孟 君，秦畫(huà)置?，周 揚(yáng)，李 丹，劉昊奇，鄧郊梅，楊 知

（1.株州千金藥業(yè)股份有限公司，株州 412000；2.湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，長(zhǎng)沙 400125）

痛經(jīng)（dysmenorrhea）是一種較為常見(jiàn)的婦科疾病，已經(jīng)嚴(yán)重影響婦女正常工作和生活。痛經(jīng)是指出現(xiàn)在月經(jīng)期和月經(jīng)期前后的周期性下腹痛，常發(fā)生在月經(jīng)前和月經(jīng)期，偶爾發(fā)生在月經(jīng)期后數(shù)日內(nèi)[1-3]。痛經(jīng)的癥狀：下腹部呈痙孿性疼痛，有的會(huì)痛引腰骶，甚至嚴(yán)重者可能會(huì)出現(xiàn)劇痛難忍，并伴有惡心嘔吐，頭昏厥逆[4-5]。痛經(jīng)分為原發(fā)性和繼發(fā)性?xún)煞N痛經(jīng)。原發(fā)性痛經(jīng)是指痛經(jīng)在初潮后的幾年內(nèi)發(fā)生且生殖器官無(wú)器質(zhì)性病變者[6]。中醫(yī)認(rèn)為痛經(jīng)的病機(jī)是邪氣內(nèi)伏，氣血阻滯造成不通則痛或者說(shuō)不榮則痛。痛經(jīng)患者的食療方法主要有以下幾種：姜棗紅糖水（將干姜切片，紅棗去核，煎煮后把紅糖放下溶開(kāi)，喝湯吃大棗，具有溫經(jīng)通絡(luò)的作用）、當(dāng)歸生姜羊肉湯（在煲羊肉的時(shí)候適當(dāng)?shù)姆湃氘?dāng)歸和生姜，既可以去腥又可溫通經(jīng)絡(luò)，食用時(shí)可加適量的黃酒，對(duì)治療痛經(jīng)十分有效）、山楂葵瓜子紅糖湯（將山楂和葵瓜子煎炒后磨成粉，用紅糖沖服）。其中姜和紅糖是痛經(jīng)食療中比較常用的食材。而藤茶，不是茶，殊勝茶。藤茶是一種藥食兩用的植物，《中國(guó)中草藥匯編》記載：藤茶味甘淡，性涼，具有清熱解毒，降暑生津，祛風(fēng)濕，強(qiáng)筋骨，消炎利尿，抗心律失常，抗心肌缺血，緩解酒精作用等功效。長(zhǎng)期飲用對(duì)皮膚癬癩，黃疸性肝炎，感冒風(fēng)熱，咽喉腫痛，急性結(jié)膜炎，痛癤，高血壓，高血脂，高血糖，護(hù)扶養(yǎng)顏等都有極好作用。姜藤茶由紅糖、姜、藤茶、低聚木糖和菊花等組成，具有舒緩?fù)唇?jīng)等功能。本實(shí)驗(yàn)對(duì)姜藤茶的藥理作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，為姜藤茶開(kāi)發(fā)提供了試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 藥品和試劑

姜藤茶（原料成分為紅糖、姜、藤茶、低聚木糖和菊花），批號(hào) 20180930：株州千金藥業(yè)股份有限公司；痛經(jīng)寶（原料成分為紅花，當(dāng)歸，肉桂，三棱，莪術(shù)，丹參，五靈脂，木香和延胡索（醋制）），批號(hào)180901：仲景宛西制藥股份有限公司；阿司匹林（原料成分為乙酰水楊酸），批號(hào) 1802086：阿斯利康制藥有限公司；苯甲酸雌二醇，批號(hào)180802：四川省泰信動(dòng)物藥業(yè)有限公司；縮宮素，批號(hào)170816：馬鞍山豐原制藥有限公司；鹽酸腎上腺素注射液，批號(hào)180104：丹東醫(yī)創(chuàng)藥業(yè)有限責(zé)任公司；大鼠 6酮前列腺素F1α試驗(yàn)盒，批號(hào) 2018-12、大鼠 β-內(nèi)腓肽試驗(yàn)盒，批號(hào)2018-12：江蘇晶美生物科技有限公司。

1.1.2 儀器

ES-1000E 電子天平：長(zhǎng)沙湘平科技有限公司；16號(hào)灌胃器：東西儀器（北京）科技有限公司；一次性使用人體靜脈血樣采集容器：湖南省瀏陽(yáng)市醫(yī)用儀具廠；一次性使用血樣采集針：山東省奧賽特醫(yī)療器械有限公司；SA-6000全自動(dòng)血液動(dòng)態(tài)粘度分析儀：北京賽科希德科技發(fā)展有限公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠：湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（湘）2016-0002，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK（湘）2014-0012，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào) No.43004700054992、No.43004700055436，湖南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施使用證明No.00091337、No.00091531）。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)痛經(jīng)模型大鼠的影響

1.2.1.1 分組及造模 SD大鼠，雌性，70只，隨機(jī)分為7組：空白對(duì)照組，模型組，姜藤茶低、中、高劑量組，痛經(jīng)寶顆粒組，阿司匹林組。除空白組皮下注射生理鹽水外，其余60只，皮下注射苯甲酸雌二醇，連續(xù)10 d，1次/d（第1 d：0.5 mg/只，第 2～9 d：0.2 mg/只，第 10 d：0.5 mg/只）。

1.2.1.2 治療方法 造模同時(shí)給藥，空白、模型組（蒸餾水），姜藤茶低、中、高劑量組（1.8、3.6、7.2 g/kg），痛經(jīng)寶顆粒組（3.6 g/kg），阿司匹林組（0.1 g/kg），灌胃體積10 mL/kg，1次/d，連續(xù)10 d。

1.2.1.3 檢測(cè)指標(biāo) 最后一次給藥后1 h，腹腔注射縮宮素10 U/只，觀察30 min內(nèi)大鼠疼痛反應(yīng)，以扭體反應(yīng)（大鼠腹部收縮內(nèi)凹，軀干與后肢伸展，臀部與一側(cè)肢體內(nèi)旋）為子宮強(qiáng)烈收縮（痛經(jīng)）的指標(biāo)。30 min后，大鼠麻醉，腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min 離心15 min，取上清液，ELISA試劑盒測(cè)定β-內(nèi)腓肽（β-EP）和6酮前列腺素F1α的濃度。取子宮、卵巢，固定于福爾馬林溶液中，HE染色，觀察組織形態(tài)的變化。

1.2.2 對(duì)寒凝血瘀模型大鼠的影響

1.2.2.1 分組及給藥 SD大鼠，雌性，70只，隨機(jī)分為7組：空白對(duì)照組（蒸餾水），模型組（蒸餾水），姜藤茶低、中、高劑量組（1.8、3.6、7.2 g/kg），痛經(jīng)寶顆粒組（3.6 g/kg），阿司匹林組（0.1 g/kg）。灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7 d，給藥體積10 mL/kg。

1.2.2.2 造模 第6、7 d給藥1 h后，皮下注射鹽酸腎上腺素注射液 0.6 mg/kg，大鼠浸入冰水（0～2 ℃）刺激1次，4 h后再次注射鹽酸腎上腺素注射液，造成大鼠寒凝血瘀證模型。

1.2.2.3 指標(biāo)檢測(cè) 次日腹主動(dòng)脈取血，SA-6000全自動(dòng)血液動(dòng)態(tài)粘度分析儀測(cè)定大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)（全血粘度、血漿粘度）及紅細(xì)胞壓積。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析方法

2 結(jié)果

2.1 對(duì)痛經(jīng)模型大鼠的影響

2.1.1 對(duì)扭體次數(shù)、β-內(nèi)腓肽和6酮前列腺素F1α的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組扭體次數(shù)顯著增加（P＜0.01）；與模型組比較，姜藤茶低、中、高劑量組、痛經(jīng)寶組和阿司匹林組大鼠扭體次數(shù)顯著降低（P＜0.01）。與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠β-內(nèi)腓肽（β-EP）和6酮前列腺素F1α顯著降低（P＜0.01），與模型組比較，姜藤茶高劑量組和痛經(jīng)寶組大鼠 β-EP顯著升高（P＜0.01），且痛經(jīng)寶組大鼠6酮前列腺素F1α顯著升高（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 姜藤茶對(duì)扭體次數(shù)、β-內(nèi)腓肽和6酮前列腺素F1α的影響（±SD，n=10）Table 1 Effect of jiangtengcha on writhing times,β-endorphin and 6-keto-prostaglandin F1α (±SD,n=10)

表1 姜藤茶對(duì)扭體次數(shù)、β-內(nèi)腓肽和6酮前列腺素F1α的影響（±SD，n=10）Table 1 Effect of jiangtengcha on writhing times,β-endorphin and 6-keto-prostaglandin F1α (±SD,n=10)

注：與空白對(duì)照組比較，“*”表示 P＜0.05，“**”表示 P＜0.01；與模型組比較，“Δ”表示 P ＜0.05，“ΔΔ”表示 P ＜0.01。

組別 扭體次數(shù)/（次/30 min) β-內(nèi)腓肽/（pg/mL） 6酮前列腺素F1α/（ng/L）空白對(duì)照組 0.00±0.00 3 774.86±391.82 954.23±83.00模型組 10.90±0.99** 2 913.26±270.43** 747.72±137.99**低劑量組 7.30±0.67ΔΔ 2 983.79±145.79 751.40±93.14中劑量組 5.00±0.67ΔΔ 3 113.41±261.51 769.03±54.03高劑量組 3.10±0.74ΔΔ 3 424.75±229.93ΔΔ 817.61±52.86痛經(jīng)寶組 3.30±0.67ΔΔ 3 679.55±388.71ΔΔ 908.31±99.29ΔΔ阿司匹林組 2.50±0.53ΔΔ 3 176.31±315.06 800.36±115.00

2.1.2 對(duì)子宮和卵巢組織學(xué)的影響

子宮和卵巢組織學(xué)顯示，空白對(duì)照組動(dòng)物卵巢結(jié)構(gòu)和形態(tài)發(fā)育正常，卵泡形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，無(wú)異常；子宮內(nèi)膜間質(zhì)內(nèi)均可見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，屬于正常發(fā)情期變化。模型組卵巢結(jié)構(gòu)和形態(tài)發(fā)育正常，卵泡形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，無(wú)異常；子宮內(nèi)膜無(wú)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)發(fā)情期變化。姜藤茶低劑量組卵巢結(jié)構(gòu)和形態(tài)發(fā)育正常，卵泡形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，無(wú)異常；1例正常發(fā)情期變化，子宮內(nèi)膜間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。姜藤茶中劑量組和痛經(jīng)組卵巢結(jié)構(gòu)和形態(tài)發(fā)育正常，卵泡形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，無(wú)異常；2例正常發(fā)情期變化，子宮內(nèi)膜間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。姜藤茶高劑量組和阿司匹林組卵巢結(jié)構(gòu)和形態(tài)發(fā)育正常，卵泡形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，無(wú)異常；3例正常發(fā)情期變化，子宮內(nèi)膜間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 子宮和卵巢組織學(xué)圖（HE）Fig.1 Histology of uterus and ovary (HE)

2.2 對(duì)寒凝血瘀模型大鼠的影響

2.2.1 對(duì)紅細(xì)胞壓積的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠紅細(xì)胞壓積顯著增加（P<0.05）；與模型組比較，藥物組紅細(xì)胞壓積均有減少，但都未見(jiàn)明顯差異（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 姜藤茶對(duì)紅細(xì)胞壓積的影響（X ± SD，n=10）Table 2 Effect of jiangtengcha on hematocrit (X ± SD,n=10)

2.2.2 對(duì)寒凝血瘀證大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響

與空白對(duì)照組比較，寒凝血瘀證模型組大鼠全血低、中、高切粘度，低切相對(duì)值，紅細(xì)胞聚集指數(shù)都顯著增高（P＜0.01），卡松粘度明顯增加（P<0.05）；與模型組比較，姜藤茶中劑量組全血低切粘度和低切相對(duì)值有明顯降低（P<0.05）；姜藤茶高劑量組全血低、中、高切粘度，低切相對(duì)值和紅細(xì)胞聚集指數(shù)顯著降低（P＜0.01），卡松粘度明顯降低（P<0.05）；痛經(jīng)寶組全血低、中、高切粘度顯著降低（P＜0.01），低切相對(duì)值和卡松粘度明顯降低（P<0.05）；阿司匹林組全血低、中、高切粘度，低切相對(duì)值，紅細(xì)胞聚集指數(shù)和卡松粘度顯著降低（P＜0.01），高切相對(duì)值明顯降低（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3、4。

表3 對(duì)寒凝血瘀證大鼠血液流變學(xué)的影響（X ± SD，n=10）Table 3 Effect on Hemorheology of rats with cold blood stasis syndrome (X ± SD,n=10)

表4 對(duì)寒凝血瘀證大鼠血液流變學(xué)的影響（X ± SD，n=10）Table 4 Effect on Hemorheology of rats with cold blood stasis syndrome (X ± SD,n=10)

3 討論

“痛經(jīng)”最早來(lái)自《金匱要略》中提到的“經(jīng)水不利，少腹?jié)M痛”。《中醫(yī)婦科學(xué)》教材中，將痛經(jīng)分為以下類(lèi)型：氣滯血瘀、寒凝血瘀、濕熱蘊(yùn)結(jié)、氣血虛弱、腎氣虧損[7]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為，神經(jīng)內(nèi)分泌失調(diào)引起的子宮張力增加和過(guò)度痙攣性收縮都可引起原發(fā)性痛經(jīng)，而激素水平失調(diào)、催產(chǎn)素、加壓素以及某些自主神經(jīng)系統(tǒng)遞質(zhì)如內(nèi)皮素等與痛經(jīng)的發(fā)病直接相關(guān)[8-9]。

方玲等[10]考察臨床經(jīng)驗(yàn)方劑經(jīng)前三劑止痛方（JQF）對(duì)痛經(jīng)模型大鼠子宮前列腺素和雌激素、孕激素的調(diào)節(jié)作用，JQF能夠有效調(diào)節(jié)痛經(jīng)模型大鼠子宮組織中前列腺素和雌激素、孕激素水平，從而抑制子宮平滑肌收縮，降低子宮平滑肌緊張度，可能是其治療痛經(jīng)的作用機(jī)制。朱世鵬[11]用粗針深刺結(jié)合手法與細(xì)針淺刺不做手法的刺激量對(duì)寒凝型痛經(jīng)大鼠都有鎮(zhèn)痛效果，兩者比較有顯著性差異。不同針刺刺激量對(duì)子宮LTB4含量存在不同的調(diào)節(jié)趨勢(shì)，其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究證明。

本實(shí)驗(yàn)采用苯甲酸雌二醇和縮宮素構(gòu)建痛經(jīng)模型時(shí)，腹腔注射縮宮素30 min內(nèi)，模型組大鼠出現(xiàn)劇烈扭體反應(yīng)，而空白對(duì)照組無(wú)扭體反應(yīng)，且兩者扭體反應(yīng)有顯著性差異，說(shuō)明痛經(jīng)模型構(gòu)建成功[12-15]。而姜藤茶劑量組與模型組比較，扭體反應(yīng)有顯著差異，說(shuō)明姜藤茶對(duì)痛經(jīng)模型大鼠有較好的療效，對(duì)痛經(jīng)改善有改善作用。大量文獻(xiàn)研究表明[16-18]，β-內(nèi)啡肽（β-EP）具有內(nèi)源性鎮(zhèn)痛作用。β-EP是新的神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)節(jié)物質(zhì)同時(shí)具有嗎啡樣活性的神經(jīng)多肽，在鎮(zhèn)痛及激素的分泌等調(diào)節(jié)起到作用。其參與生殖內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)，調(diào)控下丘腦-垂體的功能方面起重要作用[19-21]。在痛經(jīng)模型試驗(yàn)中，對(duì)血清中 β-EP濃度進(jìn)行檢測(cè)，模型組β-EP含量降低，使其鎮(zhèn)痛作用降低，動(dòng)物模型痛經(jīng)的發(fā)生可能與 β-EP的釋放和活性降低等因素有關(guān)，而與模型組比較，姜藤茶高劑量組大鼠β-EP顯著升高，從扭體方面可以得到驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)表明姜藤茶對(duì)痛經(jīng)機(jī)理有一定影響。

另外，寒凝血瘀，使血流速度減慢，血滯于脈絡(luò)，造成血瘀[22-23]。采用冰浴+鹽酸腎上腺素制備寒凝血瘀模型[24-25]時(shí)，與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠全血低、中、高切粘度，低切相對(duì)值，紅細(xì)胞聚集指數(shù)都顯著增高，表明寒凝血瘀模型構(gòu)建成功。與模型組比較，姜藤茶中劑量組全血低切粘度和低切相對(duì)值有明顯降低；姜藤茶高劑量組全血低、中、高切粘度，低切相對(duì)值和紅細(xì)胞聚集指數(shù)顯著降低，卡松粘度明顯降低，說(shuō)明姜藤茶能降低寒凝血瘀模型大鼠全血粘度及血漿粘度，表明姜藤茶對(duì)寒凝血瘀證有一定的改善作用。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)痛經(jīng)和寒凝血瘀兩種模型鼠的一系列研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：姜藤茶能減輕痛經(jīng)大鼠的扭體次數(shù)，提高了β-內(nèi)腓肽和6酮前列腺素F1α水平含量，對(duì)痛經(jīng)有一定改善作用。姜藤茶能降低寒凝血瘀模型大鼠全血粘度及血漿粘度，對(duì)寒凝血瘀有一定治療效用。但姜藤茶對(duì)痛經(jīng)和寒凝血瘀模型大鼠在作用機(jī)制還不明確，還需進(jìn)一步研究。