鄭州市金水區(qū)總醫(yī)院（450000）張春玲

再生障礙性貧血（AA）是一種常見血液科疾病，主要是由于T細(xì)胞在機體內(nèi)異?；顒右餥1]。相關(guān)報道稱，趨化因子受體-4（CXCR4）產(chǎn)生的相互作用對于由T細(xì)胞引起的免疫異常具有積極作用[2]。目前臨床關(guān)于CXCR4針對控制免疫反應(yīng)的相關(guān)報道較多，但鮮有關(guān)于其對于AA的專項報道。鑒于此，本研究旨在分析CXCR4蛋白在AA患者骨髓細(xì)胞中的表達(dá)，并分析其與外周血白細(xì)胞計數(shù)（WBC）、血紅蛋白（HBG）水平關(guān)聯(lián)性。具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月～2020年1月我院收治的60份AA患者骨髓及骨髓活檢石蠟標(biāo)本?；颊呔螦A診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，均簽署知情同意書。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)后實施。其中男36例，女24例；年齡18～59歲，平均（36.52±4.17）歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色 取骨髓活檢石蠟標(biāo)本切片并置于二甲苯20min×1次，10min×2次；使用梯度乙醇水化，經(jīng)5min/次的蒸餾水沖洗1次。將切片組織置入枸橘酸鈉緩沖液中煮沸，而后置入PBS液中5min冷卻。室溫下采用3%雙氧水覆蓋切片組織15min；采用PBS液沖洗切片組織2次，3min/次；添加山羊血清液作封存，添加1∶50比例CXCR4抗體，繼續(xù)放置2h。采用PBS液將CXCR4抗體沖洗干凈，添加山羊抗兔二抗IgG工作液，常溫下放置15min，采用PBS液沖洗切片組織2次，3min/次；添加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，室溫下放置15min，采用PBS液沖洗切片組織2次，3min/次；而后滴加DAB顯色劑，依據(jù)顯色劑操作說明書進(jìn)行。加入蘇木素再次染色10s，而后經(jīng)95%乙醇2min，100%乙醇2min×2次，二甲苯2min×2次，最后滴加中性樹膠封片。

1.2.2 WBC及HBG水平檢測 采集清晨空腹外周靜脈血3ml，以3000r/min離心15min，取上層血清采用全自動血細(xì)胞分析儀（深圳市普康電子有限公司，型號：PE-6300Plus）測定WBC水平，采用血液分析儀（長春市曼特諾醫(yī)療器械有限公司，型號：MTN-21）測定HBG水平。

1.3 染色結(jié)果判讀 ①染色強度：0分：無著色，1分：淡黃色，2分：棕黃色，3分：棕褐色。②陽性細(xì)胞數(shù)：低倍顯微鏡下隨機抽取5個×400倍的高倍視野，每視野細(xì)胞計數(shù)為100個，陽性細(xì)胞率=陽性細(xì)胞數(shù)/觀察細(xì)胞數(shù)×100%。陽性分級：1分：細(xì)胞率≤10%，2分：11%～50%，3分：＞50%。若染色強度與陽性細(xì)胞率所得分值相乘＞3分，則為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以±s表示，組間比較用t檢驗；多因素分析采用Logistic回歸分析；以%表示計數(shù)資料，用χ2檢驗，相關(guān)性采用雙變量Pearson相關(guān)性分析，P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基本資料與WBC、HBG水平比較 60份標(biāo)本經(jīng)染色呈陰性18份，呈陽性42份。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；相較陰性組，陽性組WBC、HBG水平較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見附表1。

附表1 基本資料與WBC、HBG水平比較

2.2 多因素分析 經(jīng)Logistic回歸分析結(jié)果顯示，AA患者外周血中WBC、HBG過表達(dá)是AA發(fā)生的影響因素（OR＞1，P＜0.05）。見附表2。

附表2 AA發(fā)生的影響因素多因素分析

2.3 CXCR4表達(dá)與外周血WBC、HBG水平相關(guān)性分析 經(jīng)雙變量Pearson直線相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示，陽性組CXCR4蛋白水平與外周血WBC、HBG呈負(fù)相關(guān)（r=-0.938，-0.873，P＜0.001）。

3 討論

AA主要表現(xiàn)為全血細(xì)胞銳減與骨髓細(xì)胞增生不良，患者常因出血、重度貧血以及感染等因素病死[4]。近些年，臨床常采用免疫控制來增加AA患者白細(xì)胞數(shù)目，達(dá)到治療目的。研究顯示，CXCR4對于人體免疫反應(yīng)具有重要作用，而其是否參與AA免疫過程尚無定論[5]。

本研究結(jié)果顯示，相較陰性組，陽性組WBC、HBG水平均較低；經(jīng)雙變量Pearson直線相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示，陽性組CXCR4蛋白水平與外周血WBC、HBG呈負(fù)相關(guān)，表明CXCR4在AA患者骨髓細(xì)胞中表達(dá)增加，與外周血WBC、HBG水平呈負(fù)相關(guān)。分析其原因可能在于，CXCR4主要表達(dá)于靜息細(xì)胞表面，由于免疫系統(tǒng)產(chǎn)生異常，靜息細(xì)胞數(shù)量顯著降低，CXCR4表達(dá)降低，可見CXCR4在決定AA疾病進(jìn)程中起到關(guān)鍵作用[6]。CXCR4可吸引免疫細(xì)胞聚集于免疫應(yīng)答位置，影響免疫調(diào)節(jié)及人體免疫反應(yīng)，因此CXCR4對于AA患者骨髓細(xì)胞表達(dá)顯著增加。WBC作為機體內(nèi)一種重要血細(xì)胞，其在人體內(nèi)可起到吞噬異物并形成有效抗體的作用，還可增強機體受損愈合能力及疾病免疫力[7]。當(dāng)機體出現(xiàn)AA等細(xì)菌感染類疾病時，其水平可迅速升高以抵抗細(xì)菌侵入，因此其水平高低與CXCR4在骨髓細(xì)胞中表達(dá)具有顯著關(guān)聯(lián)。而HBG作為機體內(nèi)用于運輸氧氣的一類特殊蛋白質(zhì)，其數(shù)量在機體發(fā)生貧血等血液疾病時銳減，CXCR4于AA患者骨髓細(xì)胞中的高表達(dá)可引起機體免疫系統(tǒng)逐漸趨于正常，進(jìn)而引起機體內(nèi)HBG水平增加，因此其水平與CXCR4在骨髓細(xì)胞中表達(dá)亦具有顯著關(guān)聯(lián)。

綜上所述，CXCR4在AA患者骨髓細(xì)胞中表達(dá)增加，與外周血WBC、HBG水平呈負(fù)相關(guān)，對AA治療具有一定指導(dǎo)價值。