腦梗死又稱缺血性卒中，是一種嚴(yán)重威脅人類健康的腦血管疾病。目前認(rèn)為頸動(dòng)脈粥樣硬化（carotid atherosclerosis，CAS）是腦梗死發(fā)生的病理基礎(chǔ)，其中CAS不穩(wěn)定斑塊的形成在腦梗死發(fā)病中起關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮損傷、脂質(zhì)代謝異常及氧化應(yīng)激等與CAS發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。微小RNA-34a（microRNA-34a，miR-34a）屬于miR-34家族，其異常表達(dá)與內(nèi)皮損傷及其功能紊亂有關(guān)，在心血管疾病發(fā)展進(jìn)程中具有重要作用。而沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（sir2-related enzyme 1，Sirt1）是miR-34a作用的靶基因之一，可通過改善血管內(nèi)皮功能、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝及抗氧化應(yīng)激等多種機(jī)制抑制CAS發(fā)生及斑塊形成、發(fā)展。近年來，miR-34a、Sirt1與腦血管內(nèi)皮損傷的關(guān)系已成為神經(jīng)科研究熱點(diǎn)，但兩者與腦梗死病人CAS斑塊穩(wěn)定性關(guān)系的研究報(bào)道較少。鑒于此，本研究通過檢測血清miR-34a、Sirt1水平，分析兩者與老年腦梗死病人CAS斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系，以期為臨床治療老年腦梗死提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年6月至2019年6月邯鄲明仁醫(yī)院收治的老年腦梗死病人170例作為腦梗死組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合腦梗死相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均為首次發(fā)病，且發(fā)病至入院時(shí)間＜72 h；③年齡≥60周歲；④臨床資料詳細(xì)完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心肌梗死、冠心病等心血管疾病者；②伴有其他腦部器質(zhì)性病變者；③近3個(gè)月內(nèi)服用過降脂藥物者；④具有精神疾病者。腦梗死組男98例，女72例；年齡（69.23±9.10）周歲，范圍為60～88周歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）（25.48±4.50）kg/m，范圍為18～30 kg/m。另選取該院同期體檢健康者150例作為對照組，其中男86例，女64例；年齡（69.03±8.97）周歲，范圍為60～88周歲；BMI（24.67±3.95）kg/m，范圍為18～29 kg/m。兩組組一般資料相比，均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)要求，且病人均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1

頸動(dòng)脈超聲檢查 受試者均接受頸動(dòng)脈超聲檢查，由本院一名經(jīng)驗(yàn)豐富超聲科醫(yī)師單獨(dú)操作，使用西門子ACUSON S2000彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率為4.5～8.5 MHz。取仰臥位，從頸部動(dòng)脈橫、縱兩個(gè)切面掃查頸總動(dòng)脈及其分叉處、頸內(nèi)及頸外動(dòng)脈，觀察頸動(dòng)脈內(nèi)-中膜厚度（intima-media thickness，IMT）、管腔內(nèi)有無斑塊及斑塊部位、形態(tài)及回聲特點(diǎn)等。CAS斑塊形成診斷標(biāo)準(zhǔn)：①IMT＜1.0 mm為頸動(dòng)脈正常，②1.0 mm≤IMT≤1.2 mm為內(nèi)膜增厚，③IMT＞1.2 mm為CAS斑塊形成；將①、②作為無斑塊組（

n

=43），③作為斑塊組（

n

=127）。斑塊組又可根據(jù)CAS斑塊特征分為：①均質(zhì)、強(qiáng)回聲的硬斑塊，②均質(zhì)、等回聲的扁平斑塊，③均質(zhì)、低回聲的軟斑塊，④不均質(zhì)回聲的混合斑塊；其中硬斑塊與扁平斑塊屬于穩(wěn)定斑塊組（

n

=59），軟斑塊與混合斑塊屬于不穩(wěn)定斑塊組（

n

=68）。

1.2.2

血清miR-34a、Sirt1水平檢測 分別抽取腦梗死組病人入院第2天清晨、對照組體檢當(dāng)天空腹時(shí)靜脈血，各6 mL，在3 000 r/min離心機(jī)中離心15 min，提取血清置于-80℃超低溫冰箱中保存。取1.5 mL，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative realtime PCR，qRT-PCR）檢測血清miR-34a水平。血清總RNA提取嚴(yán)格按照沈陽萬類生物科技有限公司提供的Trizol試劑盒說明書進(jìn)行，并根據(jù)北京麥瑞博生物科技有限公司提供的PrimeScriptRT reagent Kit試劑盒中方法合成cDNA鏈。以U6作為對照進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)，引物序列均由上海昕浩生物科技有限公司合成，miR-34a引物為：正向5"-TCTGTCTCTCTTGGCAGTGTCTT-3"，反向5"-AATGGTTGTTCTCCACTCTCTCTC-3"；U6引物為：正向5"-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3"，反 向5"-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3"。反應(yīng)條件為95℃、5 min，95℃、30 s，60℃、30 s，40個(gè)循環(huán)。重復(fù)3次，并用2法計(jì)算血清miR-34a相對表達(dá)量。另取血清1.5 mL，使用酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測Sirt1水平，試驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照人Sirt1試劑盒（購自上海滬震實(shí)業(yè)有限公司）說明書進(jìn)行。剩余血清3 mL用于檢測血脂相關(guān)指標(biāo)。

1.2.3

血脂檢測 采用AU5800全自動(dòng)生化分析儀（由貝克曼庫爾特商貿(mào)有限公司提供）檢測三酰甘油、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。

2 結(jié)果

2.1 對照組與腦梗死組血清miR

-

34a、Sirt1水平比較

腦梗死組病人血清miR-34a水平明顯高于對照組（

P

＜0.05），血清Sirt1水平明顯低于對照組（

P

＜0.05）。見表1。

表1 對照組與腦梗死組血清miR-34a、沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（Sirt1）水平比較/±s

2.2 腦梗死組病人不同CAS斑塊性質(zhì)臨床資料比較

腦梗死組病人不同CAS斑塊性質(zhì)年齡、總膽固醇、LDL-C比較，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；三酰甘油、HDL-C相比，均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。不穩(wěn)定斑塊組病人年齡明顯大于無斑塊組病人（

P

＜0.05）；不穩(wěn)定斑塊組、穩(wěn)定斑塊組病人總膽固醇、LDL-C明顯高于無斑塊組病人（

P

＜0.05），不穩(wěn)定斑塊組病人總膽固醇、LDL-C明顯高于穩(wěn)定斑塊組病人（

P

＜0.05）。見表2。

表2 腦梗死組病人不同頸動(dòng)脈粥樣硬化（CAS）斑塊性質(zhì)臨床資料比較/±s

2.3 腦梗死組病人不同CAS斑塊性質(zhì)血清miR

-

34a、Sirt1水平比較

腦梗死組病人不同CAS斑塊性質(zhì)血清miR-34a、Sirt1水平比較，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）。不穩(wěn)定斑塊組、穩(wěn)定斑塊組病人血清miR-34a水平均明顯高于無斑塊組（

P

＜0.05），血清Sirt1水平均明顯低于無斑塊組（

P

＜0.05）；不穩(wěn)定斑塊組病人血清miR-34a水平明顯高于穩(wěn)定斑塊組病人（

P

＜0.05），血清Sirt1水平明顯低于穩(wěn)定斑塊組病人（

P

＜0.05）。見表3。

表3 腦梗死組病人不同頸動(dòng)脈粥樣硬化（CAS）斑塊性質(zhì)血清miR-34a、沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（Sirt1）水平比較/±s

2.4 影響老年腦梗死病人CAS不穩(wěn)定斑塊形成的危險(xiǎn)因素logistic回歸分析

將老年腦梗死病人是否具有CAS不穩(wěn)定斑塊作為因變量［無CAS不穩(wěn)定斑塊（無斑塊組＋穩(wěn)定斑塊組）=0，有CAS不穩(wěn)定斑塊=1］，將年齡、總膽固醇、LDL-C、miR-34a、Sirt1作為自變量進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，結(jié)果顯示年齡、miR-34a均為老年腦梗死病人CAS不穩(wěn)定斑塊形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（

P

＜0.05），Sirt1為保護(hù)性因素（

P

＜0.05）。見表4。

表4 影響老年腦梗死病人頸動(dòng)脈粥樣硬化（CAS）不穩(wěn)定斑塊形成的危險(xiǎn)因素logistic回歸分析

3 討論

腦梗死是臨床致殘率、復(fù)發(fā)率均較高的重要疾病之一，其發(fā)生與CAS斑塊破裂導(dǎo)致的血栓形成有關(guān)。CAS斑塊由泡沫細(xì)胞、遷移的平滑肌細(xì)胞等多種細(xì)胞組成，上述細(xì)胞可通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞間相互作用破壞血管壁的穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致斑塊內(nèi)出血或斑塊破裂等，最終引起血栓事件。因此，探討與老年腦梗死病人CAS斑塊穩(wěn)定性相關(guān)的血清標(biāo)志物顯得尤為重要。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一類不編碼蛋白質(zhì)的小RNA，在心血管功能調(diào)控中具有重要作用，已逐漸成為心腦血管疾病的潛在生物標(biāo)志物。miR-34a是目前研究比較有前景的miRNA，主要表達(dá)于心、腦組織中，在血管新生及心腦血管疾病發(fā)生中扮演著重要角色。研究發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)與CAS發(fā)展進(jìn)程有關(guān)，而miR-34a可通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能，參與CAS發(fā)生與斑塊形成。范智文等研究報(bào)道，當(dāng)歸補(bǔ)血湯可通過抑制miR-34a、上調(diào)Sirt1表達(dá)在抗心肌梗死后心室重塑上發(fā)揮作用。還有研究發(fā)現(xiàn)，miR-34a介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞衰老與其靶基因Sirt1有關(guān)。Sirt1是一種依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的第三類組蛋白去乙?；?，基因定位于染色體10q22.1，由8個(gè)內(nèi)含子和9個(gè)外顯子組成。Hu等研究報(bào)道，Sirt1可通過上調(diào)內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（eNOS）水平，促進(jìn)血管內(nèi)皮源性血管舒張因子產(chǎn)生，從而起到保護(hù)血管內(nèi)皮作用。鄢曉麗等研究發(fā)現(xiàn)，慢性心力衰竭病人血清Sirt1水平明顯低于對照組，且其水平變化與心功能分級有關(guān)，心功能分級越差，血清Sirt1水平越低。綜上發(fā)現(xiàn)，探討血清miR-34a、Sirt1水平與老年腦梗死病人CAS斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系，具有一定臨床意義。

本研究中，腦梗死組病人血清miR-34a水平遠(yuǎn)高于對照組，血清Sirt1水平遠(yuǎn)低于對照組，提示血清miR-34a水平升高、Sirt1水平降低可能與老年腦梗死發(fā)病有關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定斑塊組病人年齡遠(yuǎn)大于無斑塊組，且總膽固醇、LDL-C高低依次為不穩(wěn)定斑塊組、穩(wěn)定斑塊組、無斑塊組，提示年齡、總膽固醇、LDL-C可能與老年腦梗死病人CAS斑塊形成有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，腦梗死組病人不同CAS斑塊性質(zhì)血清miR-34a水平高低依次為：不穩(wěn)定斑塊組、穩(wěn)定斑塊組、無斑塊組，血清Sirt1水平高低依次為：無斑塊組、穩(wěn)定斑塊組、不穩(wěn)定斑塊組，提示血清miR-34a水平升高、Sirt1水平降低可能在CAS斑塊形成、發(fā)展中起重要作用。此外，多因素logistic回歸分析顯示，年齡、miR-34a為老年腦梗死病人CAS不穩(wěn)定斑塊形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，Sirt1為保護(hù)性因素，提示除年齡外，miR-34a、Sirt1可能是潛在用于預(yù)測老年腦梗死病人CAS不穩(wěn)定斑塊形成的血清標(biāo)志物。

綜上所述，老年腦梗死病人血清miR-34a水平升高、Sirt1水平降低，兩者水平變化與CAS斑塊形成有關(guān)，且是老年腦梗死病人CAS不穩(wěn)定斑塊形成的獨(dú)立影響因素，可能為防治CAS斑塊提供幫助。