染在導致不育癥的原因中最為常見，近年來隨著性傳播疾病發(fā)病率的升高，生殖道感染性疾病發(fā)病率也逐漸升高，并且疾病嚴重程度也明顯增加，對男性生育能力產生嚴重影響。生殖支原體是全部支原體中基因組最小的一種，生殖支原體由于分離難度較大，因此無法進行培養(yǎng)檢測。當前，臨床有報道顯示[3]，男性感染生殖支原體后會導致精液質量有顯著降低，并且還可發(fā)生不育癥，對男性生育功能產生不利影響，但目前臨床對這一說法尚未形成統(tǒng)一結論。因此，本研究對本院治療的不育癥男性患者160例進行精液質量檢查，探討精液質量與生殖支原體感染之間關系，現報道如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料

選擇2018年4月至2020年4月本院治療的不育癥患者160例作為研究對象，年齡24～45歲，平均（32.22±2.98）歲。納入標準[4]：①正常性生活≥1年且未進行任何避孕措施者;②患者及其家屬知情同意，在充分了解研究目的及研究方法后表示自愿參加研究。排除標準[5]：①患有全身性感染疾病者;②近期有外傷史者;③存在精索靜脈曲張、附睪結核及先天性性腺發(fā)育不良等疾病者;④有家族遺傳病史者;⑤存在嚴重認知功能障礙，無法正常進行言語交流者;⑥肝腎功能有明顯異常者;⑦不配合研究者;⑧女性因素導致不孕癥者。由于其他類型生殖道感染會對精子質量產生一定影響，因此在進行精子參數比較時將有沙眼衣原體、淋病奈瑟菌及解脲支原體感染的患者排除。本研究經醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核通過。

1.2 方法

指導全部患者在檢查前3～7 d禁欲，檢查時使用新潔爾滅消毒劑棉球對尿道口、陰莖頭及雙手進行消毒，之后再使用含有無菌生理鹽水的棉球對消毒部位再次擦拭，通過手淫的方式采集精液，并放置在無菌容器盒中，精液采集后立即放置在37℃水浴箱中液化。精液液化后，使用移液器吸取100 μL精液至標本保存管中，震蕩混勻，放置在-20℃環(huán)境中保存，進行支原體檢測樣本采集;吸取2.0 mL精液進行精子質量檢測;剩余精液樣本置于3000 r/min的離心機中進行持續(xù)10 min的離心處理，并分離精漿，對精漿進行生化檢測。對精液樣本進行生殖支原體檢測時，使用生殖支原體PCR檢測試劑盒（上海仁度生物科技有限公司）、實時熒光恒溫擴增檢測儀（濟南君意生物科技有限公司），全部操作均嚴格依據試劑盒使用說明進行。操作步驟包括，分別設定陽性及陰性對照，選擇400 μL含有樣本保存液的精液樣本及100 μL核酸提取液，將其充分混合均勻后放置在60℃恒溫環(huán)境中反應5 min，隨后放置在室溫環(huán)境下10 min，最后置于磁珠分離器上進行5 min靜置處理，丟棄液體，分別添加2次洗滌液進行洗滌，保留與磁珠結合的RNA，隨后添加40 μL核酸反應液。將其中30 μL轉移至PCR反應試管中，首先放置在60℃環(huán)境中持續(xù)反應10 min，之后放置在42℃環(huán)境中持續(xù)反應5 min，最后添加42℃預熱的SAT酶，在42℃環(huán)境中實時恒溫擴增40 min;擴增后出現的RNA拷貝和優(yōu)化的探針進行特異性結合并出現熒光信號，利用檢測儀分析熒光信號。使用精漿生化檢測試劑盒（深圳市博銳德生物科技有限公司）進行精漿檢測，其中γ-L-谷氨酰轉肽酶活性及α-葡糖苷酶通過速率法進行檢測，鋅則通過1-（2-吡啶偶氮）2-萘酚法進行檢測，將95%CI作為判斷正常參考范圍的標準;果糖通過已糖激酶法進行檢測，其參考范圍主要是通過對100例正常男性精漿樣本進行檢測，觀察第5百分位數進行確定。γ-L-谷氨酰轉肽酶該批次內變異系數≤8%，批次間變異系數≤10%;果糖批次內變異系數≤5%，批次間變異次數≤7%;α-葡糖苷酶批次內變異系數≤7%，批次間變異系數≤8%;鋅批次內變異系數≤7%，批次間變異系數≤8%。采用精子質量分析儀（徐州市寶興醫(yī)療設備有限公司）對精子質量進行檢測。通過Shorr染色技術觀察精子形態(tài)，該項措施由實驗室專業(yè)人員進行人工操作。

1.3觀察指標

觀察所有患者精液樣本中生殖支原體感染情況，并分析陽性感染者與陰性者的一般資料，主要包含年齡及不育時間。比較生殖支原體陽性感染者與陰性者精漿指標及精液樣本參數，其中γ-L-谷氨酰轉肽酶、果糖、α-葡糖苷酶及鋅屬于精漿指標，精液量、精子濃度、精子活力及形態(tài)正常精子屬于精液樣本參數。

1.4統(tǒng)計學方法

應用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數據分析，計量資料用（x±s）表示，采用t檢驗;計數資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較

在160例患者中，有80例（50.00%）出現生殖支原體感染，有80例（50.00%）檢測結果呈陰性。陽性感染組與陰性組患者在年齡及不育時間方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 兩組精漿指標及精液參數比較

兩組患者在γ-L-谷氨酰轉肽酶、果糖、α-葡糖苷酶及鋅水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;陽性感染組患者精液量、精子濃度、精子活力及形態(tài)正常精子水平均低于陰性組，兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

3討論

生殖支原體于1981年從非淋菌性尿道炎男性患者中被分離出來，但是受到分離培養(yǎng)困難及生殖支原體致病性有待證實等因素影響，臨床對此研究較少;直至1985年通過進行聚合酶鏈式反應的DNA擴增技術，使得臨床對生殖支原體的關注度大大提升[6]。生殖支原體是人類泌尿生殖道感染潛在的病原體，同時也是人類泌尿生殖道感染的重要原因之一。隨著臨床對生殖支原體研究的不斷深入，有研究顯示，其在導致男性不育癥方面可能與其從多個層面直接或間接對生殖器官造成損害有關，進而阻礙精子發(fā)育及成熟、堵塞精子運輸通道，進一步使機體出現抗精子抗體、降低精子運動功能[7]。但也有研究結果顯示，生殖支原體導致男性不育癥可能是由于感染生殖支原體后，其可依附在精子表面，從而降低精子活性，最終導致不育癥[8]。鑒于此，臨床將探討精液質量與生殖支原體感染之間的關聯(lián)性作為研究重點。

γ-L-谷氨酰轉肽酶在谷胱甘肽代謝過程中發(fā)揮重要作用，其可保護精子免遭氧化應激反應的損傷[9]。α-葡糖苷酶檢測是臨床男性常規(guī)檢測項目，檢測其水平可反映附睪分泌能力[10]。本研究中，陽性感染者與陰性者在γ-L-谷氨酰轉肽酶、α-葡糖苷酶、果糖及鋅水平方面均無顯著差異，對于生殖支原體感染是否影響精漿生化指標還需臨床進一步研究。朱來晴等[11]的研究結果顯示，生殖支原體感染者的精液量為（3.20±1.30）mL，未感染者精液量為（3.57±1.36）mL，因此其認為男性感染生殖支原體后會導致其精液量下降，進而影響其生育功能。本研究中，陰性組患者精液量為（3.68±1.09）mL，顯著高于陽性感染組的（3.11±1.01）mL;陽性感染組精子濃度為（50.79±16.92）×106/mL，顯著低于陰性組的（56.88±17.01）×106/mL;陰性組患者精子活力為（45.98±13.22）%，顯著高于陽性感染組的（41.67±12.88）%;陰性組患者形態(tài)正常精子水平為（5.82±1.92）%，顯著高于陽性感染者的（5.25±1.55）%（P<0.05）。分析結果可知，正常精液屬于黏稠狀液體混合物，主要由精漿及精子構成，其中精漿占比超過90%。在精漿中含有豐富的蛋白質、果糖、多肽、水、無機鹽、前列腺素、葡萄糖及有機小分子物質，可為精子提供營養(yǎng)和能源[12]。但當機體感染生殖支原體后，支原體會吸附在精子的頭、體及尾各段，直接影響精子活力，精子吸附大量支原體后，則會喪失運動能力，導致大量精子黏連，影響精子質量;由于炎癥影響會導致精液量下降，無法為精子發(fā)育提供充足營養(yǎng)，導致精子活力下降，對男性生育功能產生不利影響[13-15]。由于RNA在環(huán)境中極不穩(wěn)定，并且在支原體死后可快速降解，通過對RNA保存液進行實時熒光核酸恒溫擴增檢測技術檢測，可一定程度上避免RNA降解，同時經該技術檢測到的生殖支原體水平則代表處于存活狀態(tài)的生殖支原體，可協(xié)助醫(yī)師準確掌握患者機體內生殖支原體水平，對于判斷臨床用藥效果具有積極意義[16-17]。

綜上所述，生殖支原體感染會導致精液量顯著下降，對精液質量產生不利影響。但本研究存在樣本量較少、研究時間較短等問題，因此還需后續(xù)擴大樣本量及延長研究時間來做進一步研究。

[參考文獻]

[1] Qian YC，Xie YX，Wang CS，et al.Mkrn2 deficiency induces teratozoospermia and male infertility through p53/PERP-mediated apoptosis in testis[J].Asian Journal of Andrology，2020，22（4）：414-421.

[2] 邵麗佳，朱德勝，陳偉，等.MTHFR C677T基因、血清同型半胱氨酸與特發(fā)性男性不育癥的關系研究[J].浙江醫(yī)學，2019，41（10）：1013-1016，1020.

[3] 閆澤晨，商學軍，劉瑋，等.生殖支原體感染對男性不育患者精液質量的影響[J].中華男科學雜志，2018，24（4）：317-321.

[4] 梁嘉穎，鄭毅春，張杰，等.應用單層和雙層密度梯度離心法處理男性不育癥患者精液效果對比[J].實用醫(yī)學雜志，2019，35（20）：3182-3187.

[5] 劉利敏，謝慶東，凌曉輝，等.精漿ROS、PON-1、MDA聯(lián)合精子DNA碎片指數在男性不育癥患者中的研究[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2019，40（12）：1435-1438.

[6] 石華，歐陽斌，黃亮亮，等.RNA恒溫擴增技術檢測沙眼衣原體、生殖支原體及解脲支原體在男科門診中的臨床價值[J].中國性科學，2019，28（7）：138-141.

[7] Ribas-Maynou J，Yeste M.Oxidative stress in male infertility：Causes，effects in assisted reproductive techniques，and protective support of antioxidants[J].Biology，2020，9（4）：77.

[8] Ajuogu PK，Al-Aqbi MAK，Hart R.The effect of dietary protein intake on factors associated with male infertility：A systematic literature review and meta-analysis of animal clinical trials in rats[J].Nutrition and Health，2020， 26（1）：53-64.

[9] 張永紅，夏良海，方師群.男女性泌尿生殖系統(tǒng)支原體感染者支原體類型差異及藥敏動態(tài)分析[J].中華實驗和臨床感染病雜志（電子版），2018，12（2）：123-127.

[10] 劉鵬，孫建明，遲令侃，等.特發(fā)性少弱精患者精漿α-葡糖苷酶、鋅與精子形態(tài)學參數相關性分析[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2017，38（16）：2185-2187.

[11] 朱來晴，汪珣，孫國海，等.生殖支原體感染對不育男性精液相關參數的影響[J].中華男科學雜志，2018，24（10）：903-906.

[12] 張劍波，尹國良，徐新蓉，等.男性泌尿生殖道支原體和衣原體感染對精液質量影響與不育關系分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2016，24（2）：120-121.

[13] 葉莎.分析泌尿生殖道支原體感染情況及藥敏分析結果[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2019，16（19）：2807-2810.

[14] 王宏波，王宇鵬，李皇慶，等.長沙地區(qū)1409例泌尿生殖道支原體感染者的感染狀況及藥敏分析[J].中國微生態(tài)學雜志，2020，32（2）：172-175，179.

[15] 黃秀榮.生殖支原體與泌尿生殖道疾病的研究進展[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2019，16（10）：1444-1447.

[16] 李哲銘，劉冬冬，陳攀，等.谷胱甘肽S-轉移酶基因多態(tài)性與特發(fā)性男性不育患者氧化應激水平的關系[J].貴州醫(yī)科大學學報，2019，44（11）：1268-1272.

[17] 楊書才，唐景云，周杰，等.6493例泌尿生殖道感染患者解脲支原體和人型支原體感染情況及藥敏試驗分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2019，16（13）：1888-1891.

（收稿日期：2020-07-14）