黃崇波，郭志強，刁 慧，周夢佳，鄺聲耀，李書偉

（1.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川成都 610066；2.動物遺傳育種四川省重點實驗室，四川成都 610066）

近年來，抗生素在畜禽生產(chǎn)中濫用造成致病菌耐藥性、環(huán)境污染、抗生素殘留等問題，許多國家都對抗生素的使用作出了限制措施。2019 年，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布194 號公告，宣布退出除中藥外的所有促生長類藥物飼料添加劑品種，這標志著我國畜牧行業(yè)正式步入飼料“無抗”時代。因此，尋找具有安全高效、環(huán)保、無殘留等特點的抗生素替代品，成為了當下行業(yè)的研究熱點。

百里香酚是一種單萜酚類化合物，有特殊香味，主要存在于百里香、牛至、冬香薄荷等植物提取的精油中。研究證明，百里香酚在抗真菌[1]、抗氧化[2]、抗炎[3]和抑菌[3]等方面作用明顯。百里香酚在家兔中的應(yīng)用報道主要集中于牛至油和百里香精油，單獨的百里香酚研究較少[4-5]。本試驗旨在研究百里香酚對肉兔生長性能、小腸黏膜結(jié)構(gòu)和免疫器官指數(shù)的影響，考察百里香酚在肉兔生產(chǎn)中替代抗生素的潛力，為其在肉兔中的合理利用提供指導(dǎo)和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 百里香酚由山東騰望化工有限公司提供，經(jīng)四川威爾測試技術(shù)股份有限公司測試為98.4%。恩拉霉素由山東勝利生物工程有限公司提供（批號：ENP 81901024），含量≥4%。試驗兔和場地由四川省畜牧科學(xué)院養(yǎng)兔研究所提供。

1.2 試驗設(shè)計 試驗采用單因子試驗設(shè)計將288 只35 日齡斷奶伊拉肉兔按照公母各半、體重接近原則分為6 個處理組，每個處理6 個重復(fù)，每個重復(fù)8 只兔。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧；恩拉霉素組在基礎(chǔ)飼糧中添加10 mg/kg恩拉霉素；試驗組分別在基礎(chǔ)日糧中添加50、100、150、200 mg/kg 百里香酚。

1.3 試驗日糧和飼養(yǎng)管理 參照NRC（1977）肉兔營養(yǎng)需要和布拉斯[6]的生長兔飼養(yǎng)標準，結(jié)合伊拉肉兔生長發(fā)育特點，以及本地區(qū)飼料資源狀況來設(shè)計基礎(chǔ)日糧，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

試驗前對肉兔兔舍進行徹底沖洗和嚴格消毒。預(yù)試期7 d，正試期42 d。試驗期間日喂食2 次（08:00 和18:00）。飼養(yǎng)管理和免疫程序采用常規(guī)方法，自然采光、通風(fēng)。自由采食，自由飲水。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 指標測定與方法

1.4.1 生長性能 于試驗開始和結(jié)束時，將所有兔稱重，記錄試驗期各重復(fù)耗料量，以單只兔為單位計算日增重、日采食量和耗料增重比。

日增重（g/d）=[試驗結(jié)束時體重-試驗開始時體重]/試驗天數(shù)

日采食量（g/d）=[ 投料量-剩料量]/（試驗天數(shù)×每個重復(fù)兔只數(shù)）

耗料增重比=日采食量/日增重

1.4.2 小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)和免疫器官指數(shù) 試驗結(jié)束時，每個重復(fù)選擇1 只體重接近的兔子（每組6 只，確保每組雌雄各3 只）進行屠宰，分別截取十二指腸、空腸、回腸中部各2 cm，用生理鹽水沖洗干凈內(nèi)容物后，放在10%福爾馬林中固定8～24 h。采用常規(guī)石蠟切片制作方法，將置于10% 中性福爾馬林固定液中的十二指腸、空腸和回腸組織經(jīng)常規(guī)酒精脫水，石蠟切片包埋，切片厚度6 μm，蘇木精-伊紅（HE）染色，在光學(xué)顯微鏡下進行觀察，每組內(nèi)每張切片挑選3 個100 倍視野進行拍照。拍照時盡量讓組織充滿整個視野，保證每張照片的背景光一致。應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0 軟件以右下角100 倍標尺為標準，每張切片選取5 根完整的絨毛，分別測量絨毛高度和隱窩深度，以其平均數(shù)為測定數(shù)據(jù)作統(tǒng)計分析，并計算絨毛高度/隱窩深度值（V/C）。

屠宰后取脾臟和圓小囊，稱重計算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（g/kg）=免疫器官重量/屠宰前活重1.5 統(tǒng)計分析 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，并用LSD 方法進行多重比較，P＜0.05 為差異顯著，結(jié)果以平均值±標準差表示。

2 結(jié)果

2.1 百里香酚對肉兔生長性能的影響 由表2 可知，各試驗組的平均日增重與對照組相比差異不顯著。5 個試驗組間，200 mg/kg 百里香酚組的平均日增重顯著低于恩拉霉素組和50 mg/kg 百里香酚組，其他各組間差異不顯著。200 mg/kg 百里香酚組的平均日采食量顯著低于對照組和恩拉霉素組，其他各組間差異不顯著。與對照組相比，添加100、150、200 mg/kg 百里香酚顯著降低耗料增重比，恩拉霉素組和50 mg/kg 百里香酚組與對照組差異不顯著。

2.2 百里香酚對肉兔小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 由表3 可知，與對照組比，恩拉霉素組回腸絨毛高度提高了29.67%（P＜0.05）；50mg/kg 百里香酚組十二指腸、空腸和回腸絨毛高度分別提高38.83%、23.28%和18.85%（P＜0.05），100 mg/kg 百里香酚組十二指腸和空腸絨毛高度分別提高40.72%和18.35%（P＜0.05）；150、200 mg/kg 百里香酚組十二指腸絨毛高度分別提高21.69% 和20.37%（P＜0.05）。與恩拉霉素組相比，50、100、150、200 mg/kg 百里香酚組十二指腸絨毛高度分別提高38.51%、40.39%、21.41% 和20.09%（P＜0.05）；50 mg/kg 百里香酚組空腸絨毛高度提高了18.03%（P＜0.05）；200 mg/kg 百里香酚組回腸絨毛高度降低了15.41%（P＜0.05）。各百里香酚組間，50、100 mg/kg 百里香酚組十二指腸絨毛高度顯著高于其他劑量的百里香酚組；50 mg/kg 百里香酚組空腸絨毛高度顯著高于150、200 mg/kg 百里香酚組。

與對照組相比，恩拉霉素組十二指腸和空腸的隱窩深度分別降低了18.41%和18.24%（P＜0.05）。與恩拉霉素組相比，100、150、200 mg/kg 百里香酚組十二指腸的隱窩深度分別提高21.28%、32.54% 和33.75%（P＜0.05）；50、150、200 mg/kg 百里香酚組空腸的隱窩深度分別提高17.52%、26.23%和22.68%（P＜0.05）。各百里香酚組間，150、200 mg/kg 百里香酚組十二指腸的隱窩深度顯著高于50 mg/kg 百里香酚組。

與對照組相比，50、100 mg/kg 百里香酚組和恩拉霉素組的十二指腸、空腸V/C 值顯著提高；恩拉霉素組和100 mg/kg 百里香酚組回腸V/C 值分別提高31.01%和19.13%（P＜0.05）。與恩拉霉素組相比，50、100 mg/kg百里香酚組十二指腸V/C 值分別提高21.78%和15.43%；150、200 mg/kg 百里香酚組空腸和回腸V/C 值顯著降低。各百里香酚組間，150、200 mg/kg 百里香酚組十二指腸和空腸V/C 值顯著低于50、100 mg/kg 百里香酚組。

2.3 百里香酚對肉兔免疫器官指數(shù)的影響 由表4 可知，抗生素和百里香酚對肉兔圓小囊和脾臟重量及圓小囊指數(shù)無顯著性影響，但50 mg/kg 百里香酚組脾臟指數(shù)顯著高于對照組和恩拉霉素組。

3 討 論

3.1 百里香酚對肉兔生長性能的影響 研究發(fā)現(xiàn)，添加100、150 mg/kg 牛至油可顯著提高新西蘭肉兔的日增重和飼料轉(zhuǎn)化效率[7]。孫海濤等[8]報道，添加500 mg/kg牛至油顯著提高了肉兔的日增重、采食量和飼料轉(zhuǎn)化效率。Abdel-Wareth 等[5]研究表明，在高溫環(huán)境下，與1.50 g/kg橄欖油聯(lián)用，百里香精油能顯著改善兔的日增重、采食量和飼料轉(zhuǎn)化率。朱曉磊等[9]研究顯示，添加百里香精油可顯著提高22～42 日齡麻花雞的平均日增重并降低耗料增重比。馬玉芳等[10]在仔豬上的研究表明，日糧中添加牛至油能顯著提高日增重和采食量。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加100～200 mg/kg 的百里香酚，能顯著提高肉兔的飼料轉(zhuǎn)化效率但對日增重?zé)o影響。當百里香酚劑量達到200 mg/kg，采食量顯著低于對照組，這與上述報道不完全一致，可能是由于本試驗單獨使用百里香酚所致。不同于牛至油，百里香酚具有苦味并伴有輕微灼燒感，這可能刺激動物消化道，引起進食厭惡，進而降低采食量。Abdel-Wareth 等[11]研究顯示，百里香和牛至的植物粉均能提高肉雞的飼料轉(zhuǎn)化效率，但僅觀察到牛至提高了采食量。Naghmeh 等[12]對日本鵪鶉的研究表明，添加400 mg/kg 百里香精油時的飼料轉(zhuǎn)化效率效果最佳，但顯著降低了采食量，Trevisi 等[13]在仔豬方面的研究也得出了相似結(jié)果。百里香酚在降低采食量的同時能提高飼料轉(zhuǎn)化效率，這一方面可能是百里香酚通過促進動物腸道發(fā)育，增強腸道抗氧化能力，從而保障腸道完整性，激活消化酶活性，最終提高消化吸收能力；另一方面可能是其具有抗菌作用，能通過改善腸道菌群平衡，保證動物消化吸收能力的發(fā)揮。Placha 等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在生長兔日糧中添加百里香精油0.5 g/kg 顯著增加了血漿中總抗氧化能力（TAS）和肝臟中谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）的活性，降低了十二指腸組織中丙二醛（MDA）濃度，并通過提高跨上皮電阻（TEER）增強了腸道的完整性。李方方等[15]在斷奶仔豬日糧中添加植物精油（百里香酚和香芹酚各占25%），顯著改善了粗蛋白、鈣、磷的表觀消化率。Su 等[16]研究表明，補充植物精油可顯著提高斷奶仔豬干物質(zhì)消化率及十二指腸蔗糖酶和空腸黏膜乳糖酶的活性，降低血清甘油三酯和膽固醇濃度。朱曉磊等[17]研究發(fā)現(xiàn)添加百里香精油能顯著降低雞腸道大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量。

表2 百里香酚對肉兔生長性能的影響

表3 百里香酚對肉兔小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

表4 百里香酚對肉兔腸免疫器官指數(shù)的影響

3.2 百里香酚對肉兔小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)作為腸道健康的重要指標，小腸絨毛長表示成熟細胞多和吸收面積大，對養(yǎng)分吸收能力強；隱窩深度反映細胞生成率，隱窩變淺表明細胞成熟率上升，分泌功能增強。王思宇等[18]研究顯示，添加化學(xué)合成的百里香酚和香芹酚混合物可顯著增強仔豬十二指腸的絨毛高度，降低十二指腸、空腸和回腸的隱窩深度，提高十二指腸、空腸和回腸的V/C 值。刁慧[19]研究發(fā)現(xiàn)，將苯甲酸和百里香酚聯(lián)用可顯著提高斷奶仔豬空腸絨毛高度及空腸、回腸的V/C 值。Mohiti-Asli 等[20]對肉仔雞研究表明，添加300 mg/kg 牛至油可顯著增加空腸和回腸絨毛高度，降低空腸隱窩深度，提高空腸V/C 值。韓旭[21]研究表明，添加牛至油能提高蛋雞十二指腸、空腸絨毛高度，降低十二指腸和空腸隱窩深度，提高十二指腸V/C 值。本試驗結(jié)果表明，添加百里香酚可顯著提高肉兔十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度和V/C值，但并未觀察到有降低隱窩深度的作用。這與前人的研究不完全一致，可能與研究動物和采用精油成分不同相關(guān)，也可能是不同精油成分種類之間存在一定的協(xié)同作用，致使混合精油在抑菌等方面優(yōu)于單一成分精油，具體原因有待進一步研究。

3.3 百里香酚對肉兔免疫器官指數(shù)的影響 脾臟和圓小囊是兔類的重要免疫器官。脾臟是機體調(diào)控細胞免疫和體液免疫的主要場所。圓小囊是兔特有的免疫器官，位于回腸末端，是兔重要的腸相關(guān)淋巴組織，在消化道黏膜免疫和抗感染中起著重要作用。免疫器官指數(shù)在一定意義上能反映動物免疫能力的高低。馮志華等[22]對斷奶獺兔的研究表明，添加牛至油可顯著提高獺兔的脾臟指數(shù)。張文靜等[23]研究發(fā)現(xiàn)，采用百里香酚、香芹酚和丁香酚組成的植物精油飼喂肉仔雞，可顯著提高脾臟和法氏囊指數(shù)，但對胸腺指數(shù)無影響。本試驗也顯示，添加50 mg/kg 百里香酚組能顯著提高肉兔的脾臟指數(shù)，與上述報道基本一致。但郝丹丹等[24]研究顯示，添加牛至油未對蛋雞的免疫器官指數(shù)造成影響，這可能是由于影響免疫器官發(fā)育的因素復(fù)雜，動物個體之間差異較大，單個試驗尚不能完全反映實際情況。因此，百里香酚對肉兔免疫能力的影響還有待進一步研究。

4 結(jié) 論

本試驗結(jié)果顯示，在肉兔日糧中添加百里香酚可提高肉兔的生長性能，改善小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)，促進動物腸道發(fā)育，增強動物機體免疫力。本試驗中，百里香酚對肉兔生長性能、小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)以及免疫器官的影響與10 mg/kg 恩拉霉素相比差異不大，具有替代抗生素的潛力。綜合考慮，建議肉兔日糧中百里香酚適宜添加量為50～100 mg/kg。