李劍美 管麗佳 趙 芳 周明敏 趙 鋒

1.普洱學(xué)院農(nóng)林學(xué)院，云南 普洱 665000；2.普洱學(xué)院生化學(xué)院，云南 普洱 665000

當(dāng)歸[Angelicasinensis(Oliv.) Diels]，屬于傘形科植物，多年生草本植物，主要生產(chǎn)在甘肅東南部，岷縣的產(chǎn)量多，質(zhì)量好，其次為云南、四川、陜西、湖北等省。

普洱端午藥市是一年一度民族藥膳藥材盛會，市場上約有136的藥材[1],常見的藥膳藥材65種[2]，其中文獻(xiàn)記載有毒中草藥19種[3]?！按蟊R山當(dāng)歸”為當(dāng)?shù)刂饕厣⒌赖睾退幧潘幉?，“盧山當(dāng)歸雞”是遠(yuǎn)近聞名的一味藥膳。筆者在走訪普洱市其他縣區(qū)時發(fā)現(xiàn)，其他縣區(qū)端午集市也常有“歸”類藥材，多數(shù)以“當(dāng)歸”為名，均為傘形科植物，外形較為相似。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 收集端午藥市以“歸”為名的藥材，共收集24份當(dāng)歸混偽品(每種藥材收集3份)，經(jīng)DNA鑒定分別為紫花前胡[Angelicadecursiva.(Mip.)Franch]、遼藁本[Ligusticumjeholense(Nakai et Kitagawa) Nakai et Kitagawa] 石防風(fēng)[Peucedanumterebinthaceum(Fisn.)Fisch]、藁本(LigusticumacuminatumOliv)、拐芹(AngelicapolymorphaMaxim)、滇芹(MeeboldiayunnanensisWollf)、川明參(ChuanminshenviolaceumSheh et Shan)、藁本(LigusticumacuminatumOliv)。材料信息見表1。

按照《中國藥典》規(guī)定的方法，將待測樣品按照歸頭、歸身和歸尾切成厚20～40 μm的橫切片，并用CaseViewer來觀察和測量“當(dāng)歸”藥材的歸頭、歸身、歸尾的木栓層、皮層、韌皮部、木質(zhì)部的厚度和油室的大小、面積、數(shù)量以及分泌細(xì)胞的數(shù)量。選取代表性顯微制片拍照。

表1 材料信息表

2 結(jié)果分析

2.1 8種“歸”藥材橫切面以及不同部位的細(xì)胞簡圖 比較8種“當(dāng)歸”的細(xì)胞簡圖(見附圖1-8)，在細(xì)胞簡圖中的字母表示為：ck-木栓層、c-皮層、cle-裂隙、oca-油室、ph-韌皮部、cam-形成層、x-木質(zhì)部、1-樹脂道。

附圖1，墨江大葉當(dāng)歸歸頭、歸身與歸尾皆呈圓柱形，歸頭橫切面>歸身橫切面>歸尾橫切面。組織切片由外至內(nèi)可分為木栓層、皮層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部，其中韌皮部極其寬廣，且伴有裂隙的存在。油室主要分布在韌皮部與木質(zhì)部中，數(shù)目較多，分泌細(xì)胞數(shù)量在6～10個之間，歸頭中存在少量樹脂道，歸身和歸尾中沒有樹脂道的分布。

圖1 墨江大葉當(dāng)歸

附圖2，墨江矮歸歸頭、歸身與歸尾皆呈圓柱形，且歸頭橫切面>歸身橫切面>歸尾橫切面。組織切片由外至內(nèi)可分為木栓層、皮層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部，其中韌皮部相對寬廣，細(xì)胞相對緊致，僅歸頭中存在少量裂隙，油室主要分布于皮層、韌皮部與木質(zhì)部中，且數(shù)目較多，分泌細(xì)胞的數(shù)量在8～12個之間，在歸身韌皮部中存在大量的樹脂道。

圖2 墨江矮歸

附圖3，墨江栽培當(dāng)歸歸頭、歸身與歸尾皆呈圓柱形，且歸頭橫切面>歸身橫切面>歸尾橫切面。組織切片由外至內(nèi)可分為木栓層、皮層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部，其韌皮部比較寬廣，細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，存在較多的裂隙，油室主要分布于韌皮部，且數(shù)量較少，分泌細(xì)胞的數(shù)量在6～15個之間，且歸身中無油室存在，細(xì)胞中沒有樹脂道的分布。

圖3 墨江栽培當(dāng)歸

附圖4，墨江野生當(dāng)歸歸頭呈不規(guī)則形狀，歸身與歸尾皆呈圓柱形，且歸頭橫切面>歸身橫切面>歸尾橫切面。組織切片由外至內(nèi)可分為木栓層、皮層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部，其韌皮部比較寬廣，細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，存在較多裂隙，油室主要分布于皮層、韌皮部與木質(zhì)部中，且數(shù)量較多，分泌細(xì)胞的數(shù)量在5～11個之間，細(xì)胞中無樹脂道的分布。

圖4 墨江野生當(dāng)歸

附圖5，瀾滄當(dāng)歸歸頭、歸身與歸尾皆呈圓柱形，且歸頭橫切面>歸身橫切面>歸尾橫切面。組織切片由外至內(nèi)可分為木栓層、皮層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部，其韌皮部相對寬廣，細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，存在較多裂隙，油室主要分布于皮層和韌皮部中，且數(shù)量中等，但其歸頭的木質(zhì)部中也存在一些油室，分泌細(xì)胞的數(shù)量在5～11個之間，細(xì)胞中無樹脂道的分布。

附圖6，西盟當(dāng)歸歸頭、歸身與歸尾皆呈圓柱形，且歸頭橫切面>歸身橫切面>歸尾橫切面。組織切片由外至內(nèi)可分為木栓層、皮層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部，其韌皮部相對寬廣，歸頭細(xì)胞緊致無裂隙存在，但歸身與歸尾的細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，存在較多的裂隙，油室主要分布于韌皮部，數(shù)量較多，但其歸頭的木質(zhì)部中也存在油室，分泌細(xì)胞的數(shù)量在4～7個之間，細(xì)胞中無樹脂道的分布。

圖5 瀾滄當(dāng)歸

圖6 西盟當(dāng)歸

附圖7：大蘆山當(dāng)歸歸頭、歸身與歸尾皆呈圓柱形，且歸頭橫切面>歸身橫切面>歸尾橫切面。組織切片由外至內(nèi)可分為木栓層、皮層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部，其韌皮部相對寬廣，細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，存在大量的裂隙，其油室主要分布于皮層、韌皮部與木質(zhì)部中，,數(shù)量較多，分泌細(xì)胞的數(shù)量在5～12個之間，細(xì)胞中無樹脂道分布。

附圖8，鎮(zhèn)沅秦歸歸頭、歸身與歸尾皆呈圓柱形，且歸頭橫切面>歸身橫切面>歸尾橫切面。組織切片由外至內(nèi)可分為木栓層、皮層、韌皮部、形成層、木質(zhì)部，其韌皮部較為寬廣，細(xì)胞結(jié)構(gòu)松散，存在大量的裂隙，其油室主要分布于歸尾韌皮部中，且數(shù)量較少，其歸頭、歸身中皆無油室，分泌細(xì)胞的數(shù)量在5～7之間，細(xì)胞中無樹脂道分布。

圖7 大蘆山當(dāng)歸

圖8 鎮(zhèn)沅秦歸

8種不同地方的“歸”藥材，橫切面外至內(nèi)可分為木栓層、皮層、韌皮部、形成層和木質(zhì)部，韌皮部相對寬廣，均有油室和分泌細(xì)胞。樹脂道僅見于墨江大葉當(dāng)歸和墨江矮歸中。 因此單從組織結(jié)構(gòu)上不能將8種“歸”藥材鑒別開來，需要做8種“歸”藥材的顯微數(shù)量比較。

2.2顯微組織切片的數(shù)量比較分析

2.2.1不同部位的木栓層厚度比較 見表2。

表2 8種“當(dāng)歸”藥材木栓層厚度的比較

注意：同列相同字母表示差異不顯著，同列不同字母表示差異顯著(下同)。

以某一指標(biāo)條件下的兩個物種顯著差異為分支點，建立8種“當(dāng)歸藥材”的檢索路徑如下：

1.歸頭木栓層厚度大于等于127 μm

2

1.歸頭木栓層厚度小于127 μm

3

2.歸身木栓層厚度大于等于101 μm

墨江野生當(dāng)歸

2.歸身木栓層厚度小于101 μm 西盟當(dāng)歸

3.歸頭木栓層厚度為66 μm以下

瀾滄當(dāng)歸

3.歸頭木栓層厚度為66～91 μm

4

4.歸身木栓層厚度大于等于139 μm

墨江大葉當(dāng)歸

4.歸身木栓層厚度小于139 μm

5

5.歸身大于木栓層厚度大于等于77 μm

墨江矮歸

5.歸身大于木栓雙層厚度小于77 μm

6

6.歸身大于木栓層厚度大于等于66 μm

大蘆山當(dāng)歸

6.歸身大于木栓層厚度小于66 μm

7

7.歸尾大于木栓雙層厚度大于30 μm

墨江栽培當(dāng)歸

7.歸尾大于木栓層厚度大于30 μm

鎮(zhèn)沅秦歸

綜上，以木栓層厚度顯微數(shù)量為鑒定依據(jù)，可以鑒別8種“當(dāng)歸”藥材，由此木栓層可作為獨立的鑒定點。

2.2.2 不同部位的皮層厚度比較 見表3。

以皮層厚度指標(biāo)下的兩個物種顯著差異為分支點，建立8種“當(dāng)歸藥材”的檢索路徑如下：

1.歸頭皮層厚度大于113 μm

墨江栽培當(dāng)歸

1.歸頭皮層厚度小于113 μm

2

2.歸尾皮層厚度大于34 μm

3

2.歸尾皮層厚度小于34 μm

墨江野生當(dāng)歸

3.歸尾皮層厚度大于56 μm

4

3.歸尾皮層厚度小于56 μm

墨江大葉當(dāng)歸

4.歸頭皮層厚度大于68 μm

5

4.歸頭皮層厚度小于68 μm

瀾滄當(dāng)歸

5.歸尾皮層厚度大于78 μm

墨江矮歸

綜上，以木栓層厚度顯微數(shù)據(jù)為鑒定依據(jù)時，只可以鑒別出墨江栽培當(dāng)歸、墨江野生當(dāng)歸、墨江大葉當(dāng)歸、瀾滄當(dāng)歸和墨江矮歸，其他3種當(dāng)歸的皮層厚度極其相近，無法進(jìn)行鑒別。由此皮層厚度不可作為獨立的鑒定點。

2.2.3 不同部位的韌皮部厚度比較 見表4。

1.歸頭韌皮部厚度大于6748 μm

墨江大葉當(dāng)歸

1.歸頭韌皮部厚度小于6748 μm

2

2.歸頭韌皮部厚度大于3015 μm

墨江栽培當(dāng)歸

2.歸頭韌皮部厚度小于3015 μm

3

3.歸頭韌皮部厚度大于1456 μm

大蘆山當(dāng)歸

3.歸頭韌皮部厚度小于1456 μm

4

4.歸頭韌皮部厚度大于1301 μm

5

4.歸頭韌皮部厚度小于1301 μm

6

5.歸身韌皮部厚度大于1945 μm

鎮(zhèn)沅秦歸

5.歸身韌皮部厚度小于1945 μm

墨江野生當(dāng)歸

6.歸身韌皮部厚度大于1705 μm

墨江矮歸

6.歸身韌皮部厚度小于1705 μm

7

7.歸身韌皮部厚度大于625 μm

瀾滄當(dāng)歸

7.歸身韌皮部厚度小于625 μm

西盟當(dāng)歸

綜上，以韌皮部的顯微數(shù)據(jù)為鑒定依據(jù)，可以鑒別8種“當(dāng)歸”藥材，由此韌皮部可作為獨立的鑒定點。

表3 8種“當(dāng)歸”藥材皮層厚度的比較

表4 8種“當(dāng)歸”藥材韌皮部厚度的比較

2.2.4 不同部位木質(zhì)部厚度比較 見表5。

1.歸頭木質(zhì)部厚度大于5901 μm

墨江栽培當(dāng)歸

1.歸頭木質(zhì)部厚度小于5901 μm

2

2.歸頭木質(zhì)部厚度大于4813 μm

墨江大葉當(dāng)歸

2.歸頭木質(zhì)部厚度小于4813 μm

3

3.歸頭木質(zhì)部厚度大于1875 μm

大蘆山當(dāng)歸

3.歸頭木質(zhì)部厚度小于1875 μm

4

4.歸頭木質(zhì)部厚度大于1281 μm

5

4.歸頭木質(zhì)部厚度小于1281 μm

6

5.歸身木質(zhì)部厚度大于1968 μm

墨江矮歸

5.歸身木質(zhì)部厚度小于1968 μm

7

6.歸頭木質(zhì)部厚度大于1166 μm

瀾滄當(dāng)歸

6.歸頭木質(zhì)部厚度小于1166 μm

鎮(zhèn)沅秦歸

7.歸身木質(zhì)部厚度大于668 μm

墨江野生當(dāng)歸

7.歸身木質(zhì)部厚度小于668 μm

西盟當(dāng)歸

綜上，以木質(zhì)部的顯微數(shù)據(jù)為鑒定依據(jù)，可以鑒別8種“當(dāng)歸”藥材，由此木質(zhì)部可作為獨立的鑒定點。

2.2.5 不同部位的油室面積比較 見表6。

1.歸頭油室面積大于7834π μm

墨江矮歸

1.歸頭油室面積小于7834π μm

2

2.歸頭油室面積大于1186π μm

3

2.歸頭油室面積小于1186π μm

西盟當(dāng)歸

3.歸身油室面積大于5033π μm

4

3.歸身油室面積小于5033π μm

5

4.歸尾油室面積大于2936π μm

墨江大葉當(dāng)歸

4.歸尾油室面積小于2936π μm

墨江野生當(dāng)歸

5.歸身油室面積大于2413π μm

6

5.歸身油室面積小于2413π μm

瀾滄當(dāng)歸

6.歸身有油室

大蘆山當(dāng)歸

6.歸身無油室

7

7.歸頭有油室

墨江栽培當(dāng)歸

7.歸頭無油室

鎮(zhèn)沅秦歸

綜上，以木質(zhì)部的顯微數(shù)據(jù)為鑒定依據(jù)，可以鑒別8種“當(dāng)歸”藥材，由此木質(zhì)部可作為獨立的鑒定點。

在普洱藥材市場上流通著的8種“當(dāng)歸”中，墨江矮歸的歸身中存在大量的樹脂道，墨江大葉當(dāng)歸的歸頭中有少量的樹脂道，通過檢索表檢索，可以從木栓層、韌皮部、木質(zhì)部、油室面積這四個方面確定當(dāng)歸的物種，皮層檢索表只可鑒別出部分，要想鑒別出其他還需要其他的輔助手段。

表5 8種“當(dāng)歸”藥材木質(zhì)部厚度的比較

表6 8種“當(dāng)歸”藥材油室面積的比較

3 結(jié)論與討論

當(dāng)歸作為普洱當(dāng)?shù)刂饕囊晃端幧攀巢模凇岸宋缢幨小鄙贤锂惷?，同名異物的現(xiàn)象非常普遍，嚴(yán)重干擾了當(dāng)歸藥材的秩序。市場流通的“當(dāng)歸”都是傘形科的植物塊根,分屬于當(dāng)歸屬(2種)、藁本屬(4種)、川明參屬(1種)、滇芹屬(1種)?！吨袊幍洹穂4]收錄的有藁本、遼藁本、紫花前胡3種。藁本、遼藁本有祛風(fēng)，散寒，除濕，止痛。用于風(fēng)寒感冒，巔頂疼痛，風(fēng)濕痹痛。紫花前胡當(dāng)歸屬植物，降氣化痰，散風(fēng)清熱。用于痰熱喘滿，咯痰黃稠，風(fēng)熱咳嗽痰多。川明參屬只有1種，特產(chǎn)于中國，根入藥，為利肺、和胃、化痰、解毒的作用[5]。滇芹屬只產(chǎn)1種，產(chǎn)于云南，主治感冒風(fēng)寒，發(fā)熱頭痛[5]。正品當(dāng)歸為當(dāng)歸屬當(dāng)歸植物，能補血活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤腸通便，用于經(jīng)閉。痛經(jīng)，風(fēng)濕痹痛，跌打損傷。

傘形科植物多數(shù)可入藥，花小、形態(tài)差異小，因此彼此之間互為混偽品的現(xiàn)象較為普遍，石防風(fēng)常作為前胡的混偽品[6]。同科同屬植物的顯微結(jié)構(gòu)很類似，因此顯微數(shù)量差異比較分析是近緣屬種鑒別的主要依據(jù)，如李劍美[7]利用顯微數(shù)量的差異鑒別了蘭科白及及其混偽品。

本文以某一指標(biāo)條件下的兩個物種顯微數(shù)量顯著差異為分支點，利用平行檢索表鑒別“當(dāng)歸”藥材，在觀察分析的5個指標(biāo)中，除皮層厚度不能鑒別外，其余的木栓層厚度、韌皮部厚度、木質(zhì)部厚度、油室面積4個指標(biāo)都可以鑒別8種藥材。但是其方法有一定的局限性，例如生長周期、生育期、地理環(huán)境都都會受到一定程度的影響。因此還應(yīng)以油室的數(shù)量，分布的區(qū)域，樹脂道的有無作為鑒別8種“當(dāng)歸”藥材的輔助手段。