田 方，高 晗，孫福仁，耿彥梅，李雪利，曾永禎，李軍山，2*

(1.神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430；2.楚雄神威施普瑞藥物研究有限公司，云南 楚雄 675000)

厚樸始載于漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》，作為理氣化濕藥，歷來(lái)有著廣泛的臨床應(yīng)用，現(xiàn)有記載的中成藥配方達(dá)200多種[1]。厚樸藥材為木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.或凹葉厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥樹皮、根皮及枝皮，其味苦、辛，性溫，歸脾、胃、肺、大腸經(jīng)，具有燥濕消痰、下氣除滿的功效[2]?！安灰越?，則棘人喉舌”，因此厚樸常制成姜厚樸入藥[3]。

姜厚樸的姜汁炮制方法有三種，分別為生姜榨汁、干姜煮汁、生姜煮汁，《中國(guó)藥典》采用的是生姜榨汁的方法。不同方法制得的姜厚樸質(zhì)量不同，通過(guò)質(zhì)量評(píng)價(jià)可為其炮制工藝提供依據(jù)。目前，姜厚樸的質(zhì)量評(píng)價(jià)大多數(shù)是檢測(cè)飲片的性狀、浸出物含量、揮發(fā)性成分、色譜圖等[4-9]。近些年來(lái)鐘凌云等[3，10-11]針對(duì)姜厚樸對(duì)大鼠和小鼠胃黏膜損傷的抑制作用、抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了藥理研究，從藥效方面對(duì)姜厚樸的質(zhì)量進(jìn)行了評(píng)價(jià)。鑒于中藥多以湯劑形式應(yīng)用于臨床[12]，隨著標(biāo)準(zhǔn)湯劑概念的提出及其在中成藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用，筆者認(rèn)為采用標(biāo)準(zhǔn)湯劑的評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)飲片質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)較為合理。本實(shí)驗(yàn)將三種姜汁炮制方法制得的姜厚樸分別制成標(biāo)準(zhǔn)湯劑，采用標(biāo)準(zhǔn)湯劑指標(biāo)初步評(píng)價(jià)飲片質(zhì)量，為姜厚樸的炮制工藝提供參考依據(jù)。

1 儀器與試劑

日本島津公司高效液相色譜儀(LC-20AT型泵)，真空冷凍干燥機(jī)(Tofflon)，CPA225D分析天平(Sartorius)，JM-A5002電子天平(余姚市紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司)，水循環(huán)真空泵(上海申生科技有限公司)，DHG-9140A熱風(fēng)循環(huán)鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司、太倉(cāng)精宏儀器設(shè)備有限公司)，KH3200E型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)，Shunliu-12N型冷凍干燥機(jī)(南京順流儀器有限公司)。

厚樸酚(批號(hào)111911-201603，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，和厚樸酚(批號(hào)111809-201403，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；色譜純甲醇(批號(hào)20180713，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)，分析純甲醇(批號(hào)20190228，北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司)。鮮姜、干姜購(gòu)自于山東，厚樸藥材來(lái)自道地產(chǎn)區(qū)四川[8]，經(jīng)原河北省藥品檢驗(yàn)研究院孫寶惠主任中藥師鑒定，均為正品，且經(jīng)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)均符合2015年版《中國(guó)藥典》要求。

2 方法與結(jié)果

2.1 姜厚樸的制備

2.1.1 厚樸飲片制備 取厚樸藥材，刮去粗皮，洗凈，潤(rùn)透，切成直徑為2～5 mm的絲，備用。另取部分厚樸藥材，刮去粗皮，備用。

2.1.2 姜厚樸制備 生姜榨汁：取生姜，洗凈，搗爛，加0.7倍量水，壓榨取汁，再加水適量，壓榨取汁，合并兩次汁液，使得生姜汁∶生姜=1∶1(mL/g)。取厚樸絲，加生姜汁拌勻，悶潤(rùn)1 h，用文火炒干，取出晾涼。用量為厚樸絲∶生姜=100∶10，制得3批飲片。

干姜煮汁：取干姜片，洗凈，加6倍量水，煮沸后煎煮20 min，取煎液即得干姜汁。取厚樸絲，加干姜汁拌勻，悶潤(rùn)至姜汁被吸盡，用文火炒干，取出晾涼。用量為厚樸絲∶干姜=100∶3.3，制得3批飲片。

生姜煮汁：取生姜，切片，加水煮湯，另取刮去粗皮的厚樸藥材，置于姜湯中，反復(fù)燒淋，并用微火加熱共煮，至姜液被吸盡時(shí)取出，切絲，干燥，制得3批飲片。

2.2 姜厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑冷干樣品制備

取9批自制姜厚樸飲片，每個(gè)炮制方法取3個(gè)樣品，各稱取100 g，至陶瓷煎藥壺中，煎煮兩次，第一煎加8倍量水，浸泡30 min，煮沸，保持微沸煎煮30 min，100目篩網(wǎng)過(guò)濾；二煎加7倍量水，煮沸，保持微沸煎煮20 min，100目篩網(wǎng)過(guò)濾。合并兩次煎液，減壓濃縮至適量，冷凍干燥，即得。

2.3 姜厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中厚樸酚與和厚樸酚含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(78∶22)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 294 nm。理論塔板數(shù)按厚樸酚色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于3 800。

2.3.2 對(duì)照品溶液制備 取厚樸酚對(duì)照品、和厚樸酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每 1 mL含厚樸酚 20 μg、和厚樸酚10 μg的混合溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液制備 取本品粉末約 0.1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率 250 W，頻率 40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各 10 μL，注入液相色譜儀測(cè)定，即得。見圖1、圖2。

圖1 對(duì)照品色譜

圖2 供試品色譜

2.3.5 方法學(xué)考察 (1)精密度考察。按照“2.3.3”項(xiàng)下方法制備樣品1份，按照“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件平行進(jìn)樣6次，結(jié)果見表1。厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑中厚樸酚峰面積RSD為1.14%，和厚樸酚峰面積RSD為1.26%，表明儀器精密度良好。

表1 精密度測(cè)定結(jié)果

(2)重復(fù)性考察。按照“2.3.3”項(xiàng)下方法，平行制備樣品6份，按照“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表2。厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑中厚樸酚平均含量為0.562%，RSD為1.25%；和厚樸酚平均含量為0.367%，RSD為1.32%，表明該方法重復(fù)性良好。

表2 重復(fù)性考察結(jié)果 (%)

(3)穩(wěn)定性試驗(yàn)。取一份已制備好的供試品，分別于放置0、2、4、6、8、12 h后按照“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表3。厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品在12 h內(nèi)厚樸酚平均含量為0.569%，RSD為0.96%；和厚樸酚平均含量為0.372%，RSD為1.39%，表明供試品在12 h內(nèi)較穩(wěn)定。

表3 穩(wěn)定性考察結(jié)果 (%)

(4)加樣回收率試驗(yàn)。分別精密稱取厚樸酚對(duì)照品20 mg、和厚樸酚對(duì)照品10 mg，置于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。取本品粉末(編號(hào)YP1-2)約0.05 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液150 μL，甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，分別用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。厚樸酚與和厚樸酚總量加樣回收率為97.62%～98.76%，平均回收率為98.16%，RSD為0.43%。

表4 厚樸酚、和厚樸酚準(zhǔn)確度考察結(jié)果 (n=6)

2.4 姜厚樸飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中其他指標(biāo)測(cè)定

分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率、pH值、浸出物含量進(jìn)行測(cè)定：①理論出膏率測(cè)定：量取煎煮提取液總體積(室溫)V(mL)，攪拌均勻后精密吸取25 mL提取液至干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，于105 ℃干燥3 h，干燥器中冷卻后，迅速精密稱定重量m1(g)，若藥材重量為m2(g)，則理論出膏率為m1/25×V/m2×100%；②pH測(cè)定方法：參照《中國(guó)藥典》2015年版通則0631 pH值測(cè)定法；③浸出物測(cè)定：取標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉末約2.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入乙醇100 mL，按照醇溶性浸出物測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2015年版 通則2201)項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定。結(jié)果見表5，3組不同姜汁炮制方法制得的姜厚樸飲片含量和提取液pH無(wú)明顯差異，由生姜榨汁制得的姜厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率、標(biāo)準(zhǔn)湯劑含量、含量轉(zhuǎn)移率明顯高于其他兩種。由于厚樸酚與和厚樸酚在水中的溶解度較小[13]，而姜厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑為姜厚樸經(jīng)水提制成，故含量轉(zhuǎn)移率較低。

表5 不同姜汁炮制方法制得姜厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑測(cè)定結(jié)果

采用上述標(biāo)準(zhǔn)湯劑指標(biāo)初步評(píng)價(jià)姜厚樸的飲片質(zhì)量，最終選擇生姜榨汁為姜厚樸的姜汁炮制工藝，該結(jié)果與現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》規(guī)定的炮制方法一致。

3 討論

研究[14-24]表明，厚樸酚及和厚樸酚是姜厚樸中抗菌、抗炎、抗腫瘤的主要活性成分，2015版《中國(guó)藥典》以厚樸酚和和厚樸酚總量為指標(biāo)成分控制厚樸藥材及飲片的質(zhì)量，而在厚樸相關(guān)復(fù)方中，也常以厚樸酚和和厚樸酚作為指標(biāo)成分評(píng)價(jià)復(fù)方制劑的質(zhì)量，因此本實(shí)驗(yàn)選定厚樸酚與和厚樸酚總量作為姜厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

我國(guó)幅員遼闊，不同地域人群的體質(zhì)差異較大，地方用藥習(xí)俗和藥材加工方法差異也較大，各地炮制方法往往并不能全面地被藥典收載進(jìn)去。如何結(jié)合現(xiàn)代中藥研究技術(shù)考證流傳下來(lái)的何種炮制方法最為適宜，這是一項(xiàng)大工程。本實(shí)驗(yàn)僅以姜厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑指標(biāo)初步評(píng)價(jià)飲片的質(zhì)量，而實(shí)際上姜厚樸多是經(jīng)過(guò)組方應(yīng)用于臨床，由于多味中藥可能產(chǎn)生相互影響，單方標(biāo)準(zhǔn)湯劑指標(biāo)尚不能全面評(píng)估組方標(biāo)準(zhǔn)湯劑的質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)旨在為姜厚樸的炮制工藝提供研究思路，不能代替臨床藥理研究，且選用的是道地產(chǎn)區(qū)四川的厚樸藥材，不同產(chǎn)地厚樸制得的姜厚樸標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量如何，有待進(jìn)一步研究。