前言

本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標準由中國輕工業(yè)聯合會提出。

本標準由全國口腔護理用品標準化技術委員會(sac/TC492)歸口。

本標準起草單位：蘇州世譜檢測技術有限公司、廣州華鑫檢測技術有限公司、蘇州綠葉日用品有限公司、蘇州質量檢測科學研究院、廣州質量監(jiān)督檢測研究院、黑龍江省輕工科學研究院、青蛙王子(中國)日化有限公司、無限極(中國)有限公司、江蘇省產品質量監(jiān)督檢驗研究院、河北省食品檢驗研究院、江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院、江蘇省藥品監(jiān)督管理局蘇州檢查分局、蘇州市藥品檢驗檢測研究中心、常州市食品藥品監(jiān)督檢驗中心、常州檢驗檢測標準認證研究院。

本標準主要起草人：尋知慶、宋淑文、葉竹洪、劉冬、代丹、尚維、王景、孟玉、張征、張巖、陳杰峰、孫紅梅、溫文忠、周奇、褚葉果、陳衛(wèi)、李紅玉、李穎怡、施兵、汪晨霞、李冬亮、郭燕華、朱丹丹、郭新東、吳玉鑾、黃志寧、劉群林、高紅影、朱釔蓉、周飛、吳燕鵬、郭夢婷、盧劍。

1 范圍

本標準規(guī)定了牙膏中氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽5種殺菌劑含量的測定高效液相色譜法的原理、試劑或材料、儀器設備、試驗步驟、試驗數據處理、檢出限與定量限、回收率和精密度。

本標準適用于牙膏和漱口水中氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽含量的測定。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。

3 原理

試樣經甲酸-甲醇-水混合溶液超聲提取后，用高效液相色譜法測定，以保留時間定性，外標法定量。

4 試劑或材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1甲酸：色譜純。

4.2三氟乙酸：色譜純。

4.3甲醇：色譜級。

4.40.1%甲酸甲醇溶液：準確移取1mL甲酸(見4.1)，用甲醇(見4.3)稀釋至1L。

4.50.1%甲酸溶液：準確移取1mL甲酸(見4.1)，用水稀釋至1L。

4.6甲酸-甲醇-水混合溶液：準確量取80mL0.1%甲酸甲醇溶液(見4.4)和20mL0.1%甲酸溶液(見4.5)，混勻。

4.70.1%三氟乙酸甲醇溶液：準確移取1mL三氟乙酸(見4.2)，用甲醇(見4.3)稀釋至1L。

4.80.1%三氟乙酸溶液：準確移取1mL三氟乙酸(見4.2)，用水稀釋至1L。

4.9標準物質：氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽，純度≥98%，其中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量及結構式參見附錄A中表A.1。

4.10標準貯備液(各為1000mg/L)：準確稱取己脒定二(羥乙基磺酸)鹽標準物質(見4.9)0.1g(精確至0.1mg)，置于100mL棕色容量瓶中，用水溶解并定容。準確稱取氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚標準物質(4.9)各0.1g(精確至0.1mg)，分別置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇(見4.3)溶解并定容。于0℃～4℃避光條件下保存，可保存3個月。

4.11混合標準中間工作溶液(各為100mg/L)：準確移取氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽標準貯備液(見4.10)各1mL，置于10mL 棕色容量瓶中，用甲醇(4.3)稀釋并定容，現配現用。

4.12濾膜：孔徑為0.22μm的有機過濾膜。

5 儀器設備

5.1高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器。

5.2分析天平：感量0.001g和0.0001g。

5.3離心機：最高轉速不低于10000r/min。

5.4超聲波清洗儀：工作功率不低于40kHz。

5.5漩渦振蕩器。

6 試驗步驟

6.1試樣處理

準確稱取1.0g(精確至0.001g)試樣，置于15mL具塞離心管中，加入5.0mL甲酸-甲醇-水混合溶液(見4.6)，于漩渦振蕩器上振蕩混勻后，超聲提取15min，冷卻至室溫，轉移至10mL容量瓶中。用3mL甲酸-甲醇-水混合溶液(見4.6)分2次洗滌離心管，洗滌液轉移至容量瓶中，然后用甲酸-甲醇-水混合溶液(見4.6)定容至刻度。取部分溶液于離心管中，10000r/min離心5min，上清液經濾膜過濾后，待高效液相色譜儀測定。

6.2液相色譜參考工作條件

液相色譜參考工作條件如下：

a)色譜柱：C18柱，5μm，150mm×4.6mm(內徑)；

b)流動相：A：0.1%三氟乙酸甲醇溶液(見4.7)，B：0.1%三氟乙酸溶液(見4.8)，梯度洗脫條件見表1；

c)流量：1.0mL/min；

d)柱溫：30℃；

e)進樣量：20μL；

f)波長：280nm。

表1 梯度洗脫條件

6.3標準工作曲線制作

用甲酸-甲醇-水混合溶液(見4.6)逐級稀釋混合標準中間工作溶液(見4.11)，得到質量濃度為0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L系列混合標準工作溶液，按色譜條件(見6.2)進行測定，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標作圖，制作標準工作曲線。

標準溶液的液相色譜圖見附錄B中圖B.1。

6.4試樣測定

按色譜條件(見6.2)測定試樣溶液(見6.1)，如果檢出的色譜峰的保留時間與標準物質的一致，并且在扣除背景后的樣品色譜圖中，該物質的光譜圖與標準物質的一致(參見圖B.2)，可初步認定樣品為陽性樣品。記錄色譜峰的峰面積，以外標法定量。試樣溶液中被測物的響應值應在標準工作曲線的線性范圍之內，超出線性范圍的試樣溶液可用甲酸-甲醇-水混合溶液(見4.6)稀釋后進行測定。需要時，可采用高效液相色譜-質譜/質譜法進行確證實驗(參見附錄C)。

6.5空白試驗

除不稱取試樣外，均按6.1～6.4進行測定。

7 試驗數據處理

試樣中各待測組分的含量，計算見公式(1)計算：

(1)

式中：Xi──試樣中被測組分的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；

ρi──試樣溶液中被測組分的質量濃度，單位為毫克每升(mg/L)；

ρ0──空白試驗溶液中被測組分的質量濃度，單位為毫克每升(mg/L)；

V──定容體積，單位為毫升(mL)；

m──試樣質量，單位為克(g);

f──試樣稀釋倍數。

計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。

8 檢出限與定量限

氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽的方法檢出限均為2.50mg/kg，定量下限均為5.00mg/kg。氯二甲酚的方法檢出限為5.00mg/kg，定量下限為10.0mg/kg。

9 回收率

氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽在添加濃度5.00mg/kg～50.0mg/kg范圍內，氯二甲酚在添加濃度10.0mg/kg～100mg/kg范圍內，回收率均在80%～110%之間。

10 精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。

附 錄A

(規(guī)范性附錄)

標準物質信息

標準物質的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量及化學結構式，見表A.1。

表A.1標準物質的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量及化學結構式

附 錄B

(資料性附錄)

標準溶液的液相色譜圖及光譜圖

標準溶液的液相色譜見圖B.1。

圖B.1 標準溶液的液相色譜圖

5種標準物質的紫外光譜見圖B.2。

圖B.2 5種標準物質的紫外光譜圖

附 錄 C

(資料性附錄)

確證試驗

C.1 液相色譜參考工作條件

液相色譜參考工作條件如下：

a)色譜柱：C18柱，1.7μm，50mm×2.1mm(內徑)；

b)流動相：A為0.1%三氟乙酸乙腈溶液，B為0.1%三氟乙酸水溶液，梯度洗脫程序：0min～2.0min，20% A；2.0min～7.0min，20%～80% A；7.0min～9.0min，80% A；9.0min～9.1min，80% A～20% A；9.1min～12.0min，20% A；

c)流速：0.3mL/min；

d)柱溫：30℃；

e)進樣量：5μL。

C.2 質譜參考工作條件

質譜參考工作條件如下：

a)離子源：電噴霧離子源(ESI)；

b)掃描方式：正離子和負離子掃描；

c)電噴霧電壓：4500V；

d)離子源溫度：500℃；

e)氣簾氣：氮氣，0.207MPa；

f)碰撞氣：氮氣，0.055MPa；

g)檢測方式：多反應監(jiān)測(MRM)；5種殺菌劑的采集模式、母離子、子離子、去簇電壓和碰撞電壓見表C.1；提取離子色譜圖，見圖C.1。

表C.1 5種殺菌劑的質譜MRM模式優(yōu)化參數

圖C.1 5種殺菌劑的提取離子色譜圖

C.3定性測定

進行試樣測定時，將試樣適當稀釋，按液相色譜參考工作條件(見C.1)和質譜參考工作條件(見C.2)測定樣液和標準工作溶液，如果檢出色譜峰的保留時間與標準物質的相一致，并且在扣除背景后的樣品質譜圖中，所選擇的離子均出現，而且選擇離子的相對豐度與標準物質的進行比較，相對偏差不超過規(guī)定的范圍(見表C.2)，則可判斷該樣品為陽性樣品。

表C.2 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差