嚴(yán) 燁，鄒 力，樊 璐，惠衛(wèi)甲，楊 雯，呂名蕊

（1.西安悟空檢測科技有限公司，陜西西安 710065；2.陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，陜西西安 710048）

0 引言

葉酸，為維B9，是人體正常發(fā)育所需的水溶性維生素之一[1]，也是一種外源性維生素，人體不能自身合成。葉酸可以從日常的食物中攝取，谷物中含有一定量的葉酸。

小米作為一種日常食用的小雜糧，其有較高的葉酸含量[2-3]，陜西省小米產(chǎn)地集中在陜北地區(qū)，為了對該地區(qū)小米中的葉酸含量進(jìn)行初步了解，從市場上采購6 種不同產(chǎn)地的小米進(jìn)行檢測?，F(xiàn)將試驗方法和結(jié)果總結(jié)如下。

葉酸檢測商用試劑盒的原理和國標(biāo)法[4-5]類似，將樣品溶液和葉酸檢測培養(yǎng)基加入包被有鼠李糖桿菌（Lactobacillus rhamnosus）的微孔中培養(yǎng)，菌的生長量和葉酸含量呈正比，測定吸光度并計算。

1 儀器和試劑

粉碎機(jī)，武藝海納電器有限公司產(chǎn)品；生化培養(yǎng)箱，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀，上海永創(chuàng)醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品。

雞胰腺（凍干粉），上海物競化工科技有限公司提供；葉酸檢測試劑盒，德國拜發(fā)R-Biopharm 公司提供。

2 試驗方法[6]

（1）樣品前處理。干燥小米經(jīng)粉碎機(jī)研磨粉碎，過80 目篩。

（2）樣品待測液制備。稱取1.000 g 樣品和10 mg雞胰腺（含有葉酸軛合酶，水解葉酸多谷氨酸鹽至雙谷氨酸鹽）置于50 mL 具塞離心管中，加入20 mL左右磷酸鹽緩沖液（7.8 g 磷酸二氫鈉和1 g 抗壞血酸鈉溶解于1 L 蒸餾水中，校正pH 值至7.2，每天新配緩沖液）復(fù)溶混勻，再添加磷酸鹽緩沖液至40 mL刻度；同時，制備雞胰腺凍干粉對照管；蓋塞于黑暗條件下37 ℃，150 r/min 振蕩水解2 h；后于95 ℃下水浴保存30 min，期間振蕩3 次；迅速冷卻至30 ℃下，以轉(zhuǎn)速8 000 r/min 離心5 min，吸取上清液在1.5 mL 離心管中梯度稀釋至300 倍。

（3）培養(yǎng)基制備。將10 mL 無菌水和1 mL 試劑盒中緩沖液加入自帶培養(yǎng)基瓶中，渦旋振蕩混勻，置于95 mL 水浴保溫5 min，迅速冷卻，過0.22 μm無菌膜備用。

（4）標(biāo)注溶液制備。用自帶標(biāo)準(zhǔn)溶液配制6 個梯度，0，160，320，640，960，1 280 ng/100 g。

（5）加樣。按照需要取適量孔板，移取150 μL葉酸培養(yǎng)基至微孔中，移取150 μL 標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋的樣品至指定的微孔中，用粘合箔蓋住板條微孔。

（6）培養(yǎng)。在37±1 ℃黑暗條件下孵育48 h。

（7）測量。酶標(biāo)儀550 nm 條件下讀取吸光度。

（8）使用 Originlab 軟件計算結(jié)果。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測結(jié)果[5]見表1，葉酸檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 葉酸檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2 結(jié)果及分析

邵麗華等人[5，7]采用間接熒光分析法得出山西地區(qū)小米中葉酸含量為1.6～1.9 μg/g。趙平等人[8]采用微生物法測得大米中葉酸含量為12.4 μg/100 g。侯思宇等人[9]采用HPLC 法測得山西、河北、河南及遼寧地區(qū)小米中葉酸含量為0.23～2.89 μg/g。張娟等人[10]采用差時脈沖法測得小米中葉酸含量為1.0 μg/g；張海明等人[11]采用間接熒光光譜法測得長治市不同縣區(qū)小米中葉酸含量為1.54～1.92 μg/g。以上檢測方法和本次試驗有較大差異。

6 種小米中葉酸含量檢測結(jié)果見表2。

從表2 檢測結(jié)果來看，6 種小米中葉酸含量分別為 60.3，47.8，42.8，40.6，49.9，72.5 μg/100 g；RSD 值均小于5%。6 種小米中的葉酸有較大的差異，同國內(nèi)其他地區(qū)小米中葉酸含量也有差異。

3.3 回收率試驗

同時取一批次小米樣品5 份，2 份做樣品中葉酸本體含量，3 份進(jìn)行加標(biāo)試驗，檢測并計算加標(biāo)回收率，分別為93.3%，101.9%，98.4%，平均回收率為96.9%。

表2 6 種小米中葉酸含量檢測結(jié)果

4 結(jié)論

采用試劑盒微孔法對陜北地區(qū)6 種小米中葉酸進(jìn)行檢測，含量分別為60.3，47.8，42.8，40.6，49.9，72.5 μg/100 g，RSD 值均小于4%。從中可以發(fā)現(xiàn)，同一地區(qū)不同產(chǎn)地小米中葉酸含量有所差異，且差異較大，原因可能和當(dāng)?shù)丨h(huán)境、土壤及栽培技術(shù)有很大的關(guān)系。日常食用小米，可以攝取一定量的葉酸。該結(jié)果也為后續(xù)研究陜北地區(qū)小米營養(yǎng)成分提供參考依據(jù)。