嚴(yán) 燁,鄒 力,樊 璐,惠衛(wèi)甲,楊 雯,呂名蕊
(1.西安悟空檢測科技有限公司,陜西西安 710065;2.陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院,陜西西安 710048)
葉酸,為維B9,是人體正常發(fā)育所需的水溶性維生素之一[1],也是一種外源性維生素,人體不能自身合成。葉酸可以從日常的食物中攝取,谷物中含有一定量的葉酸。
小米作為一種日常食用的小雜糧,其有較高的葉酸含量[2-3],陜西省小米產(chǎn)地集中在陜北地區(qū),為了對該地區(qū)小米中的葉酸含量進(jìn)行初步了解,從市場上采購6 種不同產(chǎn)地的小米進(jìn)行檢測?,F(xiàn)將試驗方法和結(jié)果總結(jié)如下。
葉酸檢測商用試劑盒的原理和國標(biāo)法[4-5]類似,將樣品溶液和葉酸檢測培養(yǎng)基加入包被有鼠李糖桿菌(Lactobacillus rhamnosus)的微孔中培養(yǎng),菌的生長量和葉酸含量呈正比,測定吸光度并計算。
粉碎機(jī),武藝海納電器有限公司產(chǎn)品;生化培養(yǎng)箱,上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司產(chǎn)品;酶標(biāo)儀,上海永創(chuàng)醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品。
雞胰腺(凍干粉),上海物競化工科技有限公司提供;葉酸檢測試劑盒,德國拜發(fā)R-Biopharm 公司提供。
(1)樣品前處理。干燥小米經(jīng)粉碎機(jī)研磨粉碎,過80 目篩。
(2)樣品待測液制備。稱取1.000 g 樣品和10 mg雞胰腺(含有葉酸軛合酶,水解葉酸多谷氨酸鹽至雙谷氨酸鹽)置于50 mL 具塞離心管中,加入20 mL左右磷酸鹽緩沖液(7.8 g 磷酸二氫鈉和1 g 抗壞血酸鈉溶解于1 L 蒸餾水中,校正pH 值至7.2,每天新配緩沖液)復(fù)溶混勻,再添加磷酸鹽緩沖液至40 mL刻度;同時,制備雞胰腺凍干粉對照管;蓋塞于黑暗條件下37 ℃,150 r/min 振蕩水解2 h;后于95 ℃下水浴保存30 min,期間振蕩3 次;迅速冷卻至30 ℃下,以轉(zhuǎn)速8 000 r/min 離心5 min,吸取上清液在1.5 mL 離心管中梯度稀釋至300 倍。
(3)培養(yǎng)基制備。將10 mL 無菌水和1 mL 試劑盒中緩沖液加入自帶培養(yǎng)基瓶中,渦旋振蕩混勻,置于95 mL 水浴保溫5 min,迅速冷卻,過0.22 μm無菌膜備用。
(4)標(biāo)注溶液制備。用自帶標(biāo)準(zhǔn)溶液配制6 個梯度,0,160,320,640,960,1 280 ng/100 g。
(5)加樣。按照需要取適量孔板,移取150 μL葉酸培養(yǎng)基至微孔中,移取150 μL 標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋的樣品至指定的微孔中,用粘合箔蓋住板條微孔。
(6)培養(yǎng)。在37±1 ℃黑暗條件下孵育48 h。
(7)測量。酶標(biāo)儀550 nm 條件下讀取吸光度。
(8)使用 Originlab 軟件計算結(jié)果。
標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測結(jié)果[5]見表1,葉酸檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。
圖1 葉酸檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線
邵麗華等人[5,7]采用間接熒光分析法得出山西地區(qū)小米中葉酸含量為1.6~1.9 μg/g。趙平等人[8]采用微生物法測得大米中葉酸含量為12.4 μg/100 g。侯思宇等人[9]采用HPLC 法測得山西、河北、河南及遼寧地區(qū)小米中葉酸含量為0.23~2.89 μg/g。張娟等人[10]采用差時脈沖法測得小米中葉酸含量為1.0 μg/g;張海明等人[11]采用間接熒光光譜法測得長治市不同縣區(qū)小米中葉酸含量為1.54~1.92 μg/g。以上檢測方法和本次試驗有較大差異。
6 種小米中葉酸含量檢測結(jié)果見表2。
從表2 檢測結(jié)果來看,6 種小米中葉酸含量分別為 60.3,47.8,42.8,40.6,49.9,72.5 μg/100 g;RSD 值均小于5%。6 種小米中的葉酸有較大的差異,同國內(nèi)其他地區(qū)小米中葉酸含量也有差異。
同時取一批次小米樣品5 份,2 份做樣品中葉酸本體含量,3 份進(jìn)行加標(biāo)試驗,檢測并計算加標(biāo)回收率,分別為93.3%,101.9%,98.4%,平均回收率為96.9%。
表2 6 種小米中葉酸含量檢測結(jié)果
采用試劑盒微孔法對陜北地區(qū)6 種小米中葉酸進(jìn)行檢測,含量分別為60.3,47.8,42.8,40.6,49.9,72.5 μg/100 g,RSD 值均小于4%。從中可以發(fā)現(xiàn),同一地區(qū)不同產(chǎn)地小米中葉酸含量有所差異,且差異較大,原因可能和當(dāng)?shù)丨h(huán)境、土壤及栽培技術(shù)有很大的關(guān)系。日常食用小米,可以攝取一定量的葉酸。該結(jié)果也為后續(xù)研究陜北地區(qū)小米營養(yǎng)成分提供參考依據(jù)。