任 琦 徐 蘭 游 媛 許 妍 萬(wàn)林春*

(1.江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029；2.中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九○八醫(yī)院藥學(xué)科，江西 南昌 330002)

柏子養(yǎng)心丸收載于2020《中國(guó)藥典》一部，由炙黃芪、黨參、川芎、當(dāng)歸、柏子仁、酸棗仁等十三味藥組成。具安神、補(bǔ)氣、養(yǎng)血之功效。用于失眠、多夢(mèng)、健忘、心悸易驚等癥[1-2]，方中酸棗仁具養(yǎng)心補(bǔ)肝、寧心安神、斂汗、生津之功效[3-4]，為中醫(yī)臨床首選的安神藥[5]。由于具有良好的臨床療效和廣泛的臨床應(yīng)用，導(dǎo)致酸棗仁需求量加大。而柏子養(yǎng)心丸現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)僅有酸棗仁的顯微鑒別，未對(duì)其特征性成分加以控制，難以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量[6]，且目前未見(jiàn)有關(guān)柏子養(yǎng)心丸中酸棗仁質(zhì)量控制方面的報(bào)道。為了有效的控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證其安全性和有效性，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法建立了柏子養(yǎng)心丸中的酸棗仁中特征性成分斯皮諾素的鑒別[7-12]，為科學(xué)評(píng)價(jià)及有效控制柏子養(yǎng)心丸的酸棗仁真實(shí)投料提供可靠方法。

1 儀器與試樣

1.1 儀器

Agilent 1260系列(全自動(dòng))高效液相色譜儀，Chemstation化學(xué)工作站，DAD檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫公司)；Sartorius BSA 124S-CW電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)；Sartorius BT 25S電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)。

1.2 試藥與樣品

試藥：斯皮諾素對(duì)照品(以92.4%計(jì))中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)：111869-201001；甲醇為色譜純、水為Milli-Q制備的純化水；冰醋酸為分析純；其他試劑均為分析純。

樣品：柏子養(yǎng)心丸，具體樣品信息見(jiàn)表1。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Waters Sunfire C18色譜柱，柱長(zhǎng)為25cm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm)；以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1%冰醋酸溶液為流動(dòng)相B，按表1的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm；柱溫為35℃；流速為每分鐘1.0ml。理論板數(shù)按斯皮諾素計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.2 溶液配制

對(duì)照品溶液的制備 取斯皮諾素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取本品水蜜丸研碎；小蜜丸或大蜜丸剪碎，混勻，取本品約6g，精密稱(chēng)定，精密加50%乙醇25ml，置具塞錐形瓶中，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率：500W，頻率：40kHz)30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

因斯皮諾素在335nm處有最大吸收(見(jiàn)圖1)，故試驗(yàn)采用了335nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 斯皮諾素吸收光譜圖

2.3.2 流動(dòng)相的選擇

以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1%冰醋酸溶液為流動(dòng)相B，按表2的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫為佳。

表2 流動(dòng)相梯度洗脫表

2.3.3 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)

取缺酸棗仁的陰性對(duì)照樣品，按2.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，結(jié)果表明陰性對(duì)照樣品對(duì)本法無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖2～4。

圖2 斯皮諾斯對(duì)照品HPLC色譜圖

圖3 柏子養(yǎng)心丸供試品HPLC色譜圖

圖4 缺酸棗仁的陰性對(duì)照樣品HPLC色譜圖

2.3.4 不同品牌的色譜柱耐用性考察

取同一供試品溶液按2.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，比較不同品牌的色譜柱，考察方法的耐用性。

按2.1項(xiàng)所述色譜流動(dòng)相，取供試品溶液采用Agilent1260系列高效液相色譜儀分別使用Waters Sunfire C18色譜柱(柱長(zhǎng)為25cm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm)、資生堂CAPCELL PAK C18(250mm×4.6mm，5μm)、島津 Intersil ODS-3(250×4.6mm，5μm)色譜柱進(jìn)行分析，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖5～7。

圖5 Waters Sunfire C18色譜柱(250×4.6mm，5μm)

圖6 資生堂CAPCELL PAK C18(250mm×4.6mm，5μm)

圖7 島津 Intersil ODS-3(250×4.6mm，5μm)

通過(guò)比較三個(gè)不同品牌的色譜柱所得色譜圖，結(jié)果顯示三個(gè)品牌的色譜柱分離效果均較好，因此本課題組選用了Waters Sunfire C18色譜柱進(jìn)行了柏子養(yǎng)心丸指紋圖譜研究。

2.3.5 空白溶劑試驗(yàn)

取50%乙醇，采用2.1項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣20μl，記錄色譜圖。結(jié)果顯示空白溶劑在色譜圖中未出現(xiàn)與供試品溶液相應(yīng)的色譜峰。

2.4 樣品測(cè)定及結(jié)果

取本品5個(gè)生產(chǎn)廠家共10批柏子養(yǎng)心丸進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果4批柏子養(yǎng)心丸中B企業(yè)與C企業(yè)合計(jì)4批未檢出斯皮諾素。

3 討論

本文建立了高效液相色譜法鑒別柏子養(yǎng)心丸中的酸棗仁中特征性成分斯皮諾素。結(jié)果有兩家企業(yè)酸棗仁投料不準(zhǔn)確或投料量不足，導(dǎo)致采用高效液相色譜未檢出斯皮諾素，提示生產(chǎn)廠家應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)和相應(yīng)的GMP管理規(guī)定，加強(qiáng)藥品生產(chǎn)與質(zhì)量管理，保證藥品質(zhì)量安全有效。同時(shí)提示監(jiān)管部門(mén)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)中成藥制劑的監(jiān)管力度。