買(mǎi)淑霞，文恩輝，魏世杰，黨宏萬(wàn)，費(fèi)平霞

缺血性腦卒中是臨床較為常見(jiàn)的一類(lèi)腦血管疾病，大量循證醫(yī)學(xué)證據(jù)表明，在常規(guī)應(yīng)用阿托伐他汀鈣(ATF)的基礎(chǔ)上聯(lián)合丁苯酞(NBP)，能顯著改善患者神經(jīng)功能缺損程度、缺血區(qū)腦血流量，促進(jìn)日常生活能力的提升[1-4]，故被指南[5]推薦用于治療缺血性腦卒中，但兩藥的藥動(dòng)力學(xué)相互作用及安全性未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究阿托伐他汀鈣對(duì)大鼠體內(nèi)丁苯酞的藥動(dòng)力學(xué)影響及兩藥聯(lián)用時(shí)的肝功能指標(biāo)變化，探討和評(píng)價(jià)兩藥聯(lián)合使用是否產(chǎn)生藥動(dòng)力學(xué)相互作用、增加肝毒性，為兩藥的合理使用提供參考依據(jù)。

1資料與方法

1.1 一般資料：清潔級(jí)SD大鼠14只(雌雄各半)，體質(zhì)量(250±30)g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(寧)2016-0021。室溫(25 ℃)飼養(yǎng)，濕度45%～75%，生活環(huán)境干凈，自由攝食進(jìn)水。

1.2 藥品與試劑：丁苯酞對(duì)照品(批號(hào)：101035-201502)、阿托伐他汀鈣對(duì)照品(批號(hào)：100590-201303)、地西泮對(duì)照品(批號(hào)：110805-200508)，均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；丁苯酞軟膠囊，石藥集團(tuán)恩必普藥業(yè)有限公司提供(批準(zhǔn)文號(hào)：H20050299，批號(hào)：118170609，規(guī)格：0.1 g/粒)；阿托伐他汀鈣片(批準(zhǔn)文號(hào)：H20133127，批號(hào)：FP111201710001，規(guī)格：10 mg/片)、羧甲基纖維素鈉(批號(hào)：20150812)，由浙江新東港藥業(yè)股份有限公司提供；色譜純乙腈、甲酸(美國(guó)Fisher公司)；ALT、AST、TBIL、DBIL試劑盒，均購(gòu)自北京利德曼生化股份有限公司。

1.3 儀器:Shimadzu 30A型超快速高效液相色譜儀，API 4000型四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，Centrifuge 5804R臺(tái)式高速離心機(jī)，MiLLi-Q純水發(fā)生儀，Mettler電子天平，XW-80A渦旋器，Siemens ADVIA2400全自動(dòng)生化分析儀。

1.4 色譜-質(zhì)譜條件：色譜柱Phenomenex Kinete-C18(50 mm×2.10 mm，1.7 μm)；流動(dòng)相乙腈0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫；流速0.3 mL/min，柱溫40 ℃，進(jìn)樣量3 μl。定量檢測(cè)的離子對(duì)：丁苯酞(NBP)[M+H]+，m/z 191.1→145.1；地西泮[M+H]+，m/z 285.6→193.1。

1.5 大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)：將14只大鼠隨機(jī)分為2組，即單用丁苯酞組(NBP組)和聯(lián)合用藥組(NBP+ATV組)，每組7只。每日晨9點(diǎn)灌胃分別給予NBP油溶液(70 mg/kg)+0.25% CMC-Na溶液、NBP油溶液(70 mg/kg)+ATV混懸液(8 mg/kg)。2組大鼠連續(xù)給藥7 d，第7天給藥后5、10、15、30 min、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h眼眶采血0.3 mL至肝素鈉涂壁的1.5 mL離心管中，4 800 r/min離心5 min后取上清液保存于-80 ℃待測(cè)。移取待測(cè)血漿樣品100 μl，加入20 μl內(nèi)標(biāo)液，渦旋振蕩1 min，再加入乙腈300 μl，渦旋振蕩3 min，離心10 min(14 000 r/min、4 ℃)，取100 μl上清液進(jìn)樣分析。

1.6 兩藥聯(lián)用的安全性:24 h血樣采集完畢后，大鼠股動(dòng)脈取血5.0 mL，4 000 r/min 離心5 min后取上清液，測(cè)定其ALT、AST、TBIL、DBIL水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用DAS 2.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算并相應(yīng)參數(shù)。數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料比較用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 藥動(dòng)學(xué)研究

2.1.1 平均藥-時(shí)曲線：因24 h 的血藥濃度低于定量下限，將其剔除。其余時(shí)間點(diǎn)所測(cè)的血藥濃度繪制均藥-時(shí)曲線，見(jiàn)圖1(封三)。

2.1.2 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)變化：統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，ATV對(duì)NBP在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)具有一定的影響，見(jiàn)表1。與NBP組比較，NBP+ATV組中NBP的AUC0-t、t1/2、CL發(fā)生了顯著性改變(P<0.05)。

表1 大鼠體內(nèi)丁苯酞的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.2 多劑量給藥后的安全性：連續(xù)灌胃給藥7 d 后，NBP+ATV組的肝功能指標(biāo)較NBP組均有一定程度的升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 多劑量給藥后對(duì)大鼠肝功能的影響

3討論

多項(xiàng)臨床研究發(fā)現(xiàn)，ATF聯(lián)合NBP可明顯改善患者血流動(dòng)力學(xué)，促進(jìn)腦部血液循環(huán)，明顯緩解神經(jīng)功能缺損癥狀，并減輕炎癥反應(yīng)[1-4]。本研究結(jié)果顯示，NBP+ATF組各時(shí)間點(diǎn)丁苯酞平均血漿藥物濃度比NBP組高；此外，結(jié)果還顯示ATV對(duì)NBP的吸收速度、組織分布無(wú)明顯影響，但可使NBP在大鼠體內(nèi)消除速率減慢、暴露量增多、作用時(shí)間延長(zhǎng)(AUC0-t、t1/2分別增加了64.6%和83.8%，而CL降低了40.0%)，這些結(jié)果均提示ATV可能與NBP競(jìng)爭(zhēng)共同的代謝酶，從而產(chǎn)生藥物相互作用。在臨床聯(lián)合使用時(shí)，應(yīng)考慮調(diào)整兩藥的給藥劑量。

丁苯酞及阿托伐他汀鈣的藥品說(shuō)明書(shū)及相關(guān)研究[6-7]均提示，兩藥對(duì)肝功能均有一定影響，但在臨床上丁苯酞單用及兩藥聯(lián)合使用不良反應(yīng)發(fā)生率均較低，安全性較好[5-8]。本研究結(jié)果顯示，丁苯酞聯(lián)合阿托伐他汀鈣組大鼠血清中AST、ALT、TBIL、DBIL水平較單用丁苯酞組均有所升高(分別升高了45.67%、41.79%、66.67%、45.45%)，但其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，多劑量給予丁苯酞和阿托伐他汀后，阿托伐他汀對(duì)大鼠體內(nèi)丁苯酞的藥動(dòng)力學(xué)有一定影響，對(duì)肝功能的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但本實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象為大鼠，且樣本量較少，因此，在人體內(nèi)阿托伐他汀鈣與丁苯酞的藥動(dòng)力學(xué)相互作用及安全性有待進(jìn)一步研究探索。